实验一-石蜡切片技术及HE染色(20111116)

《免疫组织化学相关技术》实验一石蜡切片技术和HE染色DepartmentofHistologyandEmbryology授课教师：吴民华E-mail:[e-mail]实验目的1.掌握石蜡切片标本制作的基本步骤。2.掌握HE染色的原理及过程。重点：1.动物取材及固定。2.HE染色。固定脱水透明浸蜡包埋切片取材石蜡切片术（paraffinsectioning）染色封片基本步骤：一、取材动物：小白鼠目的器官：肝、肾、脾实验用品：手术刀、剪、镊子、纱布、固定液（10%甲醛）等动物处死：颈椎脱臼法1．动物处死后固定2．用纱布或脱脂棉蘸少量生理盐水或蒸馏水将动物胸腹部的被毛打湿3．切开皮肤及皮下组织进行分离，打开胸腔、腹腔取材步骤：一、取材1.取材的顺序2.取材大小3.取材严禁机械损伤4.注意器官的完整性5.同一固定液装多种组织时要注意加标签6.注明取材时间、组织名称、固定液名称、组织块数量等取材的注意事项二、固定目的尽量保持组织的生前状态，防止组织的死后变化、自溶。增加组织的硬度，使组织不易变形，有利于固定后的处理。1．组织及固定液必须新鲜2．固定液的用量一般为组织块体积的10～20倍3．固定的时间视组织块的种类、性质、大小而定固定的注意事项几种常用的固定液10％甲醛固定液bouin固定液√苦味酸饱和水溶液75ml37％～40％福尔马林溶液25ml冰醋酸5ml丙酮4%多聚甲醛√灌注固定固定方法三、脱水、透明及浸蜡1.脱水流程：70%酒精6h80%酒精6h95%酒精Ⅰ1h95%酒精Ⅱ1h100%酒精Ⅰ1h100%酒精Ⅱ1h2.透明：二甲苯Ⅰ30min二甲苯Ⅱ30min3.浸蜡：石蜡Ⅰ40min石蜡Ⅱ40min石蜡Ⅲ40min三、脱水、透明及浸蜡固定脱水透明浸蜡包埋切片取材四、包埋（示教）五、HE染色原理苏木精（Hematoxylin）伊红（Eosin）碱性染料紫蓝色嗜碱性basophilia酸性染料红色嗜酸性acidophilia胞核中染色质和胞质中的核糖体等胞质中的膜性结构（线粒体、溶酶体、滑面内质网和细胞外基质HE染色流程1.脱腊，复水二甲苯Ⅰ二甲苯Ⅱ100％酒精Ⅰ100％酒精Ⅱ95％酒精Ⅰ95％酒精Ⅱ80％酒精70％酒精蒸馏水10′10′10′10′5′5′5′5′5′2.染色苏木精(水溶液）10′自来水（PH7)30′（返蓝）蒸馏水70％酒精5′80％酒精5′伊红(95%酒精配)5′HE染色流程3.脱水，透明，封片95％酒精Ⅰ、Ⅱ各2′100％酒精Ⅰ、Ⅱ各5′二甲苯Ⅰ、Ⅱ各5′中性树胶封片显微镜观察HE染色流程