常用染色液的配制

一、常用染色液的配制⒈碘-碘化钾（I2-KI）溶液能将淀粉染成蓝紫色，蛋白质染成黄色，也是植物组织化学测定的重要试剂。配方：碘化钾2g；蒸馏水300ml；碘1g先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，待全溶解后再加碘，振荡溶解后稀释至300mL，保存在棕色玻璃瓶内。用时可将其稀释2-10倍，这样染色不致过深，效果更佳。⒉苏丹Ⅲ（sudanⅢ或Ⅳ）能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色，是著名的脂肪染色剂。配方：（1）苏丹III或苏丹Ⅳ干粉；95％酒精10ml；过滤后再加入10ml甘油（2）先将苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中，再加入70%酒精50ml。（3）苏丹III70%乙醇的饱和溶液。⒊1％醋酸洋红（acetocarmine）酸性染料，适用于压碎涂抹制片，能使染色体染成深红色，细胞质成浅红色。配方：洋红1g；45％醋酸100ml煮沸2h左右，并随时注意补充加入蒸馏水到原含量，然后冷却过滤，加入4％铁明矾溶液1～2滴（不能多加，否则会发生沉淀），放入棕色瓶中备用。⒋改良苯芬品红染色液（Carbolfuchsine）核染色剂。配制步骤：先配成三种原液，再配成染色液。原液A：3g碱性品红溶于100ml70％酒精中。原液B：取原液A10ml加入到90ml5％石炭酸水溶液中。原液C：取原液B55ml，加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林（38％的甲醛）。（原液A和原液C可长期保存，原液B限两周内使用）染色液：取C液10～20ml，加45％冰醋酸80～90ml，再加山梨醇1~，配成10％～20％浓度的石炭酸品红液，放置两周后使用，效果显著（若立即用，则着色能力差）。适用范围：适用于植物组织压片法和涂片法，染色体着色深，保存性好，使用2～3年不变质。山梨醇为助渗剂，兼有稳定染色液的作用，假如没有山梨醇也能染色，但效果较差。⒌中性红（neutralred）溶液用于染细胞中的液泡，可鉴定细胞死活。配方：中性红；蒸馏水100ml使用时再稀释10倍左右。⒍曙红Y（伊红，eosinY）酒精溶液常与苏木精对染，能使细胞质染成浅红色，起衬染作用。配方：曙红；95％酒清100ml也常用于95％酒精脱水时，加入少量曙红溶液，其目的是在包埋、切片、展片、镜检时便于识别材料。⒎钌红（rutheniumred）染液钌红是细胞胞间层专性染料，其配后不易保存，应现用现配。配方：钌红5～10mg；蒸馏水25-50ml⒏龙胆紫（gentianviolet）为酸性染料，适用于细菌涂抹制片。配方：龙胆紫0.2~1g；蒸馏水100ml⒐苯胺兰（anilineblue）溶液为酸性染料，对纤维素细胞壁、非染色质的结构、鞭毛等，尤其是染丝状藻类效果好。还多用于与真曙红作双重染色，对于高等植物多用于与番红作双重染色。配方：苯胺兰1g；35％或95％酒精100ml⒑间苯三酚（phloroglucin）溶液用于测定木质素。配方：间苯三酚5g；95％酒精100ml注：此溶液呈黄褐色即失效。⒒橘红G（orangeG）酒精溶液为酸性染料，染细胞质，常作二重或三重染色用。配方：橘红G1g；95％酒精100ml⒓番红（safraninO）为碱性染料，适用于染木化、角化、栓化的细胞壁，对细胞核中染色质、染色体和花粉外壁等都可染成鲜艳的红色。并能与固绿、苯胺兰等作双重染色，与橘红G、结晶紫作三重染色。配方：（1）番红水溶液番红0.1或1g；蒸馏水100ml（2）番红酒精溶液番红0.5或1g；50％（或95％）酒精100ml（3）苯胺番红酒精染色液甲液番红5g+95％酒精50ml乙液苯胺油20ml+蒸馏水450ml将甲、乙二溶液混合后充分摇均匀，过滤后使用。⒔固绿（fastgreen）又称快绿溶液。为酸性染料，能将细胞质，纤维素细胞壁染成鲜艳绿色，着色很快，故要很好的掌握着色时间。配方：（1）固绿酒精液固绿0.1g；95％酒精100ml（2）苯胺固绿酒精液固绿1g；无水酒精100ml；苯胺油4ml配后充分摇匀，过滤后使用。现配现用效果好。⒕苏木精（hematoxylin）染液苏木精是植物组织制片中应用最广的染料，是苏木科植物苏木的心材提取出来的。它是很强的细胞核染料，而且可以分化出不同颜色。配方很多，现举海登汉氏（Heidenhain's）苏木精染色液，又称铁矾苏木精染色液。配方：甲液（媒染剂）：硫酸铁铵（铁明矾）2-4g；蒸馏水100ml（必须保持新鲜，最好临用之前配制）乙液（染色剂）：苏木精0.5-1g；95％酒精10ml；蒸馏水90ml配制步骤：（1）将苏木精溶于酒精中，瓶口用双层纱布包扎，使其充分氧化（通常在室内放置两个月后方可使用）。（2）加入蒸馏水，塞紧瓶口，置冰箱中可长期保存。切片需先经甲液媒染，并充分水洗后才能以乙液染色，染色后经水稍洗再用另一瓶甲液分色至适度。铁矾苏木精染液为细胞学上染细胞核内染色质最好的染色剂，但要注意甲液与乙液在任何情况下决不能混合。⒖亚甲基蓝染液常用于细菌、活体细胞等的染色。取亚甲基蓝，溶于100ml蒸馏水中即成。⒗詹纳斯绿B（JanusgreenB）染液将绿溶于100ml蒸馏水，配成饱和水溶液。用时需稀释。稀释的倍数应视材料不同而异。⒘硫堇染液取克硫堇(也称劳氏青莲或劳氏紫)粉末，溶于100ml蒸馏水中，即可使用。使用此液时，需要用微碱性自来水封片或用1%NaHCO3水溶液封片，能成多色反应。18.黑色素液水溶性黑素10g，蒸馏水100mL，甲醛(福尔马林)。可用作荚膜的背景染色。19.墨汁染色液国产绘图墨汁40mL，甘油2mL，液体石炭酸2mL。先将墨汁用多层纱布过滤，加甘油混匀后，水浴加热，再加石炭酸搅匀，冷却后备用。用作荚膜的背景染色。20.吕氏(Loeffier)美蓝染色液A液：美蓝(methyleneblue,又名甲烯蓝)，95%乙醇30mL;B液：。混合A液和B液即成，用于细菌单染色，可长期保存。根据需要可配制成稀释美蓝液，按1∶10或1∶100稀释均可。21.革兰氏染色液(1)结晶紫(cristalviolet)液：结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL，1%草酸铵水溶液80mL。将两液混匀置24h后过滤即成。此液不易保存，如有沉淀出现，需重新配制。(2)芦戈(Lugol)氏碘液：碘1g，KI2g，蒸馏水300mL。先将KI溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶解，再加蒸馏水至300mL，即成。配成后贮于棕色瓶内备用，如变为浅黄色能使用。(3)95%乙醇：用于脱色，脱色后可选用以下(4)或(5)的其中一项复染即可。(4)稀释石炭酸复红溶液：碱性复红乙醇饱液(碱性复红1g，95%乙醇10mL，5%石炭酸90mL)10mL，加蒸馏水90mL。(5)番红溶液：番红O(safranineO，又称沙黄O)，95%乙醇100mL，溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中，用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。以上染色液配合使用，可区分出革兰氏染色阳性(G+)或阴性(G-)细菌，前者蓝紫色，后者淡红色。22.齐氏(Ziehl)石炭酸复红液：碱性复红溶于95%乙醇10mL中为A液；溶液100mL为B液。混合A、B液即成。23.姬姆萨(Giemsa)染液(1)贮存液：称取姬姆萨粉，甘油33mL，甲醇33mL。先将姬姆萨粉研细，再逐滴加入甘油，继续研磨，最后加入甲醇，在56℃放置1-24h后即可使用。(2)应用液(临用时配制)：取1mL贮存液加19mLpH7.4磷酸缓冲液即成。也可以贮存液∶甲醇=1∶4的比例配制成染色液。24.1%瑞氏(Wright's)染色液称取瑞氏染色粉6g，放研钵内磨细，不断滴加甲醇(共600mL)并继续研磨使溶解。经过滤后染液须贮存一年以上才可使用，保存时间愈久，则染色色泽愈佳。二、常用试剂的配制(一)显微镜镜头清洁剂将乙醚和乙醇按7∶3混合，装入滴瓶备用。用于擦拭显微镜镜头上油迹和污垢等（注意瓶口必须塞紧，以免挥发）。(二)固定液1.福尔马林-乙酸-酒精固定液（FAA，又称万能固定剂）福尔马林（38％甲醛）5ml＋冰乙酸5ml＋70％酒精90ml，可用于固定植物的一般组织，但不适用于单细胞及丝状藻类。幼嫩材料用50％酒精代替70％酒精，可防止材料收缩；还可加入5ml甘油（丙三醇）以防蒸发和材料变硬。FAA可兼作保存剂。2.福尔马林-丙酸-酒精固定液（FPA）福尔马林5ml＋丙酸5ml＋70％酒精90ml，用于固定一般的植物材料，通常固定24h，效果比FAA好，并可长期保存。3.福尔马林-丙酸-氯仿固定液（卡诺固定液）配方一：无水酒精3份＋冰乙酸1份。配方二：无水酒精6份＋冰乙酸1份＋氯仿3份。是研究植物细胞分裂和染色的优良固定液，材料固定后，用95％和85％的酒精浸洗，清洗2-3次，也可转入70％酒精中保存备用。4.甘油-酒精软化剂甘油1份＋50％或70％酒精1份，适用于木材的软化，将木质化根、茎等材料排除空气后浸入软化液中，时间至少一周或更长一些，也可将材料保存于其中备用。5.铬酸-乙酸固定液根据固定对象的不同，可分强、中、弱3种不同的配方：弱液配方：10％铬酸2.5ml＋10％乙酸5.0ml＋蒸馏水。中液配方：10％铬酸7ml+10％乙酸10ml＋蒸馏水83ml。强液配方：10％铬酸10ml+10％乙酸30ml＋蒸馏水60m1。弱液用于固定较柔嫩的材料，例如藻类、真菌类、苔药植物和蕨类的原叶体等，固定时间较短，一般为数小时，最长可固定12-24h，但藻类和蕨类的原叶体可缩短到几分钟到1h。中液用作固定根尖、茎尖、小的子房和胚珠等，固定时间12-24h或更长。强液适用于木质的根、茎和坚韧的叶子、成熟的子房等。为了易于渗透，可在中液和强液中另加入2％的麦芽糖或尿素。固定时间12-24h或更长。(三)离析液1.铬酸-硝酸离析液铬酸为三氧化铬的水溶液：(1)10ml铬酸；(2)10ml浓硝酸。将上述两液等量混合均匀后再使用。适于对导管、管胞、纤维等木质化的组织进行解离时使用。2.盐酸-酒精固定离析液将浓盐酸、95％酒精等量混合备用，一般用于离析根尖细胞。(四)解离液常用于根尖等细胞的涂片，它能使细胞壁中层（果胶质）溶解，而使细胞分开。1．盐酸酒精配方:95%酒精1份，浓盐酸1份。二者混合即成。2．盐酸溶液（1）1mol／L盐酸配方：浓盐酸（比重）用蒸馏水定容1000ml（2）／L盐酸配方：浓盐酸（比重）用蒸馏水定容1000m1盐酸水解时间对染色效果影响很大，水解时间短，易着色但较难压片；水解时间长，染色慢而色淡；超过20min或水解温度过高，往往染色极淡，或染不上色。各种材料最合适的时间有差别，一般来说，大染色体材料水解时间可较长，小染色体材料宜短。改用／L盐酸于60℃恒温下水解10～15min，对各种类型材料都能获得细胞分离和染色合适的较好效果。(五)预处理液用于根尖压片的前处理，能使细胞有丝分裂染色体缩短。1．8-羟基奎林水溶液称取8-羟基奎林溶于1000ml蒸馏水中。2．对二氯代苯饱和水溶液将对二氯代苯加入蒸馏水中搅拌至不再溶解为止，即成饱和水溶液。(六)各级酒精的配制由于无水乙醇价格较高，故常用95％的酒精配制。配制方法很简便，用95％的酒精加上一定量的蒸馏水即可。可按下列公式推算：（原酒精浓度值（95％）－最终酒精浓度值）×100＝所需加水量最终酒精浓度95％酒精用量蒸馏水量85％85ml10ml70％70ml25ml50％50ml45ml30％30ml65ml(七)其他试剂1.生理盐水取NaCl溶于100mL蒸馏水中。用于两栖类动物。2.1%硝酸银溶液称取1克硝酸银,溶于100毫升蒸馏水中即可。3.碘酒取碘2g和KI，先加入少量的75%乙醇搅拌，待溶解后再用75%乙醇稀释至100mL4.树胶封固剂将固体的加拿大树胶块，溶解于二甲苯或正丁醇中，浓度要适当（注意绝对不能混入水或酒精），是玻片标本好的封固剂。也可用人工合成的中性树胶代替。5.明胶粘贴剂明胶1-2g＋石碳酸（苯酚）2g＋蒸馏水100ml＋甘油15ml。配法：先将蒸馏水加温至30-40℃，慢慢加入明胶，待全部溶解后，再加入2g苯