反硝化聚磷菌的培养驯化及其FISH鉴定占茹

FISH，，（，215011）：SBR，-，。FISH，NO3--N，Rhodocclussp.，，Pseudomonassp.。：；；FISH；：X703：A：1672-0679（2010）04-0010-05、、[1]。，，。[2，3]（-、---、-）[4，5]（-、-）。-（DPB）。。DPB，[6]，。(FISH)，。，SBR，，，-DPB。FISH，DPB，。11.1SBR（1），60cm，60cm，17L，13L。3，8h，10min，150min，210min，、、。8L，4L，KNO31L，30mg/L，45min。3000~4000mg/L，SRT16d。，、。1.2。CH3COONa、NH4Cl、KH2PO4COD、NH4+-N、PO43--P。1。———————————————————[]2010-10-22[]（1985-），，，。：（1964-），，，。，Email:[e-mail]1SBR234（）Vol．23No．4201012JournalofSuzhouUniversityofScienceandTechnology（EngineeringandTechnology）Dec．20104。1.3CODCODCr；（PO43--P）：[7]；：[7]；：N-(1-)[7]；：[7]；MLSS：[7]。1.4FISH1.4.1：EUB338（5’-GCTGCCTCCCGTAGGAGT-3’），TexasRed5’，；PAO651(5’-CCCTCTGCCAAACTCCAG-3’)，FITC5’，β-Proteobac-teriaRhodocyclussp.；Ps（5’-GCTGGCCTAGCCTTC-3’），FAM5’，Pseudomonassp.。25ng/μL。1.4.2SBR，30min，4%4℃30min。1～1.5mLEP，12000r/min4℃5min，。0.01mol/LPBS，12000r/min5min，20.01mol/LPBS。1∶1PBS，-20℃。1.4.3，50%、80%、95%3min，。10μL40μL，15μL，，（PAO651PsEUB338）。（48℃20min）20min，，。。2。PAO651。222.12，117.1%，2.86mg/LNO3--N，，。3，，5.09%，6、7，，33~7d。1~7d，COD249~277mg/L（4），COD183~224mg/L，COD，CODNO3-DPB[2]。（）COD，DPB。DPB
 1

 !#$#%&##’2PO43--P















!#$!：FISH112010（），DPB，。CODDPBNO3--N，。1~7dCODCODDPB，COD（4），COD。DPB，，（PHB），。COD，，。28，（3），DPB。19~21d，19~21dCOD，COD，PHB，，。22~40dCOD220mg/L，4COD，DPBPHB，PHB。40d，80%，1mg/L；COD70%，COD60~70mg/L；，1mg/L。SBR-40d，DPB，。2.2FISH5SBR5、24、40dFISH，5（a）TexasRedEUB338；5（b）FITCPAO651；5（c）ProPlusimage6.05（a）、5（b），Rhodocclussp.。5，5d，Rhodocclussp.，5%（ProPlusimage6.0），，，。-，Rhodocclussp.，，24d，Rhodocclussp.16%，，。（40d），NO3--NDPBRhodocclussp.，29%。Bond[10]Rhodocclussp.。JohwanAhn[11]FISHO2NO3--N，Rhodoc-clussp.，。，PsSBR，Pseudomonassp.。、Pseudomonassp.[12，13]。，，34COD124，。，FISH，NO3--NDPB，Rhodocclussp.，，Pseu-domonassp.。5FISH3（1）SBR，，，-，40d，，COD60~70mg/L，70%；PO43--P1mg/L，80%；NO3--N1mg/L。（2）FISH，NO3--NDPB，Rhodocclussp.，，Pseudomonassp.。：[1]，.[J].，2003，19（9）：32-34.[2]，，.[J].，2009，25（5）：5-8.（a）EUB338，TexasRed，=10μm（b）PAO651，FITC，=10μm（c）ProPlusimage6.0（a）、（b）5d5d5d24d24d24d40d40d40d：FISH132010（）[3]，，，.[J].，2004，24（1）:45-49.[4]，.SBR[J].，2009，32（8）：6-8.[5]，，.[J].，2006，5（7）：74-77.[6]，.[M].：，2000.[7]《》.[M].：，1989.[8]AmannRI.Insituidentificationofmicro-organismsbywholecellhybridizationwithrRNA-targetednucleicacidprobes[A]//In:AkkermansADL,ElsasJD,deBruijFJ,editors.Molecularmicrobialecologymanual[C].London:Kluwer,1995,1-5.[9]KHSchleifer,RAmann,WLudwig,etal.NucleicacidprobesfortheidentificationandinsitudetectionofPseudomonasspp.InE.Galii,S.Sil-ver,andB.Witholt(ed.)pseudomonas:molecularbiologyandbiotechnology[M].WashingtonD.C.:AmericanSocietyforMicrobiology,1992：127-134.[10]PLBond,PHugenholtz,JKeller,etal.BacterialcommunitystructuresofPhosphate-removingnon-phosphate-removingactivatedsludgefromsequencingbatchreactors[J].Appl.Environ.Microbiol,1995，61（5）：1910-1916.[11]JAhn,TDaidou,STsuneda,etal.Characterizationofdenitrifyingphosphate-accumulatingorganismscultivatedunderdifferentelectronacceptorconditionsusingpolymerasechainreaction-denaturinggradientgelelectrophoresisassay[J].WaterResearch,2002，36：403-412.[12]，，，.[J].，2003，29（8）：33-35.[13]，，，.[J].，2005，21（4）：345-349.EnrichmentandCultivationofDenitrifyingPhosphorus-removingBacteriaandFISHIdentificationZHANRu,SONGYin-ling,LIHua(SchoolofEnvironmentalScienceandEngineering,SUTS,Suzhou215011,China)Abstract:Thedenitrifyingphosphorus-removingbacteria(DPBs)werecultivatedsuccessfullybytheanaerobic-anoxicapproachintheSBRreactor,showinggoodperformanceinthenitrogenandphosphorusremoval.Inaddi-tion,theactivatedsludgeofthedenitrifyingphosphorus-removingbacteriaindifferentdomesticationperiodswasidentifiedthroughtheFISHtechnique,theresultshowedthat,duringtheprocessofNO3-Nastheelectronac-ceptortocultivatetheDPB,theRhodocclussp.andtherelatedmicrobialstrainsbecamethedominantbacteriagradually,occupyingaconsiderableproportion,andthePseudomonassp.werehardlydetected.Keywords:denitrifyingphosphorus-removingbacteria;cultivationapproach;FISH;identification（：）14