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大连教育学院学报1995年第l、2期《大肠杆菌生长曲线测定》实验方案的改进饶可扬摘要:本文.通过时大肠样菌生长曲线测定方法的研完,采用加大接种量,大瓶接种,然后分试管培养的方法,时原实验方案进行改进,减少了操竹误差,缩短了实验时间,‘吏这一基础实验在微生物学课程中昔遍开设成为可能。关锐饲:大肠杆菌、生长曲线大肠杆菌生长,曲线的测定是微生物学实验中常见的墓本实验。对于学生理解微生物生长和繁殖的规。律,了解不同培养条件对微生物生长和繁殖情况的影响都是必不可少的。但是,常规实验方案有两个缺点:一是在连续培养过程中,多次从同一三角瓶中取样,如果取样时间过长,会造成培养温度变化,如果取样过快,振荡不匀,则测定结果误差大。这些都会影响曲线的绘制。对此复旦大学的周德庆同志设计了一个带有侧臂试管的三角瓶,可使这种误差减小‘·。但由于这种特制的三角瓶不易买到,而且测定所用的分光光度计也需要改装,这种方法在教学中普及有一定的困难。二是取样测定的时间要持续20小时,使开这个实验课受到很大的限制。因此,虽然这个实验很重要,但各高校的微生物学实验课中却很少选做这个实验。本文根据多次试验并参考其它实验方案º,对常规实验方法进行改进,不仅提高一r实验的准确性,缩短了测定时间,间时还比常规实脸节约近一半的培养基。大肠杆菌生长曲线测定的常规实验以范秀容、沈萍编的《微生物学实验》为标准,改进后的实验方案如下:1.将大肠杆菌菌种制成约18亿/毫升的菌悬液。一般情况下每100毫升培养18小时的大肠杆菌培养液,离心(300Or·p·m‘10)后制成20毫升菌悬液即可。2.取240毫升无菌培养液一瓶,按5纬接种量,接入上述菌种。充分摇匀后分装到24支无菌试管中(每支10ml)。分别标明1一24傲置37℃振荡培养,培养1.。小时后将13一16号试管取出,每支各加入无菌酸溶液0.25毫升,再继续振荡培养。培养1.5小时后将17一24号试管取出,每支各加入无菌浓缩肉汤蛋自脉液0.25毫升,然后继续振荡培养。3一按下表将不同培养时间,不同培养条件的试管取出,放入4℃冰箱中保存。作适当稀释,使菌悬液的光密度(OD值)控制在。.0一。.4范围内,再置光电比色计中进行比浊测定(400一440毫微米波长),用未接种的肉汤蛋白膝液为空白对照。记下光密度值。一.一_·109·吕一,l内bJ马一,1..1,自7n23…一…6一1015221兮一1!!115一921!一…4一8142037二J.,妇2.勺.。}。.5{11一间)一时时一样小一取(试管编号2}3}4!5!6O甘,l几石1上nJ7,1曰.14.按间隔时间全部测完以后,以菌悬液光密度值(OD)为纵坐标,培养时间(hr)为横坐标绘出大肠杆菌在正常、加酸、加营养三种条件下的生长曲线。改进后所绘制的生长曲线图如下:进:盆糊时取朔林.之知奉亡和—“常养—舀术-—刁。,勺炙今rLf..eses护esll上jrse.D讨·汀4犷‘夕沙终气月rJ从所绘曲线可以看出,改进后所绘曲线的四个时期区分明显,与常规方法所测曲线的变化规律相一致。加酸和加营养对大肠杆菌生长规律的影响也表现得很明显,与正常情况相符。从实验方案中可以看出,改进方案在减少误差方面采用了大瓶接种,接种后充分摇匀再分装。取样时只将所需试管取出,不影响其它试管正常培养的方法。这样可以有效地避免取样不匀和影响培养温度所引起的误差。在缩短实验时间方面采用了增加接种量的方法,可以将整个实验时间由原来的20小时缩短到8小时。使这个.实验在教学中得到采用成为可能。木方案不仅在解决实验的准确性和可行性方而都有了明显的进展,而且,由于将原来的三角瓶培养改为试管培养和培养时间的缩短,使培养基的用量由原来的每小组600毫升减少到每小组24。毫升。‘可以节约实验经费约l/2。在目前各学校教学经费短缺的情况下,对以较少的资金,开设较多的高质量的实验课,确保教学质量,有着重要的实际意义。一—---一_(责任校对:文碑阶注:周德庆,钱俘柔,范秀容、《徽生物学实验手册》,上海科技出版社.《微生物学实验》,北京大学出版社,1985年沈萍,《微生物学实脸,,高等教育出版社,86年皿2月,示5一88页.10月1x6一19页.1930年tl月,65一67页,110¹º»