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罗氏应用科学部/分子诊断部r®480实时荧光定量PCR系统操作快速指南V2.0LightCycler®480系统快速操作指南1目录目录目录目录说明及版本历史说明及版本历史说明及版本历史说明及版本历史1.基本界面及图标基本界面及图标基本界面及图标基本界面及图标1.1.Overview界面界面界面界面1.2.NewExperiment界面界面界面界面1.3.Navigator界面界面界面界面2.PCR及结果分析及结果分析及结果分析及结果分析2.1.开机开机开机开机2.2.运行一次运行一次运行一次运行一次PCR实验实验实验实验2.2.1.PCR程序的设定程序的设定程序的设定程序的设定2.2.2.样本的编辑样本的编辑样本的编辑样本的编辑2.2.3.程序的运行程序的运行程序的运行程序的运行2.3.实验结果的分析实验结果的分析实验结果的分析实验结果的分析2.3.1.绝对定量分析绝对定量分析绝对定量分析绝对定量分析2.3.2.相对定量分析相对定量分析相对定量分析相对定量分析2.3.3.基因分型分析基因分型分析基因分型分析基因分型分析2.3.4.Tmcalling2.4.结果报告结果报告结果报告结果报告3.数据管理及模块化操作数据管理及模块化操作数据管理及模块化操作数据管理及模块化操作3.1.历史数据的处理历史数据的处理历史数据的处理历史数据的处理3.2.应用应用应用应用Template和和和和Macros简化实验流程简化实验流程简化实验流程简化实验流程4.用户管理用户管理用户管理用户管理5.日常维护日常维护日常维护日常维护6.TroubleshootingLightCycler®480系统快速操作指南2说明说明说明说明本指南用于本指南用于本指南用于本指南用于简要说明简要说明简要说明简要说明LightCycler®480系统软件系统软件系统软件系统软件的界面及操作要点的界面及操作要点的界面及操作要点的界面及操作要点，，，，对初学者了解系对初学者了解系对初学者了解系对初学者了解系统软件有所帮助统软件有所帮助统软件有所帮助统软件有所帮助。。。。但荧光定量但荧光定量但荧光定量但荧光定量PCR是一个相对较为复杂和精确的定量方法是一个相对较为复杂和精确的定量方法是一个相对较为复杂和精确的定量方法是一个相对较为复杂和精确的定量方法，，，，要求使用者对要求使用者对要求使用者对要求使用者对仪器仪器仪器仪器、、、、软件和实验设计有比较系统深入的了解软件和实验设计有比较系统深入的了解软件和实验设计有比较系统深入的了解软件和实验设计有比较系统深入的了解，，，，方能对方能对方能对方能对实验的设计实验的设计实验的设计实验的设计、、、、操作及分析运用自如操作及分析运用自如操作及分析运用自如操作及分析运用自如。。。。因此请各位使用者在初步了解本软件的操作要点后因此请各位使用者在初步了解本软件的操作要点后因此请各位使用者在初步了解本软件的操作要点后因此请各位使用者在初步了解本软件的操作要点后，，，，尽快通过完整的操作手册尽快通过完整的操作手册尽快通过完整的操作手册尽快通过完整的操作手册，，，，熟悉系统熟悉系统熟悉系统熟悉系统相相相相关软件和实验设计关软件和实验设计关软件和实验设计关软件和实验设计、、、、分析分析分析分析。。。。版本历史版本历史版本历史版本历史版本号版本号版本号版本号修订时间修订时间修订时间修订时间1.02007-3-272.02007-8-22LightCycler®480系统快速操作指南3第一部分第一部分第一部分第一部分基本基本基本基本界面及界面及界面及界面及图标图标图标图标概述概述概述概述：：：：一一一一、、、、Overview界面界面界面界面Exit：：：：关闭关闭关闭关闭LC480软件软件软件软件Logoff：：：：从目前使用的数据库中退出并可登陆其他的数据库从目前使用的数据库中退出并可登陆其他的数据库从目前使用的数据库中退出并可登陆其他的数据库从目前使用的数据库中退出并可登陆其他的数据库Overview：：：：点击该图标进入点击该图标进入点击该图标进入点击该图标进入““““Overview””””界面界面界面界面Navigator：：：：点击该图标进入点击该图标进入点击该图标进入点击该图标进入““““Navigator””””界面界面界面界面，，，，可进行数据的导入导出等操作可进行数据的导入导出等操作可进行数据的导入导出等操作可进行数据的导入导出等操作，，，，详见详见详见详见。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。Save：：：：点击该图标进行保存点击该图标进行保存点击该图标进行保存点击该图标进行保存Export：：：：导出当前打开的文件导出当前打开的文件导出当前打开的文件导出当前打开的文件Close：：：：关闭当前打开的文件关闭当前打开的文件关闭当前打开的文件关闭当前打开的文件Print：：：：打印当前打开的窗口打印当前打开的窗口打印当前打开的窗口打印当前打开的窗口Tools：：：：打开打开打开打开““““Tools””””界面界面界面界面，，，，可进行密码修改可进行密码修改可进行密码修改可进行密码修改，，，，建立和编辑用户建立和编辑用户建立和编辑用户建立和编辑用户，，，，系统设置系统设置系统设置系统设置，，，，查看查看查看查看数据库状态数据库状态数据库状态数据库状态、、、、仪器状态仪器状态仪器状态仪器状态、、、、滤光片组合等操作滤光片组合等操作滤光片组合等操作滤光片组合等操作Help：：：：查看软件版本查看软件版本查看软件版本查看软件版本，，，，操作说明书等操作说明书等操作说明书等操作说明书等LightCycler®480系统快速操作指南4二二二二、、、、NewExperiment界面界面界面界面SummaryModule:查看实验的总体概况查看实验的总体概况查看实验的总体概况查看实验的总体概况，，，，包括实验名称包括实验名称包括实验名称包括实验名称，，，，所用的程序所用的程序所用的程序所用的程序，，，，检测模式检测模式检测模式检测模式，，，，滤光片组合等滤光片组合等滤光片组合等滤光片组合等。。。。概况的内容由系统自动生成概况的内容由系统自动生成概况的内容由系统自动生成概况的内容由系统自动生成RunModule：：：：编辑编辑编辑编辑、、、、运行或查看运行或查看运行或查看运行或查看PCR程序及查看程序及查看程序及查看程序及查看PCR实时数据实时数据实时数据实时数据SubsetEditor：：：：点击该模块后可进行子集的编辑点击该模块后可进行子集的编辑点击该模块后可进行子集的编辑点击该模块后可进行子集的编辑SampleEditor：：：：点击后进行样品信息的编辑点击后进行样品信息的编辑点击后进行样品信息的编辑点击后进行样品信息的编辑AnalysisModule:点击进行结果分析或查看已保存的分析结果点击进行结果分析或查看已保存的分析结果点击进行结果分析或查看已保存的分析结果点击进行结果分析或查看已保存的分析结果ReportModule：：：：选择需要的内容以报告的形式给出结果选择需要的内容以报告的形式给出结果选择需要的内容以报告的形式给出结果选择需要的内容以报告的形式给出结果LightCycler®480系统快速操作指南5三三三三、、、、Navigator界面界面界面界面Import：：：：导入一个文件导入一个文件导入一个文件导入一个文件Export：：：：导出一个文件导出一个文件导出一个文件导出一个文件BatchImport：：：：导入一批数据导入一批数据导入一批数据导入一批数据BatchExport：：：：导出一批数据导出一批数据导出一批数据导出一批数据New：：：：新建一个实验或文新建一个实验或文新建一个实验或文新建一个实验或文件夹件夹件夹件夹NewFolder：：：：新建一个文件夹新建一个文件夹新建一个文件夹新建一个文件夹Open：：：：打开一个文件打开一个文件打开一个文件打开一个文件Rename：：：：重命名重命名重命名重命名Delete：：：：删除选中的目标删除选中的目标删除选中的目标删除选中的目标Copy：：：：拷贝选中的目标拷贝选中的目标拷贝选中的目标拷贝选中的目标Note：：：：所有上述图标在深蓝色时为激活状态所有上述图标在深蓝色时为激活状态所有上述图标在深蓝色时为激活状态所有上述图标在深蓝色时为激活状态，，，，灰色时为灭活状态也就是不可用状态灰色时为灭活状态也就是不可用状态灰色时为灭活状态也就是不可用状态灰色时为灭活状态也就是不可用状态。。。。各图各图各图各图标的功能在不同状态下以颜色来区分是否具备标的功能在不同状态下以颜色来区分是否具备标的功能在不同状态下以颜色来区分是否具备标的功能在不同状态下以颜色来区分是否具备。。。。LightCycler®480系统快速操作指南6第二部分第二部分第二部分第二部分PCR及结果分析及结果分析及结果分析及结果分析一一一一、、、、开机开机开机开机（一）打开LightCycler480仪器（二）打开电脑（三）登陆WindowsXP（四）双击图标，打开LightCycler480软件，输入用户名、密码后登陆。Note:打开480仪器后，将有一个仪器自动初始化的过程：SampleLoader自动出来一次，并复位。二二二二、、、、运行一次运行一次运行一次运行一次PCR实验实验实验实验（一）PCR程序的设定1、打开软件后，自动进入如下界面2、点击软件主界面中的“NewExperiment”，进入程序设定界面LightCycler®480系统快速操作指南73、根据实验所用的检测模式选择“DetectionFormat”，“BlockType”，“PlateID,(optional)”和“ReactionVolume”3.1从DetectionFormat的下拉框中选择分析模式：SYBRGreenI；SimpleProbe；MonoColorHydrolysisProbe；MultiColorHydrolysisProbe；MonoColorHybProbe；MultiColorHybProbe3.2‘Customizes’模块中选择合适的滤片组合3.3选择合适的模块3.4PlateID:Optional,可以手工输入或通过扫描仪扫描3.5输入反应体积：96模块10－100µl；384模块5－20µl4、定义PCR程序中的每个步骤（ProgramName）及循环数(Cycles)和分析模式(AnalysisMode)。利用“＋”和“－”增加或删除步骤。5、设定每个步骤的温度，时间，变温速率及信号获取模式。利用“＋”和“－”增加或删除步骤。RampRate(°C/s)HeatingupCoolingdown96-wellblock:1.0–4.4°C/s1.0-2.2°C/s384-wellblock:1.0-4.8°C/s1.0-2.5°C/s设定降温速率时的注意事项:96模块：目标温度在50°C及以上，变温速率为2.2°C/s.目标温度低于50°C,变温速率为1.5°C/s!384模块：目标温度在50°C及以上，变温速率为2.5°C/s.目标温度低于50°C,变温速率为2.0°C/s!Note：屏幕下方的Overview一栏中，将同步出现温度变化的曲线，并以绿色圆点标识荧光的获取位置。LightCycler®480系统快速操作指南8（二）样本的编辑1、点击“SampleEditor”模块2、点击“General”样品列表，可输入样品的基本信息。3、选择以将要进行的分析命名的样品列表，输入相应的样品信息。SampleType：AbsQuant:unknown,standardGenotyping:unknown,Positivecontrol,Negativecontrol,MeltingStandardRelQuant:targetunknown,targetcalibrator,targetst