霉菌的形态观察

霉菌的形态观察姓名：贾晓霖学号：201000140032班级：生科10.1同组人员：李江湲程子修洪钧烨摘要：本实验目的在于学习并掌握观察霉菌形态的基本方法，了解四类常见霉菌的基本形态特征；实验采用载玻片培养观察法，运用小室培养，在制好的PDA培养基薄片（1cm×1cm）上接种、培养好后镜检观察；四种霉菌存在共性的特征，又有各自的特点，霉菌菌丝体及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。根霉的菌丝无隔膜、有分枝和假根，毛霉菌丝无隔、无假根或匍匐菌丝，曲霉菌丝有隔膜、有大量的孢子梗，菌丝之间有横隔膜、顶端以特殊的对称或不对称的扫帚状的方式分支,称为帚状枝。关键词：PDA培养基、小室培养法、霉菌形态观察前言：霉菌（molds）是丝状真菌的俗称，意即“发霉的真菌”，它们往往能形成分枝繁茂的菌丝体，但又不象蘑菇那样产生大型的子实体。在潮湿温暖的地方，很多物品上长出一些肉眼可见的绒毛状、絮状或蛛网状的菌落，产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子，不同的霉菌可产生节孢子、厚垣孢子、孢囊孢子和分生孢子4种无性孢子，有性孢子为卵孢子、接合孢子、子囊孢子和担孢子。霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多(约为3～10μm)，常是细菌苗体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、玻璃纸培养观察法、载玻片培养观察法。本实验采用最后一种方法，这种方法既可以保持霉菌自然生长状态。1.实验目的1.1学习并掌握霉菌形态观察法1.2了解四类霉菌的基本形态2.材料和方法2.1材料2.1.1菌种：曲霉（Aspergillusniger）青霉（Penicilliumsp.）根霉（Rhizopussp.）毛霉（Mucorsp.）2.1.2试剂：PDA培养基200mL、30mL甘油2.1.3仪器用品：天平，滤纸，称量纸，玻璃棒，三角瓶，移液管，加热器，漏斗，烧杯，纱布，培养皿11个，载玻片9个，盖玻片36个，U型玻棒9个，解剖刀，镊子，接种环，酒精灯，显微镜，牛皮纸等2.2方法2.2.1培养小室准备及灭菌2.2.1.1在一个培养皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再放一U形玻璃棒，其上放一洁净载玻片，上面放四块盖玻片，盖上皿盖。2.2.1.2依上法再做九个培养皿，将十个培养皿和两个空培养皿包扎后于110℃灭菌30min，烘干备用。2.2.2PDA培养基的制备2.2.2.1将马铃薯去皮，切成块，称取30g煮沸半小时，然后趁热用两层纱布过滤，再用六层纱布过滤，制得马铃薯汁。2.2.2.2向制得的马铃薯汁中加糖和琼脂条，加水加热溶化后，补充水至150mL，放入灭菌锅110℃灭菌30分钟。2.2.3琼脂块的制作与接种培养2.2.3.1在无菌箱中，取已灭菌的马铃薯琼脂培养基注入另两个已灭菌培养皿中，使之凝固成薄层。用解剖刀切成1cm×1cm的方形琼脂块，并将其移至上述小室中的载玻片上，载玻片两端各放置一块。2.2.3.2无菌操作用接种环挑取很少量的孢子接种于琼脂块的边缘上，用无菌镊子将盖玻片覆盖在琼脂块上。2.2.3.3用移液管在平皿的滤纸上加3ml灭菌的20％甘油（用于保持平皿内的湿度)盖上皿盖，28℃培养。2.2.4镜检从培养箱中取出载玻片在低倍镜下观察四种霉菌菌丝体及孢子的形态特征，必要时换高倍镜。3结果与分析3.1结果3.1.1显微镜下四种霉菌的形态特征图根霉形态观察（10×40）青霉形态观察（10×40）孢囊孢囊梗匍匐菌丝假根孢子隔分支小梗毛霉形态观察（10×40）曲霉形态观察（10×40）曲霉孢囊曲霉足细胞3.1.2四种霉菌的菌落特征毛霉：菌落表面为粘稠的棉絮状，白色，质地疏松，背面为淡黄色青霉：菌落絮状外周边缘为白色，内层为暗绿色，不透明，形成的菌落比较疏松曲霉：菌落炭黑状，很多黑色小粒堆叠在一起，质地疏松根霉：菌落绒状，内层为暗灰色，外层为白色，质地疏松3.1.3四种菌的形态观察结果根霉：菌丝无隔、有假根、匍匐菌丝，假根着生处向上有直立的孢囊梗，其顶端膨大成孢囊，包囊底部有半球形胞轴。毛霉：孢囊梗直接从菌丝出，顶端生成孢囊。曲霉：菌丝有隔，气丝分化成孢子梗（无隔），顶端膨大成孢囊，孢囊表面可辐射生出一层或两层小梗，小梗上有一串串分生孢子。分生孢子梗生于足细胞上，并通过足细胞与营养菌丝相连。孢囊孢囊梗孢囊孢子梗青霉：菌丝有隔，分生孢子丝（有隔），顶端不膨大，没有孢囊，多次分支形成几轮对称或不对称的小梗，小梗顶端有孢子。3.2实验结果分析3.2.1菌落表面常呈现肉眼可见的不同结构和色泽特征，这是因为霉菌形成的孢子有不同的形状、构造和颜色，有的产生水溶性色素可分泌到培养基中，使菌落背面出现不同颜色。3.2.2毛霉与根霉很像，但是毛霉没有假根和胞轴。3.2.3由曲霉图可以看出它的营养菌丝体透明；具有横隔，分支相对较少，具有足细胞；黑曲霉的孢子梗是辐射状排列,呈冠状，分生孢子黑色不透明，表面粗糙。3.2.4由根霉图可以看出它的营养菌丝体透明、无隔，菌丝体交错勾连在一起，呈树根状，气生菌丝发达；营养菌丝体上产生匍匐枝，匍匐枝的节间形成特有的假根，与假根相对处着生孢囊梗，梗的顶端膨大形成孢子囊，囊内产生孢子；孢子囊表面光滑，孢子呈椭圆形。3.2.5由青霉图可以看出它的菌丝体有隔并且透明，多次分支形成几轮对称或不对称的小梗，呈扫帚状，小梗顶端有孢子。4.小结4.1实验中要注意的问题：①挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态；加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。②接种量要少，尽可能将分散的孢子接种在琼脂块边缘上，否则培养后菌丝过于稠密影响观察。4.2在滤纸上滴加甘油使滤纸保持湿润的状态，以保证霉菌生长所需的湿润环境；实验操作过程中，尤其是镜检时不要碰到载玻片上的菌丝，否则会污染镜头并且破坏了放线菌的自然生长状态。5.思考题曲霉和根霉在形态特征上有何区别？答：根霉菌丝体产生匍匐枝，匍匐枝末端长有假根，但是毛霉却没有。6.参考文献【1】沈萍、陈向东《微生物学实验》高等教育出版社第四版P74～75【2】沈萍、陈向东《微生物学》高等教育出版社第二版P382～384附：PDA培养基配方马铃薯200g葡萄糖20g琼脂22-25g水1000mLpH自然