上海临床研究样本中心

SOP-SC-012组织样本采集标作规程版本号：2010-1上海临床研究样本中心质量管理体系文件文件名称组织样本采集标作规程编号SOP-SC-012制定人审核人批准人制定日期审核日期批准日期制定部门分发部门实施日期组织样本采集操作规程1.目的为了规范组织样本的采集操作，保证采集的组织样本的质量。2.适用范围本规程仅考虑到样本搜集的最通常情况，且涉及到通过获得手术切除的人体组织的行为，因此仅适用于医院或医学院校开展组织样本搜集工作时使用。3.参考标准与文献GB/T1.1-2000GB/T1.1-2009标准化工作导则：标准的结构和编写规则GB19489-2004生物安全通用要求《赫尔辛基宣言》4.定义和术语4.1知情同意informedconsent保证被收集者了解并理解研究的目的和内容，并自愿同意参加试验的原则。知情同意具有国际性，是对所有进行人体研究或人体取样调查的研究人员的伦理要求。在以人为研究/试验对象的科研领域，收集者必须获得研究对象/参与者的知情同意，保护被收集者合法权益的同时保护收集者免于诉讼。4.2知情同意书informedconsentform知情同意书，是每位被收集者表示自愿参加某一项试验而签署的文件。知情同意的具体体现是知情同意书的签署。4.3临床样本clinicalsamplesorbiospecimen临床样本是指由患者或正常人群提供的，专业人员采集的组织（包括病变组织和对第1页共5页SOP-SC-012组织样本采集标作规程版本号：2010-1照组织）、外周血、尿液、体液及相关衍生物（DNA、RNA、蛋白质）等。样本的采集需注意以下几点：（1）样本的捐赠必须是捐赠者知情同意的；（2）样本的采集不得影响患者的诊断和治疗；（3）采集的样本仅供科学研究，不得商业出售。5.职责6.正文6.1样本要求6.1.1入库组织样本质量要求每份样本都要有对应的《知情同意书》。每份样本都应搜集相关信息，并尽量完整。每份样本都应有病理诊断结论。尽可能在获得病变样本的同时，获得正常组织作为对照。并保存有样本的病理照片。6.1.2入库组织样本数量要求优先保证新鲜冻存样本的获得。条件允许时，保存OCT包埋冻存样本和中性福尔马林固定石蜡包埋样本。根据病理切片的结果，区分肿瘤组织和远离肿瘤的正常组织。分别取肿瘤组织或远离肿瘤的正常组织切成米粒大小。放入无RNA酶的冻存管内，然后放入液氮中迅速冷冻。新鲜冻存样本至少保留一份，每份质量不少于0.2g。如肿瘤较大，可取2-3份，取一份用于OCT包埋后冰冻保存。对于较小的组织，建议直接冻存。6.2人员资质及培训6.2.1组织样本采集人员具有专科以上学历，受过病理学和分子生物学的专业技术培训，具有基础理论知识和实际操作技能。6.2.2组织样本采集人员应经过职业道德规范的培训，切实保护被收集人的隐私，严格遵守医院和样本库的各项规范操作，工作中出现错误时必须及时向课题负责医生汇报，并作书面记录。6.2.3组织样本采集人员应保证身体健康，如有传染性疾病应离开岗位。6.2.4参与单位每年应组织安排样本采集人员参加业务更新的培训，并作好考核与记录。第2页共5页SOP-SC-012组织样本采集标作规程版本号：2010-16.2.5组织样本采集人员必须接受知情同意的伦理学培训，才能允许在文件或记录上签名。6.3器材和试剂6.3.1洁净的无RNA酶的2ml冻存管6-8个，用于保存切割获得的组织标本。经过处理的无RNA酶的刀片，剪刀和尺等；手套，口罩等标准保护器材；其他材料：记号笔，包埋盒，液氮罐（含液氮），冰及冰桶，OCT包埋剂及包埋盒，中性Formalin固定液（PBS7.4配制）。6.3.24%中性甲醛（10%中性福尔马林）固定液。一般无特殊要求的病理标本均适用。以pH7.2～7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制，此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不超过一个月。10%中性福尔马林的配方如下：甲醛（40%）100ml；无水磷酸氢二钠6.5g；磷酸二氢钠4.0g；蒸馏水900ml。6.4.标准操作流程将手术切下的新鲜肿瘤组织放入洁净容器中，原则上立即送往病理科做冰冻切片或常规病理检查，或已有明确诊断，可立即取样。在保证病理诊断的基础上，对肿瘤组织和远离肿瘤的正常组织取材，可以三种形式保存（1）新鲜组织冻存，（2）OCT包埋后冻存，（3）中性福尔马林固定。具体根据样本数量做出判断。签订《知情同意书》，确定手术时间（由临床医师完成）图一、SOP操作的流程示意图6.4.1采集人员核对病人的《知情同意书》，了解样本捐赠人的手术时间，并准备相第3页共5页SOP-SC-012组织样本采集标作规程版本号：2010-1应工具和用品。6.4.2手术切割下的组织应装入洁净的容器中，记录取样时间和捐赠人基本信息，如住院号等，并标明预测肿瘤的类型。在保证不影响病理诊断的前提下，取组织样本做相应的处理。6.4.3组织做简单的清洗处理，去除组织上的淤血，粪便或其他脏物。区分肿瘤组织和远离肿瘤的正常组织，并作相应的分割。6.4.4最少保证获得两块肿瘤样本和远离肿瘤组织的正常样本。每块的大小为0.5×0.5×0.5cm（取材大小因疾病不同而不同，这里的数据仅供参考）。6.4.5在冻存管上（贴上预先制备好的条码）分别标上T或N代表肿瘤组织和正常组织，同时在相应的样本登记单上贴上想用的条形码标签。6.4.6组织液氮处理低温冷冻：取一块肿瘤组织和远离肿瘤的正常组织，切为数十块米粒大小的组织，分装入标有T和N的两个冻存管中，放入液氮中冷冻5分钟以上。如组织有富余，可重复上述工作。6.4.7组织OCT包埋低温冷冻：取另一块肿瘤组织和远离肿瘤的正常组织，用OCT包埋，分别在冷冻切片机的冷冻头上快速冷冻后，装入预先编好号码的冻存管上，放入-80℃冰箱保存。6.4.8组织石蜡包埋：取材大小约为1×1×0.5cm，取材后迅速置于4%缓冲福尔马林中固定（PBS7.4），脱水石蜡包埋；统一编号。6.4.9病理切片：石蜡包埋蜡块制作病理切片，H&E染色后，存档保存。6.4.10一天的收集工作结束后，将所收集的组织及登记资料登记入样本信息管理系统中，并对其储存位置进行登记。6.4.11记录冰箱开启与关闭的时间。6.5质量保证6.5.1场地条件样本采集处理应有专门场地，禁止样本处理房间兼作办公使用。场地应通风采光良好，应有紫外或其他消毒设施。有上下水设施，满足冲洗样本的需要。建议使用病理取材台，并在其中内处理样本。6.5.2采集人员着装样本采集人员在样本采集过程中须穿着洁净的工作服，戴帽子和口罩，戴一次性手套。第4页共5页SOP-SC-012组织样本采集标作规程版本号：2010-1第5页共5页6.5.3采集所用器材设备接触组织样本的设备都应经过RNA酶的灭活处理。切割样本所使用的刀片应锋利，不可使用镊子或剪刀等会导致样本受到挤压撕扯的工具处理样本。6.5.4核对病人《知情同意书》上的签字，确保签字的真实，确信病人已经了解知情同意的内容。6.5.5组织样本采集务必记录所采集样本的离体时间，对于微创手术来说，应询问手术医生，了解组织脱离后在体腔内的存留时间。6.5.6组织样本取材部位的确认原则上通过手术方法获得的样本必须首先完整地送交病理科，不影响对捐赠人的手术结果判断。如已有明确诊断，在保证石蜡组织诊断的前提下直接进行取材，，取材时避免取肿瘤坏死部位和不具有代表性部位的组织。6.5.7组织的处理每次处理样本前，都应清洁操作台面。确保所使用的器材洁净，经过RNA酶灭活处理。污染的洁净冻存管保存所采集的样本。记录：准确如实地记录取样时间，样本处理时间和样本放入深低温保存的时间。记录样本的初始编号和对应分装样本容器的编号，记录操作人员名称。