自身抗体的应用及研究进展

自身抗体的应用及研究进展2酶联免疫吸附法（ELISA）1间接免疫荧光法（IFAIndirectFluorescentAssay）3免疫印迹法（IB）WesternblotLIA4其它：IDA、RIA等全自动自身抗体分析仪自动化检测检测定量化单个项目随时检测多个项目同时检测45-90分钟报告结果原厂质控和校正血清精确温度调控系统五点定标、三重检测25wash2wash3read3wash1read1read2disp15101520风湿病的实验室诊断血清学检查自身抗体——特异性非特异的免疫相关指标滑液分析一般的实验室检查项目项目检验方法SLE四项ANA间接免疫荧光抗DS－DNA抗体间接免疫荧光抗组蛋白抗体ELISA抗核小体抗体ELISAENA系列抗RNP免疫印迹、ELISA抗SM免疫印迹、ELISA抗SSA免疫印迹、ELISA抗SSB免疫印迹、ELISA抗JO-1免疫印迹、ELISA抗SCL-70免疫印迹、ELISA抗核糖体P蛋白免疫印迹、ELISARA三项AKA（抗角质蛋白抗体）间接免疫荧光抗RA33ELISA抗CCP（抗环瓜氨酸肽抗体）ELISAANCA四项P-ANCA（荧光模型为核周模型）间接免疫荧光C-ANCA（荧光模型为细胞质模型）间接免疫荧光MPO-ANCA（髓过氧化酶抗体）ELISAPR3-ANCA（抗蛋白酶3抗体）ELISA常见的自身抗体及其检测方法(1)(2)自身免疫肝炎七项ANA间接免疫荧光抗LMA抗（肝细胞膜抗体）间接免疫荧光ASMA（抗平滑肌抗体）间接免疫荧光抗LKM（抗肝肾微粒体抗体）间接免疫荧光抗SLA（抗可溶性肝抗原抗体）间接免疫荧光AMA（线粒体抗体）间接免疫荧光抗LSP（抗肝脏特异性蛋白抗体）间接免疫荧光RF三项RF-IgGELISARF-IgAELISARF-IgMELISA抗磷脂综合征三项（ASP）ELISAPT-IgG（凝血素抗体）ELISAPT-IgMELISA抗β2-糖蛋白1抗体ELISA常见的自身抗体及其检测方法抗Ku抗体（Ku)抗Mi抗体（Mi-2）抗PM-Scl抗体抗JO-1抗体（JO-1）多发性肌炎、皮肌炎抗线粒体抗体M2型（AMA-M2）原发性胆汁性肝硬化抗nRNP抗体（U1-snRNP）混合性结缔组织病（MCTD）抗Scl-70抗体（Scl-70）抗着丝点B抗体（CENP-B）系统性硬化抗SSB/La抗体抗SSA/R052抗体抗SS-A/R060抗体干燥综合征/系统性红斑狼疮抗核糖体P蛋白（PO）抗增殖细胞核抗原抗体（PCNA)抗Sm抗体抗组蛋白抗体抗核小体抗体抗双链DNA抗体IgG抗体系统性红斑狼疮项目名称疾病ANA谱17项（免疫印迹法）(3)常见的自身抗体及其检测方法(一)类风湿关节炎（RA）类风湿因子（RF）早期诊断的系列指标•抗RA33/36抗体•抗核周因子（APF）•抗角蛋白抗体（AKA）•抗Sa抗体•抗环瓜氨酸抗体（抗CCP）抗角蛋白抗体（AKA）•抗角蛋白抗体(AKA)，1979年Young等发现类风湿性关节炎(RA)血清中有一种能与鼠食管角质层反应的抗体，并对类风湿性关节炎(RA)具有特异性，命名为AKA。1989年Vincent等提出应将AKA更名为抗角质层抗体更为恰当。AKA可以在RA发病以前若干年出现，所以有早期诊断价值。•AKA检测方法：取6周龄雄性Wistar大鼠食管中下1/3段作为抗原，做冰冻切片，厚4μm～5μm-70℃保存备用。加1∶20稀释血清，湿盒内37℃孵育30分钟，PBS漂洗，吹干，加1∶20稀释的荧光素标记羊抗人IgG，37℃孵育30分钟，漂洗，吹干，缓冲甘油封片荧光显微镜下观察。•判定标准：以角质层出现典型的规则的线状或板层状荧光为阳性。geneFilaggrin类风湿因子（RF）抗人IgG分子Fc片段上抗原决定簇的特异性抗体,分为IgM、G、A、E型RF在RA中的阳性率为70%~８０％，是诊断RA的重要标准之一RF含量与病情的活动性和严重性成正比，持续高滴度的RF常提示RA病情活动，骨侵蚀发生率高，常可伴有皮下结节或血管炎等关节外表现，提示预后不良。类风湿因子（RF）RF并非RA独有的特异性抗体，对RA的诊断不具特异性SLE30%SS70%~90%SSc20%~30%MCTD50%~60%非风湿性疾病5%以下的正常人RF阳性不等于一定就是RARF阴性也不等于一定就不是RA人IgG兔IgG传染病亚急性细菌性心内膜炎4822传　染　性　肝　炎2421利什曼病(黑热病)10090幼虫移行症44锥　虫　病2744传染性单核细胞增多症72异常蛋白血症高球蛋白血症性紫癜10062高γ球蛋白血症1932巨球蛋白血症3022肺和肝脏疾病慢性支气管炎6218Caplan's综合征(类风湿性尘肺症)10080原因不明的纤维化肺泡炎6040Wegener's肉芽肿60原发性胆汁性肝硬化45在非RA患者RF的检出率(%)疾　　　病抗　　　原RF常用检测方法RF1：40阳性乳胶凝集法（测IgM-RF）RF256Iu/ml双抗夹心ElISA法(测总RF）RF-IgG110IU/ml-IgA18IU/mlELISA法-IgM200IU/mlRA早期诊断的系列指标敏感性特异性抗RA33/36抗体35.8%99.6%APF40%-80%70%-90%AKA40%-55%85%-95%抗Sa抗体40%-60%98.6%抗CCP46%-70%96%抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP）瓜氨酸是RA血清抗聚角蛋白微丝蛋白相关抗体的主要抗原决定簇对RA诊断具有高度特异性（98%）可在RA早期出现预测早期关节炎发展为RARA关节侵蚀破坏的早期识别及预测(二)系统性红斑狼疮（SLE）是一种临床表现有多系统损害症状的慢性系统性自身免疫性疾病，其血清有以抗核抗体为主的大量不同的自身抗体自身抗体（1）抗核抗体谱——ANA、抗ds-DNA、抗ENA抗体（2）抗磷脂抗体（3）抗组织细胞抗体——抗RBC抗体抗血小板相关抗体抗神经元抗体（4）其它——RF、p-ANCA抗核抗体（ANA）定义——以细胞核内物质为抗原的抗体临床意义①SLE的筛查抗体:95%阳性，但滴度与SLE活动性无相关阴性基本可排除SLE②阳性并非SLE特异阳性并非风湿病特异:——风湿病（SLE、SSc、SS、RA)非风湿性疾病（感染、慢肝、肺纤维化、肿瘤）服用某些药物（INH、苯妥英钠、肼苯达嗪、普鲁卡因酰胺）抗核抗体（ANA）方法——间接免疫荧光法结果判断:①滴度〉1：100为阳性②常见核型——5种不同核型的临床意义不同核膜型与抗ds-DNA有关，多见于SLE，特别是有肾炎者均质型与AHA（抗组蛋白抗体）、抗DNA有关，引起LE形成主要见于SLE、药物性狼疮斑点型与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体核仁型多见于硬皮病着丝点型多见于CREST综合征ANA常见五种核型及临床意义核膜型——与抗ds-DNA有关，多见于SLE，特别是有肾炎者均质型——与AHA、抗DNA有关，引起LE形成主要见于SLE、药物性狼疮斑点型——与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体核仁型——多见于硬皮病着丝点型——多见于CREST综合征ANA检测方法间接免疫荧光法印迹法ELISA法抗核抗体谱（ANAs）•定义：以细胞核内物质为抗原的抗体抗DNA抗体——抗ss-DNA抗ds-DNA抗组蛋白抗体——H1，H2A，H2B，H3，H4抗非组蛋白抗体——抗ENA抗体抗着丝点抗体抗核仁抗体其它——线粒体、溶酶体、高尔基体等抗ds-DNA抗体临床意义①对SLE的诊断有较高特异性②滴度与SLE活动相关，可作为病情监测及疗效观察指标③与SLE肾损害有关检测方法①放免法（Farr)——敏感，有利于早期预测检测高亲合力的抗ds-DNA②间接免疫荧光法(IF)——特异③ELISA——可检测低亲合力的抗ds-DNA有助于中枢狼疮的病情监测④金标免疫斑点法抗ENA抗体抗RNPMCTD100%阳性，且滴度高双手肿胀，雷诺现象，肌炎，指（趾）端硬化肾脏保护性抗体？抗SmSLE的标记性抗体，阳性率30%有助于早期、不典型及治疗缓解后SLE的回顾性诊断抗Sm阳性一定伴抗RNP阳性，但抗RNP阳性可单独存在抗SSA①原发性SS：60-75%SLE:40-50%②与皮损、光过敏、白细胞减少、淋巴结肿大、血管炎、紫癜相关③可造成新生儿狼疮、婴儿心脏传导阻滞抗SSB①原发性SS：40%，较抗SSA更特异②其它CTD伴抗SSB者常伴继发性SS抗ENA抗体抗Scl-70硬皮病标记性抗体抗Jo-1多肌炎/皮肌炎标记性抗体抗Rib胞浆抗原——核糖体位于胞浆内临床意义①是SLE的又一特异性抗体，阳性率10-20%②多见于SLE活动期与抗ds-DNA抗体的消长相平行但不会随病情缓解立即消失可持续1-2年后才转阴抗核小体抗体（AnuA）核小体是细胞染色质中的一种成分，它是由DNA和组蛋白以特殊的方式相连而组成，在SLE的诱导和致病中起重要作用对SLE的早期诊断有重要意义•比抗ds-DNA、抗组蛋白抗体更早出现•阳性率：50%~90%•特异性﹥98%(三)皮肌炎/多发性肌炎（PM/DM）免疫学检查•ANA•ENA——抗Jo-1阳性其它检查——肌酶谱•肌酸磷酸激酶（CPK）:MM-心肌和骨骼肌MB-心肌BB-平滑肌和脑内•乳酸脱氢酶（LDH）•谷草转氨酶（AST）•谷丙转氨酶（ALT）•碱性磷酸酶（ALP）(四)干燥综合征（SS）ANA——阳性率40%~70%ENA——抗SSA抗体阳性率70%~96%抗SSB抗体阳性率50%~87%抗α-Fordrin——对于pSS或sSS的诊断有一定意义，但特异性和敏感性并不理想。RF——阳性率75%~100%高球蛋白血症WBC下降(五)系统性硬化病（pSS）ANA——阳性率50%~55%ENA——抗Scl-70阳性率15%~40%抗着丝点抗体(ACA)阳性(六)混合性结缔组织病（MCTD）ANA阳性ENA——抗RNP高滴度阳性（七）血管炎抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）荧光图谱分型主要抗原成分胞浆型cANCA核周型pANCA蛋白酶3（PR3）髓过氧化物酶（MPO）非典型型（cANCA）不清ANCA的临床意义c-ANCA和PR3-ANCA对韦格纳肉芽肿有高度特异性（95%），敏感性80%与病情活动性相关常作为判断药物疗效和病情复发的指标p-ANCA和MPO-ANCA不如c-ANCA具有诊断特异性阳性者血管炎程度较高，其滴度也与病情活动相关主要与显微镜下多血管炎坏死性新月体肾小球肾炎变应性肉芽肿性血管炎相关（八）抗磷脂抗体综合征（APS）是一种非炎症性自身免疫病，临床上以动/静脉血栓形成、习惯性流产和血小板减少等症状为表现，血清中存在抗磷脂抗体血清学检查•抗心磷脂抗体（ACA）——IgG、IgM、IgA（ELISA）•抗β2糖蛋白1抗体（抗β2-GP1)•狼疮抗凝物（LA）——凝血酶原时间（PT）激活的部分凝血活酶时间（APTT）白陶土凝集时间（KCT）蛇毒试验（αRVVT）抗磷脂抗体抗β2-GP1抗体比LA和ACA在APS患者中更具有特异性，是导致APS的主要抗体抗β2GP1抗体只出现于自身免疫性疾病,而ACA也可出现于一些感染性疾病,如梅毒、AIDS、肝炎、结核等（九）自身免疫性肝病抗核抗体（ANA）抗肝细胞膜抗体(抗LMA)抗平滑肌抗体（ASMA）抗肝肾微粒体抗体（抗LKM抗体）抗肝-胰抗体(抗LP抗体)抗可溶性肝细胞抗体（抗SLA）抗线粒体抗体（AMA）自身免疫性肝炎（AIH）ANA抗平滑肌抗体（SMA）抗肝肾微粒体抗体原发性胆汁性肝硬化（PBC）抗线粒体抗体（AMA）——M2原发性硬化性胆管炎ANCA阳性自身免疫性肝病风湿病的实验室诊断自身抗体——特异性非特异的免疫相关指标一般的实验室检查项目•血常规•尿常规•肝功能•肾功能等注意事项选择做哪些检查项目时要重点突出避免“大撒网”解释实验结果时应考虑