Sysmex-XN-2000-检测原理-李建英

[e-mail]2000检测原理北京协和医院检验科李建英XN-20XN-10A1A2B1B2B3B4检测通道WNR○○○○○○RBC/PLT○○○○○○HGB○○○○○○WDF○○○○○○WPC○○××××RET○○ONOFFONOFFPLT-O△○△OFF○OFFPLT-FONOFFONONOFFOFF检测模式WB，PD○○○○○○BFONONONONONON○：搭载ON：软件控制下的选择方式：“选择”OFF：软件控制下的选择方式：“无选择”△：作为参考参数汇报XN简介推片机血液分析仪XN-10XN-20SP-10XN-2000XN-1000XN-9000轨道、进样、试剂系统进样器运输单元RU-20XN-3000【单机组】【双机组】【流水线】【流水线】XN简介A1CBCDIFFNRBCRETPLT-FHPCBFLW检测参数XE系列DIFFWBC/BASONRBCIMIRETPLT-ORBCPLTHgb等改变检测通道和试剂。染色液改变XN系列WDF(DIFF)WNR(WBC/BASO/NRBC)WPCRETPLT-OPLT-FRBCPLTHgb等无改变无改变NewNewNewFCMRF/DCDC,吸光度FCM数据分析系统的改良和溶血剂改变NewFCMDC,吸光度XE系列vsXN系列通道的改善检测原理流式细胞术•WNR•WDF•RET•WPC•PLT-F鞘流直流阻抗法•RBC•PLT-ISLS-血红蛋白法•HGB分析以波长633nm激光照射细胞所得到的前向散射光（FSC）、侧向散射光（SSC）、侧向荧光（SFL），将细胞进行计数和分类。两种散射光（FSC、SSC）反映细胞大小、表面构造、颗粒形状、核形、折射率和反射率等。一般情况下，细胞越大，FSC的信号就越强，细胞内部构造越复杂，SSC的信号也越强。另外，侧向荧光主要反映细胞内核酸和细胞器的种类和多少。针对这3种信号，运用独创性的数字技术和演算法，将白细胞、有核红细胞、网织红细胞、血小板进行分类和计数，同时检出异常细胞和幼稚细胞。半导体激光的流式细胞术鞘流直流阻抗法RBC/PLT通道在RBC/PLT通道中，用鞘流直流阻抗法计数红细胞和血小板。稀释后的血样从喷头的前端喷出，被鞘液包裹着的血细胞从小孔中央，沿着一定的轨道通过。因为血细胞一个一个地通过小孔中央，所以可正确地反映血细胞的容积信息。另外，通过独创的数字波形处理技术的革新，可以灵敏地捕捉细胞的信号。试剂：LysercellWNRFluorocellWNRWNR—WBC、NRBC、BASOXE系列WBC/BASONRBCFSCFSCSFLSSCXN系列NRBCBASOSFLNRBCBASOWBCFSCWBCWBCFSC:前向散射光SSC:侧向散射光SFL:侧向荧光WNR—WBC、NRBC、BASOXE系列WBC/BASO+NRBCXN系列WNR通道数21试剂数溶血剂：2染色液：1溶血剂：1染色液：1NRBC修正由测定模式不同而异(有修正和无修正共同存在)对所有的样本进行修正特异性(不明粒子)受脂肪滴等的影响(XE-5000中转换为DIFF-WBC)不会受到脂肪滴等的影响WNR—WBC、NRBC、BASO乳糜微粒干扰①由于在CBC模式下该通道用于WBC测定，因此可以在全体样本中测得NRBC计数，以及由NRBC数修正过的WBC数据。②由于采用荧光染色进行检测，红细胞没有被染色，所以不存在红细胞溶血不良所造成的影响。（仪器评估检测时也未出现溶血不良的例子）⇒删除“RBCLyseResistance?”的报警。③试剂开发中稍微作了调试。XE的溶血剂中只有阴离子系的界面活性剂，而WNR的溶血剂中还增加了阳离子系的界面活性剂。区分NRBC与WBC，解决脂肪滴问题。WNR通道的要点WNR通道试剂：LysercellWDFFluorocellWDFWDF—DIFF、IG、AtyplcallymphXE系列XN系列和XE相比较,试剂溶血素溶血能力减弱,在MONO细胞膜上打的孔小于XE，使单核细胞内容物复杂程度增加，同时增加倾斜度和位置来进行判断,更好区分LYMPH和MONO。检测结果更加准确区分淋巴细胞、单核细胞能力增强①散点图基本上和XE系列的DIFF通道无区别。②试剂得以改良。（溶血剂的作用较XE系列稳定。）③LYMPH（淋巴细胞）和MONO（单核细胞）得以更加明确地划分。WDF通道WDF通道的要点WPC-BLAST、Abnormallymph试剂：LysercellWPC,FluorocellWPCWDF通道：灵敏度高Blasts/AbnLympho?、AtypicalLympho?、NegativeWPC通道：特异度提高Blasts？、AbnLympho?、AtypicalLympho?、NegativeNewDCIMI(XE)RFWPC(XN)主画面WPC(XN)service界面WPC通道:通过REFLEX设置选择性检测GranulocytesLymphSFLMonoSSCFSCSSCGranulocytesLymphMono①在WPC通道，采用荧光染色可以检出类似AbnormalLymph和Blast的异常细胞。②用于WBC的suspectflag的判定。通过在WDF通道广泛地捕捉和在WPC检证这2个阶段进行判定。③实际上，目前没有研究异常细胞在试剂中的形状以及染色状态。在现阶段，从散点图上看・异常淋巴细胞(AbnormalLymph)：易着色，体积较小。・原始细胞(Blast)：不易被染色，体积较大。WPC通道的要点WPC通道XE系列IMIXN系列WPC检出部位RF/DCFCM＋染色试剂溶血剂溶血剂染色液Myeloblast检出特异性低(受IG的影响出现假阳性)灵敏度和XE-IMI相当。特异度较XE-IMI高。※WDF和WPC2个阶段判定Lymphoblast检出NoYes※WDF和WPC2个阶段判定HPCYesYes(评价中)细菌/异味YesNoWPC通道EBV感染追加WPC异常淋巴细胞-淋巴瘤白血病追加WPCCBC+DIFF浆细胞白血病追加WPC异常淋巴细胞增多追加WPC慢性淋巴细胞白细胞急性淋巴细胞白细胞L2型原始细胞增多镜检：Blasts65.8%原始细胞增多-M2血片Blasts38%，骨髓片Blasts32%粒-单细胞白细胞慢性粒细胞白细胞急性变慢性粒细胞白细胞早幼粒细胞白细胞急性红白血病T细胞淋巴瘤-NRBC增高WBmodeLWmodeWBC:1,160/uLNEUT:50.8%LYMPH:39.5%MONO:7.9%EO:1.8%BASO:0.0%WBC:1,220/uLNEUT:52.5%LYMPH:41.0%MONO:4.9%EO:1.6%BASO:0.0%由于LW模式中的WBC的计数是全血模式的3倍，因此LW模式中散点较多。检测精度较全血模式高。低值白细胞（LW）检测重现性新鲜血液CBC+DIFF+WPC+RET+PLT-FLWmodeandWBmode低值白细胞(LW)检测田中雄三(东海大学医院)：SysmexJournalVol.34Suppl.220113倍计数，令LW模式结果更准确RET—RET六项+RET-He+PLT-O试剂：CELLPACKDFL,FluorocellRETRET通道的要点：①与XE系列无异②RET-He从研究项目变成可报告项目PLT-F—PLT-F+IPF试剂：CELLPACKDFL,FluorocellPLTNew39血小板特殊颗粒(α颗粒-特异性蛋白质)线粒体(DNA)•α颗粒（特异性蛋白质）PLT-O•线粒体（DNA）PLT-FPLTRBCPLT-F试剂特异性地染色血小板的内部结构，而对红细胞（红细胞碎片）的染色是极轻微的，因为后者没有内部结构，只有细胞膜。PLT-O试剂能对细胞浆和细胞膜都进行染色低值血小板（PLT-F）检测PLT-F通道比较PLT-F试剂染色图像（红）可以发现，上层的血小板通过PLT-F专用试剂细胞内外均被明显染色与血小板特异抗原（CD41）阳性细胞一致，而下层的红细胞碎片只有细胞膜被轻度染色。①PLT-I只检测粒子的大小，故易受干扰②PLT-O使用FCM2次元分类，较PLT-I可特异性地测定血小板，但是仍存在受部分物质影响的情况。③PLT-F使用可强烈着染血小板的荧光色素染色后，通过FCM分类，可非常特异性地测定血小板。5.6x10^4/uL45x10^9/L62x10^9/L-IPLT报警，触发Reflex规则仪器自动复检：CBC+PLT-For红细胞碎片综合征中的血小板干扰——3R工作流程红细胞碎片综合征的特点烧伤、DIC、TTP等病人的特点：外周血红细胞碎片大量增加，严重干扰血小板的计数PLT-I1018×109/L红细胞碎片综合征检测比较未用PLT-F通道使用PLT-F通道大量红细胞碎片被当成血小板计数获得准确的血小板计数未受红细胞碎片干扰RBC碎片干扰3种方法计数PLT比较测定法问题点PLT-I存在干扰物影响的可能性。（红细胞碎片、溶血的血影、巨大血小板等）PLT-O存在很少干扰物影响的情况。（红细胞碎片、一部分溶血的血影）PLT-F无干扰，测定粒子数是其他通道的5倍，检测低值血小板的重复性最佳。IPFPLT-OIPFPLT-F各PLT测定模式的重复性比较低值范围的血小板样本中，PLT-F测定的精度最高无PLT体积分布异常报警信息有PLT体积分布异常报警信息单位PLTClumps?检出的新参数PLTclumpsPLTclumpsｻﾝﾌﾟﾙｻﾝﾌﾟﾙNegativeNegativeｻﾝﾌﾟﾙｻﾝﾌﾟﾙ右：粒子サイズモデル右：粒子サイズモデル左：粒子左：粒子前散幅前散幅//前散前散信号信号PLTclumpsPLTclumpsｻﾝﾌﾟﾙｻﾝﾌﾟﾙNegativeNegativeｻﾝﾌﾟﾙｻﾝﾌﾟﾙ右：粒子サイズモデル右：粒子サイズモデル左：粒子左：粒子前散幅前散幅//前散前散信号信号新参数（FSC-Width）在血小板凝集的检出方面表现优越（WDFandPLT-Fchannels）FSC-WidthFSC-WidthNonclumpscasePLTclumpscaseFSCFSC右：粒子大小模型左：粒子前向散射幅度/前向散射信号PLTClumpsinreagent/reactionWDFchWNRchPLT-Fch维持形状随着反应时间的流逝而缩小PLTClumps和试剂的反应因CELLPACKDFL试剂的溶血力较其他通道弱，故维持血小板凝集的形状。FSCFSCLaserFSCDirectionofSheathFlowNormalPlateletsFSC_WFSC_WPLTClumpsLaserFSCFSCFSCLaserFSCDirectionofSheathFlowFSC_WFSC_WLaserFSCGiantPlateletsPLTClumpsFSCFSCLaserFSCDirectionofSheathFlowFSC_WFSC_WLaserFSCLeukocytesPLTClumpsWNRWDFPLTFSSC_SFLFSC_SFLFSCW_FSCFSCW_FSCPLT聚集检测区域XNConference2012KobeJapan针对PLT聚集检测的特点PLT-FchWDFchWNRchWNR通道相对WDF与PLT-F通道，因其溶血能力很强，故对PLT聚集检测灵敏度较低。WDF通道对PLT聚集检测特异性最强，并且对纤维蛋白引起的巨大PLT聚集最灵敏。PLT-F通道对PLT聚集检测灵敏度最高，但针对纤维蛋白引起的巨大PLT聚集，其敏感性低于WDF通道。PLT-F通道的优势高准确度与精确度针对低值PLT进行准确测量高特异性以排除干扰高敏感性检测PLT聚集XE系列PLT(I/O)XN系列PLT-F特异度人工因素导致假性上升。(某些种类的特异样本的场合)高特异度：(与CD41/61免疫学的PLT检测相当)准确度---高准确度(5倍的粒子数计量，电气和光学的杂波)PLT