检验医学SOP文件4--免疫室作业指导书

ISO15189质量管理体系范本文件（第四册）免疫室作业指导书文件编号：ABCD-3-MY-01~52第A版编制：审核：批准：生效日期：2015年4月8日ABCD人民医院检验科ABCD人民医院检验科免疫室作业指导书文件编号：版本/修订号：A/0主题内容目录生效日期：20150408第2页共177页目录序号主题内容代号页号1血清乙型肝炎病毒表面抗原检测ABCD-3-MY-0162血清乙型肝炎病毒表面抗体检测ABCD-3-MY-0293血清乙型肝炎病毒e抗原检测ABCD-3-MY-03124血清乙型肝炎病毒e抗体检测ABCD-3-MY-04155血清乙型肝炎病毒核心抗体检测ABCD-3-MY-05186甲型肝炎病毒--IgM检测ABCD-3-MY-06217血清丙型肝炎病毒抗体检测ABCD-3-MY-07248血清麻疹IgM抗体试验ABCD-3-MY-08289人类免疫缺陷病毒抗体检测ABCD-3-MY-093110梅毒甲苯胺红不加热血清试验ABCD-3-MY-103411梅毒螺旋体特异性抗体检测ABCD-3-MY-113612免疫球蛋白A（IgA）测定ABCD-3-MY-123913免疫球蛋白M（IgM）测定ABCD-3-MY-134214免疫球蛋白G（IgG）测定ABCD-3-MY-144515补体C3测定（免疫比浊法）ABCD-3-MY-154816补体C4测定（免疫比浊法）ABCD-3-MY-165117类风湿因子（RF）测定ABCD-3-MY-175418抗链球菌溶血素O（ASO）测定ABCD-3-MY-185619C反应蛋白（CRP）测定ABCD-3-MY-195820C反应蛋白（CRP）定量测定ABCD-3-MY-206021支原体肺炎血清学试验ABCD-3-MY-216322D二聚体检测（胶乳凝集法）ABCD-3-MY-226523甲胎蛋白（AFP）定量测定ABCD-3-MY-2368ABCD人民医院检验科免疫室作业指导书文件编号：版本/修订号：A/0主题内容目录生效日期：20150408第3页共177页24癌胚抗原（CEA）定量测定ABCD-3-MY-247225糖链抗原125（CA125）定量测定ABCD-3-MY-257626CA153定量测定ABCD-3-MY-268027糖链抗原199（CA199）定量测定ABCD-3-MY-278428F-PSA定量测定ABCD-3-MY-288829T-PSA定量测定ABCD-3-MY-299230B12定量测定ABCD-3-MY-309631铁蛋白定量测定ABCD-3-MY-3110032叶酸（Folate）定量测定ABCD-3-MY-3210433人绒毛膜促性腺激素定量测定ABCD-3-MY-3310834血(尿)b2-MG微球蛋白定量测定ABCD-3-MY-3411235肌红蛋白定量测定ABCD-3-MY-3511636肌钙蛋白-I定量测定ABCD-3-MY-3612037CK-MB定量测定ABCD-3-MY-3712438HBsAg半定量测定ABCD-3-MY-3812839HBsAb定量测定ABCD-3-MY-3913140HBeAg半定量测定ABCD-3-MY-4013541HBeAb半定量测定ABCD-3-MY-4113842HBcAb半定量测定ABCD-3-MY-4214143HBcAb-IgM半定量测定ABCD-3-MY-4314444CMV-IGM半定量测定ABCD-3-MY-4414745RUBELLA-IGM半定量测定ABCD-3-MY-4515046微量加样器的质控ABCD-3-MY-4615447酶标分析仪操作维护规程ABCD-3-MY-4715748全自动酶标洗板机操作维护规程ABCD-3-MY-48159ABCD人民医院检验科免疫室作业指导书文件编号：版本/修订号：A/0主题内容目录生效日期：20150408第4页共177页49特种蛋白测定仪操作维护规程ABCD-3-MY-4916050AxSYM免疫分析仪操作维护规程ABCD-3-MY-5016551免疫学室内质量控制操作程序ABCD-3-MY-5116952免疫学检验室间质量评价（EQA）ABCD-3-MY-52174ABCD人民医院检验科免疫室作业指导书文件编号：版本/修订号：A/0主题内容目录生效日期：20150408第5页共177页修订页序号文件编号页码需更改的内容更改内容批准人批准日期123456789101112131415161718192021ABCD人民医院检验科免疫室作业指导书文件编号：ABCD-3-MY-01版本/修订号：A/0主题内容血清乙型肝炎病毒表面抗原检测生效日期：20150408第6页共177页血清乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA）1.原理在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗体，配以酶标记抗体（HBsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗（HBsAg）。2.标本采集2.1采集前病人准备：受检者应空腹2.2标本种类：血清或血浆2.3标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。3.标本储存：2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。4.标本运输：密封，室温运输。5.标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。6.试剂6.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒6.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。6.3包装规格：96Test/Kit6.4试剂盒组成：HBsAg微孔板，HBsAg酶标记抗体，HBsAg阳性对照血清，HBsAg阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。6.5试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期9个月。7.仪器设备7.1仪器名称：自动酶标仪7.2仪器厂家：Rayto7.3仪器型号：RT-21008.操作步骤8.1平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。8.2配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或ABCD人民医院检验科免疫室作业指导书文件编号：ABCD-3-MY-01版本/修订号：A/0主题内容血清乙型肝炎病毒表面抗原检测生效日期：20150408第7页共177页去离子水按1：19稀释后使用。8.3编号：将微孔条固定于支架，按序编号。8.4加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50l于相应孔中。8.5加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50l，轻拍混匀。8.6温育：置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。8.7洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。8.8显色：每孔加入底物A、B各50l，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。8.9终止：每孔加终止液50l，混匀。8.10测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。9.结果判断与分析9.1临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔OD值N×2.1，阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。9.2结果判定：样品OD值S/C.O=1者为HBsAg阳性样品OD值S/C.O1者为HBsAg阴性10.质量控制每次试验用含2ng/mlHBsAg的质控血清同步检测，以S/CO值绘制质控图，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。11.参考范围：阴性12.临床意义：在血清中HBsAg的存在表明有急性乙肝或慢性乙肝或为无症状携带者。13.操作性能：灵敏度为ng/ml，特异性高。14.方法局限性14.1.对于病毒复制较强的病人，病毒量较大，出现HOOK现象，造成假阴性，须将病人血清进行稀释后再重新试验。14.2.如出现跳孔现象可能造成假阳性。14.3.样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。15.注意事项15.1.每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。15.2.洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。15.3.加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去1—2滴。ABCD人民医院检验科免疫室作业指导书文件编号：ABCD-3-MY-01版本/修订号：A/0主题内容血清乙型肝炎病毒表面抗原检测生效日期：20150408第8页共177页滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。15.4.所有样品都应按传染源处理。15.5.封口膜使用说明15.5.1.微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。15.5.2.微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。15.6.不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。16.当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。17.参考文献：中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程（第二版）410-412页。18.其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。ABCD人民医院检验科免疫室作业指导书文件编号：ABCD-3-MY-02版本/修订号：A/0主题内容血清乙型肝炎病毒表面抗体检测生效日期：20150408第9页共177页血清乙型肝炎病毒表面抗体检测（ELISA）1.原理在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗原，配以酶标记抗原（HBsAg-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗体（HBsAb）。2.标本采集2.1采集前病人准备：受检者应空腹2.2标本种类：血清或血浆2.3标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。3.标本储存：2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。4.标本运输：密封，室温运输。5.标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。6.试剂6.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒6.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。6.3包装规格：96Test/Kit6.4试剂盒组成：HBsAb微孔板，HBsAb酶标记抗原，HBsAb阳性对照血清，HBsAb阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。6.5试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期9个月。7.仪器设备7.1仪器名称：自动酶标仪7.2仪器厂家：Rayto7.3仪器型号：RT-21008.操作步骤8.1平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。8.2配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去ABCD人民医院检验科免疫室作业指导书文件编号：ABCD-3-MY-02版本/修订号：A/0主题内容血清乙型肝炎病毒表面抗体检测生效日期：20150408第10页共177页离子水按1：19稀释后使用。8.3编号：将微孔条固定于支架，按序编号。8.4加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50l于相应孔中。8.5加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50l，轻拍混匀。8.6温育：置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。8.7洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。8.8显色：每孔加入底物A、B各50l，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。8.9终止：每孔加终止液50l，混匀。8.10测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔O