微生物检验重点知识

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微生物知识要点:一、葡萄球菌:1致病因素:血浆凝固酶;溶血素;杀白细胞素;肠毒素;表皮剥脱毒素;TSST-1;耐热核酸酶;葡激酶;透明质酸酶;脂酶。2临床意义:疖痈等;内脏感染肺炎、脓胸、中耳炎、脑膜炎、心包炎、心内膜炎;全身感染败血症、脓毒血症;(毒素相关)食物中毒;烫伤样皮肤综合症;毒性休克综合症;假膜性肠炎。3鉴定:细菌和菌落形态;生化实验:触+微阳性;链+肠阴性葡:杆菌肽R,呋喃唑酮S金黄色葡萄球菌特征:普通平板-脂溶性黄色色素;血琼脂-β溶血;血浆凝固酶+;耐热核酸酶+甘露醇发酵+2).如何确定从标本中分离的细菌为葡萄球菌?并确定其有无致病性。答:①直接镜检,经革兰染色后镜检发现革兰染色阳性呈葡萄状排列的球菌,可初步报告疑为葡萄球菌,需进一步分离培养鉴定。②分离培养:血培养需经增菌后转种血平板进一步鉴定,若无细菌生长,需连续观察7天,并以血平板确定有无细菌的生长。脓液、尿道分泌物、脑脊液沉淀物可直接接种血平板,37℃过夜,可形成直径约2-3mm、产生不同色素的菌落。金葡菌菌落周围有透明溶血环。③试验鉴定:血浆凝固酶试验,甘露醇发酵试验,耐热核酸酶试验,肠毒素测定,SPA检测。致病性葡萄球菌菌落周围有透明溶血环,血浆凝固酶试验阳性,甘露醇发酵试验阳性,耐热核酸酶试验阳性,SPA检测有A蛋白的存在。二、链球菌:1致病因素:M蛋白;脂磷壁酸;透明质酸酶;链激酶;链道酶;链球菌溶血素;致热外毒素。2临床意义:A群:化脓性炎症;猩红热;风湿热;急性肾小球肾炎;IIIII肺炎链球菌:大叶性肺炎;中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、脑膜炎、心内膜炎。3鉴定:形态。。培养+血清等,血琼脂-灰白色,半透明或不透明表面光滑小菌落;肺炎链球菌48h呈脐窝状。几中链球菌特征:A群:血平板β溶血;杆菌肽-敏感B群:血平板β溶血;杆菌肽-耐药;CAMP+;胆汗七叶苷(—);马尿酸水解试验(+)草绿色链球菌:血平板α溶血;optochin耐药;胆汗七叶苷(—);肺炎链球菌:血平板α溶血;optochin敏感,菊糠分解(+),胆汗溶菌(+),荚膜肿胀实验(+)三、大肠埃希菌1致病因素:侵袭力(K抗原和菌毛);内毒素;肠毒素(LT,ST)2临床意义:肠道外感染(泌尿系统感染为主,腹膜炎,胆道感染,肺炎等;肠道感染:EHEC、ETEC、EPEC、EIEC、EaggEC3鉴定:普通平板(湿润、光滑、灰白中等大小菌落)有便毛,有动力,葡萄糖发酵(+),硝酸盐还原(+),氧化酶(—),触酶(+)中国兰平板(蓝色),伊红美蓝(紫黑色),麦康凯和SS(红色)四、志贺菌属1致病因素:侵袭力(菌毛);内毒素;外毒素(志贺毒素ST,也称Vero)2临床意义:1)急性细菌性痢疾:腹痛腹泻脓血粘液便,里急后重,发热,便中带血,粘液和WBC;中毒性菌痢多见于小儿,2)慢性细菌性痢疾;3)携带者3鉴定:葡萄糖发酵(+),硝酸盐还原(+),氧化酶(—),触酶(--)接种SS和麦康凯平板,分离出无色、透明的小菌落为可疑志贺菌。血清学鉴定。5.简述对疑似痢疾患者进行病原学诊断的常规及快速方法。答:常规鉴定:①初步鉴定②最后鉴别③鉴别试验④血清学鉴定⑤非典型菌株可用传代法及毒力试验进行鉴定。快速诊断:①直接凝集②免疫荧光菌球法③协同凝集试验④乳胶凝集试验⑤分子生物学方法五、沙门菌属1致病因素侵袭力(Vi抗原),内毒素,肠毒素。2临床意义胃肠炎(食物中毒);菌血症和败血症;肠热症(伤寒副伤寒)3鉴定:接种SS和麦康凯平板,分离出无色、透明的小菌落为可疑沙门氏菌,需进一步生化反应鉴定,3).如何根据O抗体和H抗体的变化特点判断肥达试验的结果?答:若O、H凝集效价均超过正常值,则肠热症的可能性大,若两者均低,肠热症的可能性小,若O不高H高,可能预防接种或非特异性回忆反应,若O高H不高,则可能感染早期或与伤寒沙门菌O抗原有交叉反应的其他沙门菌感染。4).对肠热症患者进行微生物学检查时标本采集应注意什么?答:根据不同的疾病、不同的病程取不同的标本。肠热症第1、2周取外周血,第2、3周取粪便、尿液,全程可取骨髓分离培养细菌。六、铜绿假单胞菌其生物学特性主要有4℃不生长,而42℃生长。在血琼脂、麦康凯培养基上均可形成5种不同形态的菌落,在普通培养基上可产生多种色素。鉴定:革兰阴性杆菌,葡萄糖氧化发酵(氧化型),动力阳性,氧化酶(+),触酶(+),专性需氧,营养要求不高,麦康凯上生物良好,初始分离培养基特征性菌落(扩展性,平坦,具有锯齿边缘,金属性光泽,产生蓝绿色色素,玉米面气味)42度长,4度不长。七、嗜血杆菌简述流感嗜血杆菌的生物学特点.答:革兰阴性短小球杆菌,无芽胞、无鞭毛、不能运动,多数菌有荚膜。需氧或兼性厌氧最适生长温度35℃,最佳培养基是巧克力琼脂。临床意义:脑膜炎、鼻咽炎、关节炎、心包炎,鼻窦炎,中耳炎鉴定:培养特性,5-10%CO2,X因子,V因子;血琼脂:卫星现象;巧克力平板,露滴状菌落。八、霍乱弧菌霍乱患者为什么会出现剧烈腹泻及严重脱水的症状?答:霍乱弧菌可产生致泻性极强的霍乱肠毒素,该毒素由1个A亚单位和5个相同的B亚单位组成,B亚单位使毒素分子与真核细胞上的受体结合,A亚单位具有酶活性功能。A亚单位进入细胞后,激活腺苷环化酶,令胞内cAMP水平增高,导致肠粘膜细胞内的水、氯和碳酸氢钾等过度分泌到肠腔,同时钠的吸收减少,导致严重的腹泻和呕吐.九白喉棒状杆菌简述白喉棒状杆菌的致病过程。答:白喉棒状杆菌存在于白喉患者的喉头气管及鼻腔粘膜,有时皮肤、结膜等部位也可见到。传染源为患者及带菌者,细菌多随飞沫或污染的物品传播,感染后白喉棒状杆菌在鼻咽部粘膜处繁殖并产生外毒素,引起局部炎症和全身中毒症状。白喉杆菌在侵犯局部增殖,产生外毒素致病2.简述白喉杆菌体外毒力试验的原理、方法及结果判断。答:①琼脂平板毒力试验。将含有20%牛血清肉汤琼脂分注与平皿中,每只平皿10ml,50℃冷却,在凝固之前,将浸有白喉抗毒素血清稀释液的滤纸条沉于琼脂内,制成平板(Elek平板)。在与滤纸条相垂直的方向将待检菌画直线接种,划线宽度约6-7mm,两端与皿壁连接。同时,与之相距10mm处平行划线接种一标准产毒菌株,作为阳性对照。37℃培养24-48小时,若菌苔两侧出现斜向外延伸的乳白色沉淀线,并与其邻近的标准产毒株的沉淀线相吻合,则为产毒株。②SPA协同凝集试验:将白喉抗毒素IgG先吸附在SPA上,再加入待检菌培养物上清液。若有白喉外毒素,则与SPA-IgG结合出现可见的凝集反应。③对流电泳:将已知的白喉抗毒素和待检菌培养液分置琼脂板两孔之中,电泳30min后,若两孔之间出现白色沉淀线,表明待检菌为产毒株。鉴定:革兰染色阳性,有明显的异染颗粒的杆菌,无荚膜,无鞭毛,菌体长短不一,直或微弯,一端或两端膨大,排列呈V,L等文字形,。亚碲酸钾血培养出黑色菌落,有或无狭窄B溶血,菌落灰白色,隆起,湿润。九结核杆菌.致病机制:1荚膜。2脂质:包括索状因子,磷脂,硫酸脑苷脂,蜡质D。3蛋白质与蜡质D结合使机体产生超敏反应,引起组织坏死和全身中毒症状。2.结核分枝杆菌细胞壁中脂质含量高,这一特点有何意义?答:结核分枝杆菌胞壁含脂质多,与其染色性、抵抗力、生长速度及致病性等特性有密切关系,脂质中的分枝菌酸使其具有抗酸性;细胞壁含大量脂质,可防止菌体内水分的丢失,故对干燥的抵抗力特别强;同时影响营养物质的吸收,故生长缓慢,且脂质中的磷脂、索状因子、蜡质D、硫酸脑苷脂等毒性成分以不同机制致病。3.简述从标本中检验结核分枝杆菌的方法。答:1.显微镜检查(1)直接涂片染色镜检:是一种临床常用的简易快速的检查方法。直接涂片法是用接种环取病人痰液中浓厚部分或离心沉淀(3000r/min,20min)的尿沉淀物2—3接种环涂片,涂片要厚。经自然于燥和火焰固定后进行齐-尼抗酸染色,或作金胺“o”荧光染色。前法用油镜检查,后法用荧光显微镜高倍镜检查。镜检时应仔细查遍整个涂片或观察至少100个视野。结核分枝杆菌抗酸染色后呈红色,其它细菌和细胞为蓝色。经荧光染色的结核分枝杆菌,在黑色背景中呈亮黄色。涂片镜检结果应报告“找到抗酸性杆菌’’或“未找到抗酸性杆菌”,而不能报告“找到结核分枝杆菌”。(2)浓缩集菌涂片检查法:如果直接涂片镜检不易检出结核杆菌,应采用浓缩集菌涂片检查法,以提高结核杆菌的检出率。所谓浓缩集菌涂片即为将采集标本离心,取沉淀涂片,或是采用漂浮集菌法,集菌后标本经反复多次使涂层加厚,一般取3—4个接种环,涂抹面积大约直径在15mm即可,干燥固定后染色镜检。2.核酸检测用PCR法快速诊断结核分枝杆菌感染。设计结核分枝杆菌特异rRNA片段的引物进行扩增,然后用结核分枝杆菌rRNA序列特异的DNA探针与之杂交。PCR技术的特异性与敏感性均大于95%。3.抗PPDIgG的检测用ELlSA法检测患者血清中抗PPDIgG,可作为活动性结核分枝杆菌感染的快速诊断方法之一。肺结核病人的血清阳性率为80%—90%。4.简述抗酸染色的步骤及结果,并举出两种抗酸菌。答:①初染:石炭酸复红加温染5min②脱色:3%的盐酸酒精脱色1min③复染:美兰染1min结果:抗酸菌为红色,非抗酸菌为蓝色。结核分枝杆菌与麻风分枝杆菌均为抗酸菌5.一患者怀疑患有肺结核,如何进行微生物学检查?(包括标本采集至报告结果的全过程,检查方法应有传统方法和快速检查方法。)答:1)标本采集:根据感染部位不同,采集不同的标本。2)标本直接检查:①显微镜检查②核酸检测③抗PPDIgG的检测。3)分离培养与鉴定4)药物敏感性试验5)免疫学诊断6)动物接种梅毒螺旋体获得性梅毒(TP):一期:硬下疳;二期:梅毒疹;三期皮肤黏膜溃疡,内脏器官肉芽肿。标本直接检测1、暗视野显微镜检查2、免疫荧光染色3、镀银染色法4、核酸检测。抗体检测1、性病研究实验室试验(VDRL)2、快速血浆反应素环状卡试验(RRR)3、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)2、荧光梅毒螺旋抗体吸收试验FTA-ABS;荧光梅毒螺旋抗体双染色试验FTA-ABS-DS;抗梅毒螺旋抗体的微量血凝检测MHA-TP;抗梅毒螺旋抗体明姣颗粒凝集试验TPPA;ELISA1.比较支原体与细菌L型的主要区别。(表格自制)【生物学性状与致病性--细菌L型--支原体】--{培养特性--需要高渗---需要胆固醇}{菌落--油煎蛋状,0.5-1mm---油煎蛋状,0.1-0.3mm}{形态--高度多形态性--高度多形态性}{大小--大小为0.6-1.0µm--大小为0.2-0.3µm}{细胞膜--不含固醇--含高浓度固醇}{细胞--缺乏或无--无}{细胞壁缺失的原因--青霉素、溶菌酶和胆汁等作用所致,去除条件可恢复--遗传}{通过滤器--能通过滤器--能通过滤器}{对青霉素的作用--抵抗--抵抗}{液体培养--有一定混浊度,可附壁---混浊度极低}{致病性--引起慢性感染,如骨髓炎、尿路感染和心内膜炎等--原发性非典型性肺炎,泌尿生殖道感染和条件致病}1.简述衣原体独特的发育周期。答:沙眼衣原体严格寄生在细胞内,有独特的发育周期,在其繁殖发育的周期内,可见两种形态,原体及始体。原体具有感染性,通过表面受体吸附于易感细胞并被细胞吞噬进体内。原体在吞噬体内体积增大进入增殖状态,形成始体。始体在吞噬体内以二分裂的形式进行分裂,繁殖出子代并成熟为原体,从易感细胞中释放出来,再感染新的易感细胞。2.沙眼的病原体及其传播方式。答:沙眼的病原体是沙眼衣原体,传播方式主要通过眼-眼或眼-手-眼传播3.衣原体有哪些重要特点?答:①形态多为球型,革兰染色阴性原体小,介于细菌和病毒之间,始体大,大小与细菌相似。②代谢,缺乏能量来源,故严格的细胞内寄生③有独特的发育周期④有DNA和RNA两种核酸⑤由肽聚糖组成的细胞壁,对多种抗生素敏感。4.衣原体引起哪些重要疾病?答:能引起人类的沙眼、泌尿生殖道的感染和呼吸系统等疾病2.简述白色念珠菌感染的微生物检查方法及结果分析。答:①直接镜检可见革兰阳性、圆形或卵圆形芽生孢子及假菌丝②分离培养在沙氏培养基上形成乳白色或淡黄色类酵母菌落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