电泳技术及临床应用

蛋白电泳技术的临床应用蛋白电泳技术和多发性骨髓瘤简介**市中心医院检验科生化室使用范围电泳技术就是利用在电场作用下，由于待分离样本中各种分子带电性质以及分子的大小，形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样本进行分离、鉴定和提纯的技术。在生化检测中常用于分离各种蛋白质！**市中心医院检验科生化室发展历史和常用类型滤纸电泳醋酸纤维膜电泳凝胶电泳1、琼脂糖凝胶电泳2、聚丙烯酰胺凝胶电泳毛细血管电泳**市中心医院检验科生化室1809年俄国科学家列伊斯发现电泳现象1937年瑞典Tiselius建立界面电泳技术，首次证明血清是由白带白和球蛋白组成，1948年获得诺贝尔化学奖1950年后，区带电泳发展到成熟1980年以来，毛细管电泳逐渐被重视电泳技术在临床中应用急、慢性疾病造血系统疾病：多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症肝脏疾病肾脏疾病中枢神经系统疾病：多发性硬化症遗传性疾病：地中海贫血代谢性疾病：糖尿病心血管疾病：心梗、动脉硬化恶性肿瘤。。。。。。。**市中心医院检验科生化室1.什么情况下必须进行电泳检测？总蛋白异常升高或异常下降A/G比例变化血液沉降速度发生异常变化出现恶性疾病征兆在免疫球蛋白定量检测中发现某一种免疫球蛋白出现大量异常增加**市中心医院检验科生化室操作步骤-仪器和电泳胶片准备**市中心医院检验科生化室操作步骤-挂缓冲条和电泳胶片**市中心医院检验科生化室操作步骤-点样**市中心医院检验科生化室操作步骤-选择电泳类型**市中心医院检验科生化室操作步骤-烘干染色**市中心医院检验科生化室操作步骤-扫描**市中心医院检验科生化室电泳结果**市中心医院检验科生化室2.血清蛋白电泳看的是什么？含量的变化:条带中蛋白含量增或减基于蛋白含量的变化,有助于我们对以下疾病的筛查:炎症、营养不良、肺气肿等性质的变化:异常条带的出现对异常条带的筛查,有助于我们检测下列疾病:骨髓瘤、巨球蛋白血症、细菌和病毒感染等*在这些情况下,必须要做其他辅助测试,比如说免疫固定,使用不同类型的抗血清对异常蛋白进行检测.(对于后期治疗有很重要的指导意义)**市中心医院检验科生化室血清蛋白电泳简介血清蛋白电泳可以对血清或其他体液中的异常蛋白质进行筛选。血清蛋白质在碱性条件下主要根据其所带电荷数将其分离成五种片段：白蛋白,α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白、每一区带含有一种或多种血清蛋白质。**市中心医院检验科生化室血清蛋白电泳简介**市中心医院检验科生化室血清蛋白成分简介—白蛋白白蛋白（Alb）由肝实质细胞合成，分子量6.64万，等电点4～5.8，半寿期（15～19天，占血浆总蛋白的40%～60。血浆白蛋白浓度可以受饮食中蛋白质摄入的影响，在一定程度上可以作为个体营养状态的评价指标，有较广泛的载体功能。正常参考值：35～50g/L。血浆白蛋白增高较少见，在严重失水时，对监测血浓缩有诊断意义。低白蛋白血症，可见于：合成减低：急、慢性肝病。营养不良或吸收不良。遗传性缺陷：无白蛋白血症。组织损伤（手术或创伤）或炎症（感染性疾病）引起的白蛋白分解增加。异常丢失：如肾病综合征、慢性肾小球肾炎、糖尿病、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、肿瘤、烧伤所致渗出性皮炎。分布异常：如门脉高压时，大量蛋白质从血管内渗入腹腔。**市中心医院检验科生化室血清蛋白成分简介—α1区α1-抗胰蛋白酶（AAT）是具有蛋白酶抑制作用的一种急性时相反应蛋白，分子量为5.5万，等电点4.8，半寿期4天，电泳中位与α1区带，是这一区带的主要组分。低血浆AAT可以发现于胎儿呼吸窘迫综合症，AAT先天缺陷易导致肺气肿和肝硬化。α1-酸性糖蛋白（AAG）早期称之为乳清类粘蛋白，分子量4万，等电点2.7～3.5，半寿期5天，电泳位于α1区带。AAG是主要的急性时相反应蛋白，在急性炎症时增高，在风湿病、恶性肿瘤及心肌梗死患者亦常增高，在营养不良、严重肝损害等情况下降低。α1-脂蛋白分子量20万。在严重肝病如肝硬化时明显降低，妊娠及高雌激素血症时可轻度增加。甲胎蛋白（AFP）主要在胎儿肝脏中合成，分子量6.9万，电泳位于α1区带。在成人AFP可以在大约80%的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现AFP阳性率为50%，在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患者亦可出现不同程度的升高。**市中心医院检验科生化室血清蛋白成分简介—α1区此区显色的条带主要是：α1-抗胰蛋白酶在一些肺病是情况下，α1-抗胰蛋白酶下降，有的时候缺如在某些严重创伤后，此区可出现明显高峰，同时α1-抗胰蛋白酶也增高注意：1.α1-抗胰蛋白酶偶尔出现双峰，它预示着既有单克隆抗体成分又有α1-抗胰蛋白酶的改变。2.一些罕见的病例中，此区带会出现另一个较宽的峰，它其实可能有甲胎蛋白的出现**市中心医院检验科生化室血清蛋白成分简介—α2区结合珠蛋白（HP）在血浆中与游离的血红蛋白结合，是一种急性时相反应蛋白，分子量8.5～40万，等电点4.1，半寿期2天，电泳位于α2区带。急性时相反应中血浆HP增加，当烧伤和肾病综合症引起大量白蛋白丢失的情况下亦可见增加。血管内溶血和溶血性贫血、输血反应、疟疾时HP含量明显下降。此外，严重肝病患者HP的合成降低。α2-巨球蛋白（AMG）是血浆中分子量最大的蛋白质，是由肝细胞与单核吞噬细胞系统中合成，分子量为62.5～80万，等电点5.4，半寿期5天，但当与蛋白水解酶结合为复合物后其清除率加速。在低蛋白血症时α2MG含量可增高，可能系一种代偿机制以保持血浆胶体渗透压。妊娠及口服避孕药时血浓度增高，机制不明。铜蓝蛋白（CER）是一种含铜的α2糖蛋白，分子量12～16万，等电点4.4，半寿期4.5天，CER也属于一种急性时相反应蛋白。在感染、创伤和肿瘤时血浆CER增加，在营养不良、严重肝病及肾病综合症时CER往往下降。妊娠期、口服避孕药时其含量有明显增加。该蛋白最特殊作用在于协助Wilson病的诊断，既患者血浆CER含量明显下降，而拌有血浆可透析的铜含量增加。**市中心医院检验科生化室血清蛋白成分简介—α2区此区主要是α2-巨球蛋白和结合珠蛋白α2-巨球蛋白增高见于肾病综合征和急性炎症，减低见于肝病导致的丢失、类风湿性关节炎和骨髓瘤结合珠蛋白增高见于急慢性炎症、外科手术、心肌梗死。减低见于溶血性贫血和肝病等**市中心医院检验科生化室血清蛋白成分简介—β1区转铁蛋白（TRF）是血浆中主要的含铁蛋白质，分子量7.7万，等电点5.7，半寿期7天，点泳位于β1区带。血浆中TRF水平可用于贫血的诊断和对治疗的监测。TRF在急性时相反应中往往降低。因此在炎症恶性病变时常随着白蛋白和前白蛋白同时下降，在慢性肝病及营养不良时亦下降，可作为营养状态的一项指标。妊娠及口服避孕药或雌激素注射可使血浆TRF升高。血红素结合蛋白（Hpx）分子量为5.7万。和游离血红素有特异结合能力，可配合结合珠蛋白对血红蛋白进行处理。当广泛溶血时，血浆结合珠蛋白耗竭，循环中游离的血红可降解为珠蛋白和血红素两部分，Hp可与血红素可逆结合，而在血循环中反复利用，这是机体有效地保存铁的又一种方式。β-脂蛋白：分子量300万。主要功能脂类的运输。肾病患者或某些肠道疾病患者，常见导致血浆蛋白丢失，由于肝细胞补偿性的合成增加，β-脂蛋白可有增加。C4：补体成分，分子量20.6，属急性时相反应蛋白之一，在炎症、创伤、心肌梗死、感染、肿瘤等情况下可见升高。**市中心医院检验科生化室血清蛋白成分简介—β2区纤维蛋白原：分子量34万，半寿期2.5天，等电点5.5，。纤维蛋白的前身参与凝血。也是急性时相蛋白之一，当机体处于炎症或损伤状态时纤维蛋白原可见增加。C3：补体系统，属急性时相蛋白。分子量18万。急性炎症时可见上升，肝脏疾病时由于肝细胞损害而偏低。β2-微球蛋白（BMG）分子量1.18万。在肾功能衰竭、炎症及肿瘤时，血浆中浓度可升高。在白血病和淋巴瘤有神经系统浸润时，脑脊液中BMG可增高。**市中心医院检验科生化室血清蛋白成分简介—γ区IgG:抗体组分之一，分子量16万，等电点6～7.3，半寿期24天。肝硬化时IgG弥散性增高，风湿病IgG可见增高，而选择性蛋白质丢失和妊娠期及高雌激素血症时IgG略有降低。IgA：抗体组分之一，分子量17万，半寿期6天。肝硬化和风湿病时表IgA明显升高。IgM:抗体组分之一，分子量90万，半寿期5天。选择性蛋白丢失时IgM增加，风湿病及肝病初期IgM可增加C-反应蛋白（CRP）：分子量12万，等电点6.2。是急性时反应蛋白的敏感指标，血浆中CRP浓度在急性心肌梗死、创伤、感染、炎症、外科手术、肿瘤浸润时迅速显著增高，可达正常水平的2000倍。结合临床病史，有助于随访病程。特别在炎症过程中，随访风湿病、系统性红斑狼疮、白血病等。**市中心医院检验科生化室血清蛋白异常成分简介—M蛋白M蛋白疾病是由于单一克隆浆细胞无线增值产生的均一单克隆蛋白（Monoclonal-peoteins）所导致的一种疾病。M蛋白疾病的M的意义是Myeloma、Macroglobulinemia、MalignatLymphoma、MonoclonalGammapathies均以”M”开头。M蛋白在电泳上表现的为高而狭窄的峰。**市中心医院检验科生化室血清蛋白电泳图谱**市中心医院检验科生化室白蛋白α1球蛋白区α2球蛋白区Β球蛋白区Γ球蛋白区血清蛋白电泳图谱—正常sebia质控**市中心医院检验科生化室异常血清蛋白电泳图谱-双白蛋白特点是出现双的白带白的区带，一般认为是遗传因素（现已经发现若干个家族显性遗传）和大剂量抗生素**市中心医院检验科生化室异常血清蛋白电泳图谱-无白蛋白特点是白带白的区带明显减少，血清含量低于1%，一般患者无症状**市中心医院检验科生化室异常血清蛋白电泳-急性炎症或应激主要特征：Alb减少或正常，α1、α2-球蛋白增高，γ-球蛋白增高不明显，当炎症转为慢性时，可明显增加。**市中心医院检验科生化室异常血清蛋白电泳-肾病型主要特征：Alb明显降低，α1-球蛋白轻度增加，α2-球蛋白明显增加，γ-球蛋白降低、正常或增高。小儿类脂样肾病时，γ-球蛋白可降低，有时可降低至零；成人肾病综合症时，γ-球蛋白通常增加，特别是狼疮性肾病。**市中心医院检验科生化室异常血清蛋白电泳-弥漫性肝损伤型主要特征：Alb明显降低,α1-球蛋白在轻度时可略增加，但肝细胞破坏严重时，则α1、α2和β球蛋白通常均降低，在胆汁郁积性肝炎时，α2和β球蛋白可增高，γ-球蛋白轻度或中度增高。**市中心医院检验科生化室异常血清蛋白电泳-肝硬化型主要特征：Alb均有不同程度的降低，α1、α2和β球蛋白正常或降低，γ-G明显增高且宽度增加，可见β-γ桥。**市中心医院检验科生化室异常血清蛋白电泳-原发性肝癌主要特征：在Alb与α1-球蛋白之间出现一小的区带，称为甲胎蛋白带。本项目试验精确地的限制这个AFP区带很难分清，需要用高分辨染色**市中心医院检验科生化室异常血清蛋白电泳—宽幅γ球蛋白血症主要特征：γ-G的宽度明显增加，呈宽幅高峰。**市中心医院检验科生化室异常血清蛋白电泳-M蛋白主要特征：M蛋白又叫异常免疫球蛋白，其区带宽度与Alb带大致相等或较其狭窄，常分布在α2至慢γ-G部位**市中心医院检验科生化室血清蛋白电泳影响因素-溶血**市中心医院检验科生化室血清蛋白电泳影响因素-血浆标本**市中心医院检验科生化室血清蛋白电泳影响因素-乳糜**市中心医院检验科生化室血清蛋白电泳异常总结**市中心医院检验科生化室免疫固定电泳免疫固定电泳技术（IFE）是一种包括琼脂凝胶蛋白电泳和免疫沉淀两个过程的操作。检测标本可以是血清、尿液、脑脊液或其它体液。IFE在临床实验室的最早应用是单克隆抗体的确定Alfonso在1964年第一个报道了免疫固定技术（IFE）。1969年Alper和Johnson相继报道了IFE在