第四章`食用菌菌种生产第一节`菌种生产流程和设备

食用真菌学第四章、食用菌菌种生产食用真菌学第一节、菌种生产流程和设备：一、生产流程种菇（种木）选择↓种菇（种木）处理，孢子收集↓斜面培养基制备→分离培养↓→母种培养↓原种培养基制备→原种培养↓栽培种培养基制备→栽培种培养食用真菌学食用真菌学食用真菌学食用真菌学食用真菌学二、生产设备1接种设备：o用于分离和扩大各级菌种的专业设备o包括接种室、接种箱、超净工作台、接种工具食用真菌学接种室要求：内外两间，面积适宜，容易搞清洁，能进行灭菌食用真菌学内间为接种工作间：5~6平方米，门窗紧密，尽量减少灰尘积累，内置工作台外间为缓冲间：2~3平方米，用于进接种间前换衣、帽、鞋，同时为内间提供与外界相隔环境食用真菌学内外间均为拉门，位置相互错开体积应尽量小，利于彻底灭菌装过滤空气的通风设施内外间墙、地板、天花板、室内用具应尽量光滑易擦洗食用真菌学接种箱缩小的接种室双人、单人操作型易消毒、规模受限制食用真菌学食用真菌学食用真菌学超净工作台局部净化设备o空气过滤除菌无论接种箱还是净化工作台，均应放在较干净、空气中尘埃少的环境中，最好置于接种室内食用真菌学食用真菌学食用真菌学接种工具接种针接种环接种刀接种铲镊子接种器等食用真菌学食用真菌学2菌种培养设备放置接种后各级菌种，并提供适宜温度和通气条件，使菌丝生长良好的专用设备食用真菌学培养室培养架：以操作方便为宜,宽0.7~1.2米，层间40cm调温：电炉、红外线、暖气管、门窗、抽风机测温：干湿球温度计照明：避免使用蓝光灭菌：紫外灯食用真菌学食用真菌学培养箱（恒温箱）根据需要使温度恒定在一定范围内,一般用于培养斜面试管和少部分原种食用真菌学食用真菌学3、培养基加工设备木材切片机木片粉碎机搅拌机装瓶装袋机食用真菌学食用真菌学食用真菌学食用真菌学食用真菌学食用真菌学食用真菌学食用真菌学食用真菌学4.灭菌设备：灭菌：将环境中的所有微生物杀死。o一般采用热力灭菌设备干热灭菌设备o原理:利用干燥热空气进行灭菌灼烧灭菌：酒精灯电热恒温干燥箱：160℃1~2小时o适宜玻璃器皿、金属用具灭菌食用真菌学湿热灭菌设备利用潮湿热空气进行灭菌高压灭菌o手提式高压灭菌锅：9瓶o立式高压灭菌锅：45瓶o卧室园形高压灭菌锅270瓶o卧式方形高压灭菌锅（消毒柜）500瓶121℃20-60分钟食用真菌学食用真菌学食用真菌学食用真菌学常压灭菌：o砖石o油桶o蒸笼等105℃6~8小时食用真菌学食用真菌学食用真菌学5、制种容器和消毒药品容器o750ml无色、浅色菌种瓶o聚丙烯菌种袋消毒药品o甲醛o75%洒精o高锰酸钾o漂白粉、来苏儿食用真菌学食用真菌学三、菌种厂选建交通方便、水电充足地势干燥、环境干净空气清新、30米内没有畜禽圈舍、饲料仓库、排废工厂有堆放、摊晒原料地食用真菌学布局電源帶開關插座帶開關插座帶開關插座紫外光管紫外光管紫外光管照明光管照明光管照明光管照明光管照明光管照明光管帶開關插座帶開關插座空調及抽气机帶開關插座空調獨立電源路燈照明光管照明光管照明光管照明光管紫外光管紫外光管帶開關插座路燈開關食用真菌学第二节、母种的分离和培养一、母种培养基配制1配制原则o营养成分含量与比例适合食用菌生长发育opH、EV适宜o有一定pH缓冲能力食用真菌学2配方PDA（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）适合各种食用菌马铃薯200gG20g琼脂(Agar)20g水1000mlpH自然食用真菌学合成培养基适宜保藏菌种MgSO40.5gK2HPO41gG0.46g蛋白胨20gAgar15g水1000ml食用真菌学苹果琼脂培养基特别适合草菇菌丝生长苹果100g（压碎取汁）蔗糖20g琼脂2g水1000ml食用真菌学高梁琼脂培养基：对平菇生长有利o高梁粉30go琼脂10go水1000ml食用真菌学酱油洋葱琼脂培养基宜香菇、平菇、金针菇、木耳酱油50ml洋葱煎汁100ml(500g洋葱+水500ml煮沸30分钟后补足水)取滤液琼脂20g水850ml食用真菌学3配制称量调配o马铃薯、洋葱、稻草等，水煮30分，双层纱布过滤o淀粉、易溶物质，加少量水，调成糊状（避免成团）o难溶物质，加水、加热、搅拌食用真菌学o按食用菌所需o试纸测定o用INNaOHorINHcLpH测定与调整食用真菌学加入琼脂并溶解预湿加入培养基加热搅溶食用真菌学过滤分装：双层纱布过滤1/5试管（5ml）严禁沾试管口、上壁食用真菌学食用真菌学加棉塞、包扎棉塞过滤空气、防污染松紧适宜内2/3外1/3牛皮纸包扎食用真菌学食用真菌学灭菌高压蒸汽灭菌锅进行0.05mPa放汽阀打开→00.05Pma放汽阀打开→00.15mPa维持15~20分→0食用真菌学食用真菌学食用真菌学二、母种的分离培养介绍组织分离法种菇选择：o个体健壮o菇形典形美观o无病虫害o适度成熟o种菇处理：75%酒精擦表面（草菇）食用真菌学分离操作：菌柄与菌盖交界处取组织块木耳经无菌水冲洗，切成小块放入培养基纯化培养o将菌丝块移入PDA平板培养o若纯：四周辐射状生长，外缘整齐一致o否则：边缘参差不齐，色素分布不均匀o将较一致的菌丝的前端，切割→新培养皿食用真菌学食用真菌学食用真菌学培养温度大部分25~28℃草菇30℃食用真菌学第三节、原种、栽培种的生产一、配方与制配1木屑、竹屑培养基木屑（阔叶树）78%麸皮或米糠20%蔗糖1%石膏粉1%木生类菌：香菇、平菇、木耳、金针、猴头、灵芝食用真菌学制配称料——糖溶于水中混料——加入糖水60~65%pH食用真菌学2棉籽壳蔗渣培养基配方棉籽壳78%麸皮20%蔗糖1%石膏粉1%金针、平菇、风尾菇、草菇、银耳、木耳、猴头食用真菌学配方甘蔗渣75%麸皮或米糠24%石膏粉1%平菇、风尾菇、金针、毛木耳食用真菌学制法称料棉籽壳或甘蔗渣堆12~24小时（均匀吸水）辅料60~65%pH食用真菌学3谷粒培养基以小麦、高梁、玉米等为主料制作的培养为谷粒培养基小麦98%碳酸钙2%银耳外、其它木生型、粪草型均适合食用真菌学配方稻谷50%棉籽壳40%麸皮8%石膏粉2%平菇、风尾菇食用真菌学制作麦粒：o清水或0.1%多菌灵水浸泡16~24小时，捞起，摊开，底部无积水时，加辅料，调匀即可。稻谷：o冷水浸2~3小时，煮开20~30分，待大部分稍开裂，即可起锅。沥干拌料。食用真菌学4粪草培养基以畜粪和稻草为主料的培养基干稻草63%干牛粪25%玉米粉4%过磷酸钙3%大豆粉3%硫酸镁2%蘑菇、草菇食用真菌学制法稻草切成3cm长，浸透捞起，沥干至不滴水混合堆制20天，中间翻3~4次食用真菌学5木块木条培养基以阔叶树毛竹为主料配以辅料制成的培养基.配方枝条1000go麸皮或米糠250go石膏粉10go营养液(蔗糖1%，磷酸二氢钾0.1%，硫酸镁0.1%）食用真菌学制法毛竹或枝条，截成10~12cm长，3~4mm宽，一头削尖，晒干浸入0.1%多菌灵或0.1%高锰酸钾液泡30分钟40~50℃营养液中泡1小时捞出沥干装瓶（尖头朝下，200支/750ml瓶）上盖1.5cm厚木屑培养基食用真菌学二、装瓶装袋要求松紧适宜，瓶至颈，袋40%，洗净瓶口、打园洞,塞棉塞,灭菌食用真菌学食用真菌学食用真菌学食用真菌学三、接种无菌条件：每立方米10ml甲醛+5g高锰酸钾，24小时后开紫外灯30分1支母种5~6瓶栽培种1瓶原种50~80瓶栽培种食用真菌学食用真菌学四、培养平菇25℃25-35天草菇32℃1周3-5天内直立放置,然后倒卧叠放，适时转动（水分，菌丝生长均匀）定期检查，剔污3个月内必须使用最多不能超过半年食用真菌学第四节、食用菌的菌种质量鉴定与保藏1、母种质量鉴定：形态鉴定：合适培养基，适宜温度培养,菌丝生长快，整齐，浓而健壮食用真菌学出菇（耳）检查菌丝爬料快，满袋快出菇时间适合周期出菇多而整齐菇形美观食用真菌学2．原种、栽培种质量鉴定：外观要求菌丝已长满培养基，草菇有少量或没有红褐色厚垣孢子，银耳菌种在培养表面出现子实体或子实体原基菌丝生长健壮，绒状菌丝多，分布均匀，色泽符合，该菌类菌丝的色泽无杂菌污染、无杂色出现食用真菌学代数符合要求：母种转管4~5次内。食用真菌学菌龄适合常温下，3个月内有效。（满瓶后存放时间）草菇、风尾菇最好1个月内使用。食用真菌学重量和酸碱度符合要求依不同食用菌重量要求400克/瓶食用真菌学3、保藏斜面低温保藏：o4℃左右6个月转管草菇：5℃死亡，10~12℃保存o用牛皮纸包扎试管口，再用黑纸密封试管o干净、阴凉的环境中保存，10-12C为宜，3-4月转管一次o温度不能低于5C，培养基中琼脂用量可适当加大，以增加保存期食用真菌学液体石蜡保藏：把液体石蜡装入三角瓶内，塞上棉塞，高压蒸汽灭菌1小时，放入30C左右的温箱内培养24小时，再灭菌1小时，放入40C环境中，使水份蒸发，至石蜡透明倒入斜面菌种试管内，淹过斜面1cm然后直立于试管架上放在常温条件下保藏，1-2年转管一次。食用真菌学使用方法倒去液体石蜡，用无菌水冲洗斜面2-3次，挑取少许菌丝接入斜面培养基上培养，至菌丝长满斜面即可用于生产。不倒去石蜡，直接用接种针从斜面上挑取少量菌丝接入斜面培养基上培养，菌种仍可继续保藏。食用真菌学麦粒保藏：麦粒泡8~12小时，稍沥干，装入大试管塞好棉塞，灭菌1小时--28~37℃置24小时--灭菌1小时接种长满后于干燥器干燥1个月4℃或凉爽、干燥、干净处，1年以上使用时，在每支斜面培养基上接入一粒麦粒，培养至菌丝长满斜面即可食用真菌学第五节、菌种的衰退与复壮1衰退优良性状退化，典型症状变异，质量负变预防衰退措施o控制菌种传代次数o采用有效的菌种保藏方法o创造菌种生长的良好营养条件和外界环境食用真菌学2复壮从衰退群体中找出尚未衰退的少数个体，达到恢复菌种优良性状的一种措施。食用真菌学复壮方法淘汰已衰退个体：无菌条件下，将试管菌丝刮入100ml无菌水中，振荡，分散，稀释10倍，摊于平皿中生长，挑选萌发快，生长健壮的菌丝接种。定期重新分离菌种，1~2年后分离一次木生菌类要定期接入木材中，重新分离