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维生素C注射剂的含量分析处方组钱莺沈红霞杨优郎旭东王勇实验目的•根据含量分析，从自主设计的处方中，选出最佳处方。维生素C注射液检查•PH值:应为5.0-7.0•颜色:取本品,加水稀释成每1ml中含维生素C50mg的溶液,照紫外可见分光光度法,在420nm的波长初测定吸光度,不得过0.06.•细菌内毒素:取本品,依法检查,每1mL中含内毒素应小于2.5EU.•装量•装量差异•可见异物•不溶性微粒•无菌含量分析方法简介•碘量法•2，6-二氯靛酚滴定法•菲林B近红外分光光度法•紫外分光光度法•旋光法•双波长薄层扫描法•*HPLC法*实验采用方法碘量法•实验方法精密称取注射剂适量，加水50ml稀释至4mg/mL与丙酮2ml,摇匀,放置5min,加稀醋酸4ml与淀粉指示液1ml,用碘滴定液(0.05mol/L)滴定,至溶液显蓝色并持续30秒不褪色.每1ml碘滴定(0.05mol/L)相当于8.806mg的维生素C。2，6-二氯靛酚滴定法•实验方法精密量取注射液适量（约相当于维生素C50mg），置于100mL容量瓶中，加偏磷酸-醋酸试液20mL，用水稀释至刻度，摇匀；精密量取稀释液适量（约相当于维生素C2mg）置50mL锥形瓶中，加加偏磷酸-醋酸试液5mL，用2，6-二氯靛酚滴定液滴定，至溶液现玫瑰红色，并持续5S不褪；另取偏磷酸-醋酸试液5.5mL，加水15mL，用2，6-二氯靛酚滴定液滴定，作空白试验校正。以2，6-二氯靛酚滴定液浓度体积以及相应维生素C滴定度计算。•实验方法取两支10mL具塞比色管，其中一支加入适量的维生素C注射剂(在稀释后浓度小于50mg／L)，另一支不加；然后分别依次加入2mL的FolinB试剂，用pH3三氯乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，反应5min后，以试剂空白为参比，使用lcm玻璃吸收池在920nm波长处测定吸光度A值。平行测量3次，取平均值。菲林B近红外分光光度法菲林B近红外分光光度法•标准曲线制备分别准确配制浓度为0-50.0mg/L的维生素C系列标准工作液，按上述实验方法测定吸光度。•线性回归做标准曲线。•根据标准曲线求出维生素C含量。紫外分光光度法•实验方法在10mL比色管中依次加入pH=9.5醋酸一醋酸钠缓冲溶液2mL，1．06μg/mL甲基紫2mL；在其中一个比色管中加人一定量的维生素C注射液(在稀释后浓度小于50mg／L)，在另一个比色管中不加维生素C注射液；用二次蒸馏水定容，摇匀。用水作空白，1cm比色皿于265nm处，测定吸光度。紫外分光光度法•标准曲线制备分别准确配制浓度为0-50.0mg/L的维生素C系列标准工作液，按上述实验方法测定吸光度。•线性回归做标准曲线。•根据标准曲线求出维生素C含量。旋光法•旋光度与浓度的关系精密称取105℃干燥恒重的维生素C对照品0.4931g，0.7995g，1.0184g，1.2503g，1.5551g，2.0261g，分别置50mL容量瓶中，用5％碳酸氢钠溶液稀释至刻度，以5％碳酸氢钠溶液为空白，依法测定它们的旋光度，以旋光度对浓度作线性回归。旋光法•实验方法量取维生素C注射液适量，用5％碳酸氢钠溶液将样品稀释成浓度为25mg/mL，按上述方法进行测定，每个样品测定3次，代入直线回归方程。计算出含量。双波长薄层扫描法•实验方法•对照品溶液的制备：取维生素C对照品30mg置10mL容量瓶中，加入95％乙醇溶液适量，溶解后用95％乙醇稀释至刻度。•扫描条件的确定：双波长反射法锯齿扫描：λs254nm，λR320nm，SX=3。•线性关系考察:用微量进样器吸取对照品溶液2.0，3.0，4.0，5.0，6.0μL点样，展开缸中暗处饱和15分钟，再将点样品的一端浸入展开剂(氯仿一乙醇一冰醋酸一水=54：27：10：5)中展开，展开约10cm，取出薄层板，扫描。以对照品质量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行直线回归。双波长薄层扫描法•样品的含量测定量取维生素C注射液加入95％乙醇稀释至3mg/mL至刻度，振摇，取续滤液作为供试品溶液。精密吸取供试品溶液4.0μL，维生素C对照品溶液3.0μL，5.0μL，分别点于同一薄层板上，依法展开，扫描，用外标二点法测定样品中维生素C的含量。HPLC法•色谱条件•色谱柱：6-mm×150-mm；•流动相：溶解15.6g磷酸氢二钠和12.2g磷酸氢二钾于2000mL水中,用磷酸调到2.5±0.05；•检测波长：245-nm；•流速：1mL·min-1;•进样量：20μL;HPLC法•保留时间确定：用流动相配制维生素C标准品浓度为0.5mg/mL定位；•有关物质检测：用流动相配制空白辅料溶液，检测辅料是否有干扰；•处方样品测定：用流动相稀释处方注射液到0.5mg/mL，每次进样20μL，每个处方取样3份，每份进6针。•根据回归方程计算含量HPLC法•标准曲线制备•取维生素C标准品约221mg，精密称定，置50mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。分别精密量取储备液适量，用流动相稀释成每1mL含0.26～0.70mg的递度标准液，用上述的色谱条件测定。以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，得回归方程。(n=6)参考文献•李艳等，旋光法测定维生素c注射液的含量，辽宁药物与临床，1999，2(2);11•杨婷等.菲林B近红外分光光度法测定维生素C.分析化学研究简报.2005.11(33).1593-1595•陆茜等，紫外分光光度法测定维生素C含量，江汉大学学报(自然科学版)，2005，33(2),•仉玲等，紫外分光光度法测定维生素C注射剂的含量，安徽医药，2001,S(4)•肖本富等,高效液相色谱法测定血浆中维生素C的含量苏州大学学报(医学版)2004；24(6)•杨辉等,双波长薄层扫描法测定维生素C的含量锦州l矗学院学报，2006，27(3)•胡晓艳.HPLC测定力度申泡腾片中维生素C的含量.广东药学.2005.15(1);8-10•谭甜有,钟世顺,李丽明.HPLC测定健元片中维生素C含量的方法研究.国际医药卫生导报.2006.12(12):107-109•贾湘曼等.分光光度法测定抗坏血酸中草酸盐含量.河北医药.2005.27(9):703-704•张元广.维生素C片剂的紫外分光光度法测定.2002.8(3):26-27•徐黔江等.间接分光光度法测定抗坏血酸含量.贵阳医学院学报.2001.26(2).129-130•国家药典委员会.中华人民共和国药典.北京:化学工业出版社,2005年,二部:670•王迎春等.薄层扫描法测定维生素C片剂中维生素C的含量.数理医药学杂志.2001.14(5).166•黄胜堂等.片剂中维生素C含量的差示旋光法测定.咸宁医学院学报.1998.12(3).180-182•刘文英.药物分析.人民卫生出版社.1980.226-229•USP29–NF24Page194谢谢。。。