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种苗学（实习报告）学院班级：集贤学院创新实验123班学号：201201060214姓名：马晶晶指导老师：杨海芸2015年1月14日种苗学实习报告摘要：此次种苗学实习的主要内容有：了解实验室的规章制度和管理办法以及设备设施、MS培养基的配置以及麻竹芽无性繁殖初代体系建立的具体操作步骤、容器苗移植的具体过程。要求掌握组织培养的操作要求，了解快速繁殖体系建立的指导思想。通过本次实习，同学们接触到很多在课堂上学不到的东西，对植物组织培养的生产发展及经营措施有了切实的认识。关键词：组织培养，移植，经营1前言植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织。器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。狭义是指组培指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。植物组织培养的特点是：1、培养条件可以人为控制组培采用的植物材料完全是在人为提供的培养基和小气候环境条件下进行生长，摆脱了大自然中四季、昼夜的变化以及灾害性气候的不利影响，且条件均一，对植物生长极为有利，便于稳定地进行周年培养生产。2、生长周期短，繁殖率高组培是由于人为控制培养条件，根据不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培养条件，因此生长较快。另外，植株也比较小，往往20-30天为一个周期。所以，虽然组培需要一定设备及能源消耗，但由于植物材料能按几何级数繁殖生产，故总体来说成本低廉，且能及时提供规格一致的优质种苗或脱病毒种苗。3、管理方便，利于工厂化生产和自动化控制植物组织培养是在一定的场所和环境下，人为提供一定的温度、光照、湿度、营养、激素等条件，极利于高度集约化和高密度工厂化生产，也利于自动化控制生产。它是未来农业工厂化育苗的发展方向。它与盆栽、田间栽培等相比省去了中耕除草、浇水施肥、防治病虫等一系列繁杂劳动，可以大大节省人力、物力及田间种植所需要的土地。2实习目的与意义1、掌握基本培养基的配置及灭菌处理。2、掌握离体组织的采集及注意方法。3、掌握组织培养和容器苗移植的操作技术。4、掌握无性繁殖材料管理的注意事项。3实验过程与内容3.1MS培养基的配置3.1.1母液的配置MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时，取其总量的1/20(50mL)或1/200(5mL)，加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。本次实习为节约时间和试机，采用实验室已配好储存的母液进行实验。3.1.2配制培养液用量筒从各种母液中分别取出所需的用量：各种母液分别30mL，与各种母液一起放入烧杯中。边加母液边用磁力搅拌器搅拌，使各种母液混合均匀。配制培养液时应注意：①在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；②用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；③量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。3.1.3调pH将锥形瓶置于磁力搅拌机上，边搅拌边用pH计测量溶液的pH值。若pH偏低则用滴管逐滴加入KOH溶液，最终使溶液pH为5.7，并定容到3000mL。3.1.3溶化琼脂及高压灭菌用天平分别称取琼脂27g加入锥形瓶中，并将锥形瓶放入高压蒸汽灭菌锅灭菌。待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖。在120℃下，灭菌20min。灭菌后取出锥形瓶。3.1.4培养基的分装及灭菌溶化的培养基应该趁热分装。分装时，将锥形瓶置于磁力搅拌机上边搅拌边分装。先将要用的玻璃试管准备好，设置好分装仪进行分装。注意：在进行分装之前要先对分装仪进行预热，避免培养基堵住胶管造成浪费。分装完成后，盖好盖子再次灭菌，灭菌的步骤同上。4.1初代繁殖体系的建立4.1麻竹繁殖材料的获得本实验所用麻竹材料采于浙江农林大学温室。采集较长，带节的幼嫩麻竹枝，所采纸条应插入水中保持其生活力。将采集的枝条截成带节的小节，长度约5cm。剥去叶子于托叶鞘，尽量不要伤及幼芽。然后将幼芽置于流水中冲洗2小时，以除去附着的微生物等。就爱那个冲洗完毕的幼芽放入酒精中浸泡30秒，然后置于次氯酸钠中抽滤10分钟。置于超净工作台上用无菌水冲洗4~5遍备用。4.2初代培养打开超净工作台，用酒精擦拭两遍，将实验用的镊子、剪刀放入高温锅灭菌备用。此时，所有放入超净工作台的东西都要用酒精消毒。用镊子夹取置于无菌水中的幼芽，剪成1cm长度，然后斜插入培养基中。注意，要使繁殖材料的生态学上端朝上，使繁殖材料能够正常生长。所有的繁殖材料都插如培养基后，在试管外注明材料的拉丁学名、时间、操作者、代数等信息。最后，将试管置于培养室培养。5容器苗的移植5.1容器苗的驯化将待移植的容器苗从培养室移入驯化室，一周左右再进行移植。容器苗驯化的目的在于提高试管苗对外界环境条件的适应性，提高其光合作用的能力，促使试管苗健壮，最终达到提高试管苗的移栽成活率。驯化的原则应从温度、湿度、光照及有无菌态等环境要素进行，驯化开始数天内，应和培养时的环境条件相似；驯化后期，则要与预计的栽培条件相似从而达到逐步适应的目的。5.2移苗首先配置移栽基质，用珍珠岩，蛭石，草炭土或腐殖土比例为1：1：0．5；也可用砂子：草炭土或腐殖土为1：1。这些介质在使用前应高压灭菌。再加水搅拌至一定湿度，用手捏感觉有水但水不会溢出来的程度为适宜。接着从试管中取出发根的小苗，用自来水洗掉根部粘着的培养基，要全部除去，以防残留培养基滋生杂菌。但要轻轻除去，应避免造成伤根。栽植时用一个筷子粗的竹签在基质中插一小孔，然后将小苗插入四分之一土，注意幼苗较嫩，防止弄伤，栽后把苗周围基质压实，栽前基质要浇透水。栽后轻浇薄水。再将苗移人高湿度的环境中。保证空气湿度达90％以上。一周后可在开一个小口，降低湿度，让幼苗适应外界环境。逐渐增大开口，直至幼苗完全适应外界环境，并正常生长。6小结与感想本次实习，我接触到向往已久的组织培养技术，原本认为很高大上的技术，在老师的细心指导下也逐渐掌握要领。这次，我们进行了麻竹初代繁殖体系的建立和容器苗的移植两项重要的工作。实验的过程很繁琐，每一步都至关重要，每一步都需要我们付出十二分的细心和耐心才能获得最后的成功。在配置培养基时，需要加入的母液种类繁多，我们的细心远远不够，每加入一种母液就核对一种母液的细心制度让我们深深折服。另外，培养基的灭菌至关重要，这决定了之后工作的绝对成败。通过，配置培养基这一基本但是至关重要的工作，我们学会了付出细心，用耐心收获成果。另外，理论与实践是不可分割的，在理论学习的同时，我们还需要认真的进行实验。在现代农业中，组织培养有着极其重要的作用，因此更需要我们在实验中认真的学习组培的技术。根据细胞的全能性原理以及组培原理将离体的植物器官原生质体培养在人工配制的培养基中，给与适当的条件，使其长成人类所需要的组织、器官和完整的植株的过程。而自然下的植株是含有病毒的，这样会导致经济作物大量减产，为了克服这一困难在组织培养前对外植体进行脱毒，这不仅克服了经济作物的减产还提高了产量，大大提高了经济效益。并切植物组织培养实现了高价植物种类的工厂化生产，为这些紧缺植物和植物体内各物质特别是次生代谢物的提取提供了更多的材料。在本次实验中，我发现自身在做实验时还存在很多的不足，在理论知识方面也有很多的欠缺。这就要求我在以后的学习中，更加努力认真。同时也感谢团队同学的包容与互助以及老师的指导和教导。