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《生物化学》和《分子生物学》课程实验教学大纲课程名称：生物化学与分子生物学实验技术英文名称：ExperimentTechnologyofBiochemistryandMolecularBiology课程编号：实验课性质：必修课程负责人：崔行开放实验项目数：3一、学时、学分课程总学时：70课程总学分：2.0二、适用专业及年级本大纲适用于医疗、公共卫生、口腔、护理、预防医学七年制学生。三、实验教学目的与基本要求掌握人体生命的物质基础，生物大分子的结构和功能。掌握各种生物物质能量的正常代谢过程，代谢调节，代谢障碍和临床疾病的关系。通过实验掌握基本的生物化学实验技术及验证部分课堂理论知识。在实验教学中，要求学生掌握电泳技术、层析技术、分光光度法、离心技术、蛋白质及分子生物学等技术。掌握蛋白质、核酸、酶类的提取、测定，学习血液成分生化测定，以及部分生物化学理论知识的验证。掌握紫外—可见分光光度计、高速离心机、PCR仪、层析系统、电泳仪系统、电热恒温水浴箱、凝胶扫描仪、电动匀浆器等仪器的使用，了解其性能、适用范围及注意事项。四、主要仪器设备紫外—可见分光光度计、高速离心机、PCR仪、层析系统、电热恒温水浴箱、凝胶扫描仪、电泳仪、电动匀浆器等。五、实验课程内容和学时分配序号实验项目名称实验内容学时分配实验属性实验类型每组人数实验要求指导教师已开/未开11．可见分光光度技术2．蛋白质含量测定1．掌握朗伯-比尔定律。2．掌握比色定量分析标准曲线的制备。3.熟悉可见分光光度计的使用。5设计基础2必做已开2紫外分光光度法测定蛋白质含量掌握紫外分光光度计的使用方法2综合基础2必做已开3层析技术，蛋白质的分离纯化与鉴定1.熟悉层析技术的原理、分类及应用范围。2.掌握凝胶层析的基本原理、特点和应用。用SephadexG25脱盐法和用离子交换剂进行蛋白质的纯化。3.学习盐析的方法，用醋酸纤维素薄膜电泳法进行蛋白质的鉴定。7设计基础2必做已开4离心技术，核酸的分离纯化及含量测定1．熟悉离心技术的基本原理。掌握离心力及其作用。掌握常用离心机使用方法和注意事项。2.学习核酸的分离及生物学特性，了解RNA、DNA的提取和含量测定方法。7综合基础2必做已开5酶的提取及比活性测定1．掌握酶提取纯化的方法和技术以及应注意的问题。2.了解测定碱性磷酸酶活性的原理和方法。3.掌握紫外分光光度计的使用方法。4.了解蛋白质测定在医学中的应用。7综合基础2必做已开6底物浓度对酶促反应速度的影响本实验以碱性磷酸酶为例，测定不同浓度底物时的酶活性，再根据Lineweaver-Burk法作图，计算其Km值。2验证基础2必做已开7pH对酶促反应速度的影响本实验以磷酸苯二钠为底物，在不同pH值的甘氨酸缓冲液条件下，测定碱性磷酸酶的活性，从而确定其最适pH值。2验证基础2必做已开8温度对酶促反应速度的影响本实验以碱性磷酸酶为例，在不同温度下保温一定时间，观察酶活性的差别。2验证基础2必做已开9聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血LDH同工酶掌握电泳分离同工酶的方法并了解其原理，了解显色原理，了解血清乳酸脱氢酶同工酶电泳分离的临床意义。5综合基础2必做已开10胰岛素对血糖含量的影响及测定1．熟悉激素对血糖含量的影响因素。2.学习邻甲苯法测定血糖的原理，了解测定血糖的方法。1.5综合基础2必做已开11糖酵解中间产物的鉴定1．复习糖酵解的主要中间步骤及其产物，2.了解一碘醋酸对3-磷酸甘油醛脱氢酶的抑制作用。1.5验证基础2必做已开12氨基转换作用GPT测定掌握血清谷丙转氨酶活性测定的方法及临床意义1验证基础2必做已开13血清尿素氮测定学习尿素测定的方法。1验证基础2必做已开14血清脂类薄层层析1．学习脂类薄层层析法的具体操作。2．了解薄层层析在脂类成份分析及脂代谢研究中的用途。1综合基础2必做已开15电泳技术，血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳1．熟悉电泳技术的基本原理。2.掌握影响电泳的因素(介质、缓冲溶液、电场强度、电渗等)。3.掌握电泳技术的应用，了解电泳的分类。4.掌握正常人血浆脂蛋白的分类。1.5综合基础2必做已开161．分子生物学技术。2.感受态的转化和鉴定1.掌握DNA提取、转染、PCR、核酸杂交、DNA重组等生物学技术和方法。2.掌握感受态的转化和鉴定。7综合基础2必做开部分17质粒的提取及鉴定掌握质粒的提取及电泳鉴定的方法7综合基础2必做开部分18酶切及酶切鉴定掌握限制性内切酶的特点及应用。7综合基础2必做开19DNA的回收及重组鉴定学习DNA的回收方法及重组子的连接技术.7综合基础2必做开部分20SDS-PAGE测定蛋白质分子量在聚丙烯酰胺凝胶中加入阴离子去污剂SDS测定蛋白质的相对分子量。7综合基础2必做已开21等电聚焦测测定蛋白质等电点根据蛋白质在不同pH环境中所带净电荷等于零时，将蛋白质分离。7综合基础2必做未开22脂蛋白的分离和提纯用不同沉淀剂或不同浓度的沉淀剂将脂蛋白分开，分别测定各类脂蛋白。5综合基础2选做未开23PCR扩增技术对提取的基因组DNA进行随机引物PCR扩增，再观察扩增的结果。6研究基础2选做未开24Western印迹应用Western印迹技术，分析经SDS-PAGE电泳分离并转移到硝酸纤维素薄膜上的特定蛋白质成分。7综合基础2选做未开25组织和细胞总RNA提取学习RNA的制备，分析并了解基因表达在转录水平上的调节机制。7研究基础2选做未开26鸡卵黏蛋白的分离纯化学习离子交换层析的基本原理、过程及树脂的应用。10研究基础2选做未开