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第四节贝壳丝状体的培育丝状体培育的类型：（1）贝壳丝状体：果孢子钻入贝壳之中，在壳内萌发生长，形成的丝状体。（2）自由丝状体：果孢子直接附着于玻璃容器的内壁上面，或附着在人工培养基以及琼胶培养基的表面进行培养，发育成的丝状体。一、培养贝壳丝状体的基本设施1、育苗室（1）地点：因地制宜，抽水方便，比重稳定，远离码头，交通方便，有淡水水源。（2）大小构造：东西走向。育苗室的大小应视养殖面积而定，一般为300－500m2。育苗室高度在3米以上。（3）采光：北方以天窗为主（天窗大小约占育苗池面积的一半），侧窗为辅南方以侧窗为主（侧窗面积约占四周墙面积的1/3），天窗为辅晴天、阴天光强差异大，需在天窗和侧窗安装白布拉帘，便于调光。天窗和侧窗最好安装毛玻璃或在普通玻璃上涂以白漆或石灰，防止直射光照射2、育苗池：3．沉淀池（蓄水池与过滤池）：生产上常用黑暗沉淀法来净化海水池容量大小以总用水量的2倍为宜所有排水管系统应以塑料管为主平面池：长6－7m，宽1.5-1.6m，深20－30cm立体池：长6－7m，宽1.5-1.6m，深50－70cm二、采果孢子：1、生长基质的准备：贝壳：选用壳宽5cm以上的新文蛤壳，或牡蛎壳处理：淡水浸泡（或埋入沙里，使壳上残肌腐烂）→暴晒→消毒（50ppm有效氯的漂白粉消毒几小时）→打孔→大中小分开→串绑（以5－6cm壳距，大文蛤壳6对，牡蛎壳8－9对，每串长度不超过35cm）→淡水冲洗→使用2、种菜的选择与处理：（1）优良的藻种：藻体大，完整，色泽光亮，无硅藻等附着物，具有大量成片的果孢子囊区（2）选藻种的时间：生产上往往在12－1月份进行选藻，果孢子囊成熟的适宜温度为18－20℃，在种藻选择前要停止大量剪收，让果孢子囊大量形成。选藻时间一般在上午进行（3）阴干处理：种藻选好后，用海水洗干净，挂在竹帘上，放在较通风处一个晚上，3－4成干就可以（4）种菜的放散特点：质量好的种菜可以多次放散（连续），一般第一次放散量比较少，第2－3次放散量比较大，每次放散后的种菜可以再阴干，再放散、再采苗（5）冷冻菜：为避免后期种菜质量差或没有种菜，可提早选择种菜，放入冰箱冷冻保存。方法：种藻选好后，阴干至7－8成干，装入塑料袋，压去袋中空气，将袋口扎紧，送入冷库，在－15——－20℃冷冻备用用冻菜采苗注意事项：1）第一次放散的果孢子液不要，阴干后，第二次放散的方可采用；2）冻菜阴干时，不能晒太阳，放在通风处阴干，新鲜的种菜可以晒太阳3、采果孢子的时间：坛紫菜：12月－1月，最迟不超过3月，生产上有的在12月份采，适宜的采苗温度11－17℃条斑紫菜：4月份，水温15－20℃4、采果孢子的方法：（1）平面采果孢子：将贝壳鱼鳞状平铺在育苗池底部优点：采苗均匀，密度容易控制。（2）立体吊挂采果孢子：将已绑结成串的贝壳用小竹杆垂挂在池中，进行多层立体采苗优点：采苗速度快缺点：密度不易控制（3）先平面采果孢子，后立体吊挂：果孢子采苗一周后绑结成串，进行垂挂培育。5．果孢子液的制备和投放密度：阴干的种菜＋定量海水→检查放散量→筛绢网或纱布过滤→果孢子液果孢子液的浓度：果孢子液取1mL，稀释到100mL，取50uL计数坛紫菜：萌发率25－30％计，果孢子投放密度以500－600个/cm2（丝状体密度150－200个/cm2）为宜条斑紫菜：萌发率30－50％计，果孢子投放密度以300－400个/cm2若种菜新鲜、萌发率高，投放果孢子的密度可相对少一些；若种菜差，萌发率低，投放量可适当增加投放密度：指单位面积的贝壳上投放的果孢子数目。（1）平面采苗：把贝壳象鱼鳞似的排在池底，然后根据计算出来的应投果孢子数，取果孢子液均匀地喷洒在池里例：池长700cm，宽160cm，萌发率40％，要求实际萌发数200个/cm2，果孢子液2万个/ml。求这个池子共需要多少毫升果孢子液？解：萌发率＝萌发数/投放数池子面积＝长×宽＝700×160果孢子的投放密度（个/cm2）＝萌发数/萌发率＝200/40％＝500（个/cm2）一个池子所需的果孢子数＝700×160×500个一个池子所需的果孢子液（ml）＝700×160×500/20000＝280ml（2）立体吊挂采苗：果孢子液喷入后一定要搅动池子，使果孢子均匀地分布在水体内，这样使上下贝壳果孢子附着均匀例：池长700cm，宽160cm，深50cm，萌发率30％，要求实际萌发数150个/cm2，壳距6cm，果孢子液2万个/ml。求这个池子共需要多少毫升果孢子液？解：池子体积＝长×宽×深＝700×160×50cm3每cm2投放数＝萌发数/萌发率＝150/30％＝500个每cm3投放数＝500/6＝83.3个/cm3（或者用每cm2投放数/立体吊挂的层数）一个池子所需果孢子数＝池子体积×每cm3投放数=700×160×50×83.3个一个池子所需的果孢子量（ml）＝一个池子所需的果孢子数/20000＝？ml6、采果孢子应注意的问题（1）水质要求：比重1.010－1.025pH8.0－8.2（2）光照条件：2000－3000lux避免强光直射（3）水温条件：一般不用考虑三、丝状体的培育管理1、培育条件：（1）丝状藻丝生长阶段：果孢子萌发钻入贝壳的速度：1天有个别的果孢子萌发钻入贝壳内，3天左右有半数的果孢子钻入壳内，随着时间的延长，萌发钻入的个数也增加，一周基本都已钻入壳内。大约20天左右肉眼可以看到壳面的丝状体藻点。坛紫菜：3－6月，光照2000－3000lux，全日照N：10－15ppm，P：1ppm条斑紫菜：5－7月上旬，光照2000－3000lux，全日照N：10－15ppm，P：1ppm培养条件：（2）膨大藻丝生长阶段：此时正酷暑炎热季节，发病严重坛紫菜：7－9月上旬，26－27℃，1000－1500luxN：10ppm，P：1ppm条斑紫菜：6－8月上旬，28－30℃，1000luxN：10ppm，P：1－2ppm（3）双分孢子形成：坛紫菜：8月中旬到9月上旬，28－30℃，500－750lux，光时8－10hN：1－2ppm，P：15－20ppm条斑紫菜：9月上旬到9月底，23－25℃，750lux，光时8－10h2、管理：（1）洗壳、换水：洗壳的方法有两种：1）手洗：用纱布或软质泡沫塑料洗文蛤壳2）喷洗：用水管激烈喷水冲洗贝壳面，牡蛎壳小，常用此法洗壳的次数主要根据贝壳表面的硅藻繁殖生长情况及清洁度而定•注意事项：•a.开始缩光，坛紫菜壳面长出绒毛，不能洗•b.丝状体耐干燥的能力差，在洗壳和换水的时候要防止干燥换水：一般和洗壳同时进行，可以采用不脏、不洗、不换水原则注意事项：a.注意水温、比重的变化；b.形成双分孢子时，不要换水，防止已经形成的双分孢子提前放散（2）倒置、移位：倒置：平面培养不存在倒置，立体吊挂培养时，要进行倒置，轮流受光，使下层贝壳丝状体移至上层后，受光条件改变，生长加快，待生长均匀时，再倒回来，根据生长情况，一般一个月倒置一次移位（水平方向）：育苗池不同位置的贝壳丝状体受光不同，要把光照弱的一串贝壳或一杆贝壳移到光线强的地方生长，使整个池子的贝壳丝状体生长均匀（3）调节光照：根据丝状体不同生长阶段对光照的要求，进行光照调节。可用白布窗帘遮窗，缩光时，可用大的黑布盖在池子上或用黑布遮窗，每天光照时间控制在8－10h，其余时间处于黑暗。若无照度计测量光强，可根据壳面硅藻的生长情况和贝壳丝状体色泽的变化来进行调节：壳面生长绿藻：表明光照过强壳面长期不长硅藻：表明光强太弱凡是早期在10天以上，中期在20天以上，壳面上长一层黄色“油泥”（硅藻），缩光后，壳面上不再长油泥，就说明这样的光照符合要求3、促进贝壳丝状体成熟和放散的技术措施（1）促熟：条斑紫菜：①缩光和减光：光时8－10h，光强500－1000lux②保持较高水温（23℃）：①增施磷肥或单施磷肥（不施氮肥）：磷肥浓度可提高到15－20ppm。②缩短光照时间或减弱光照强度，每天光照时间8－10h③保持较高的育苗水温（28℃）④下海促熟坛紫菜：（2）促放：条斑紫菜：①降温处理：从24℃逐步降到20℃，每天降1℃，光照在300lux以上②换水处理：在降温处理时，需换入新鲜海水，一般每天换水一次，就可达到大量放散坛紫菜：①下海刺激：大潮时，在采苗前一天下午，把贝壳装进网袋，用船运到外海，把贝壳挂在船边，船停在海上，让水流刺激一个晚上，第二天早上取回即可放散②室内流水刺激：在室内安装造成水流的动力装置，形成人工水流（模拟海区水流）刺激贝壳丝状体，促使壳孢子在短期内达到集中大量放散（1）抑制贝壳丝状体成熟的措施：①恢复全日照和加强光照强度②停止施肥（坛紫菜）③低温处理丝状体（2）抑制壳孢子放散的措施：①黑暗处理②不干燥脱水处理③低温处理4、抑制贝壳丝状体成熟和放散的技术措施四、观察贝壳丝状体和检查成熟度的方法1、直接镜检：一般在采果孢子后1－2周，在丝状体分枝生长不是很多（很密）时，直接取贝壳，置于显微镜下，借贝壳表面的反光作用，观察丝状体在贝壳内的自然生长状况计算萌发率时常用（一）观察贝壳丝状体生长状况2、溶壳检查：丝状体只生长在贝壳表面很薄一层的CaCO3内，因此只要把表层CaCO3去掉，就可看到丝状体溶壳剂：7％醋酸液（7份醋酸，93份海水）柏兰尼液：10％HNO34份95％酒精3份0.5％铬酸3份（二）贝壳丝状体成熟度的鉴别方法：1、肉眼观察：1）贝壳丝状体壳面颜色的变化：丝状藻丝膨大藻丝双分孢子形成坛紫菜鲜红色深红色土黄色条斑紫菜紫红色深紫红色鸽子灰色2）壳面有无绒毛出现（坛紫菜）：有—成熟3）扣壳法检查放散量：把成熟的贝壳丝状体经流水刺激一个晚上，第二天早上把贝壳凹面朝下置于碗内，中午取出贝壳，若碗底有一层粉红色的薄层，就说明壳孢子正大量放散，丝状体已成熟2、溶壳检查：显微镜下，一个视野内双分孢子占膨大细胞比例：40－60％好10－30％中10％差3、放散量检查：日放散量=放散量/壳/天（文蛤壳）=壳孢子放散量/斤壳/天（牡蛎壳）文蛤壳放散量：万级、十万级、百万级、千万级，生产上十万级以上就可准备采苗牡蛎壳放散量：0.8～1亿个壳孢子/斤壳，每亩8－10斤牡蛎壳复习思考题1、促使及抑制贝壳丝状体成熟和放散的措施有哪些？2、在进行贝壳丝状体培育时，常规的管理措施有哪些？3、如何检查贝壳丝状体的成熟度？作业：要进行立体吊挂采苗，育苗池长400cm，宽100cm，深50cm，萌发率30％，要求实际萌发数150个/cm2，一串贝壳共挂有6对贝壳，果孢子液2万个/ml。求这个池子共需要多少毫升果孢子液？