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湖北省生物工程学会2004年年会论文集大肠杆菌表达的禽流感病毒NSI蛋白ELISA鉴别诊断方法的建立赵思婷金梅林,王贵华李红超张瑞华唐勇陈焕春(华中农业大学动物病毒室武汉430070)禽流感是由正粘病毒科A型流感病毒引起的一种禽类的感染或/和疾病综合征。在一定的条件下,禽流感病毒能直接感染哺乳动物,甚至人,不仅给畜牧业的发展带来巨大的障碍,甚至给人类的健康构成新的威胁。己有研究表明,非结构蛋白及其抗体可以作为病毒感染机体的一个重要标记,从而可以将其区分免疫群和感染群,进行鉴别诊断,但目前国内外尚未有应用检测非结构蛋白抗体作鉴r别禽流感的报道。因此,建立新型的快速灵敏的ELISA鉴别诊断方法以区别灭活庙免疫鸡和野毒感染鸡,检测隐性感染鸡就成为禽流感防制技术研究的重要课题。本研究根据禽流感病毒非结构蛋白(NSI)基因的序列,设计了l对针对NSI基因的特异性引物,从本室分离的毒株中扩增了HgNZ亚型流感病毒的NSI基因。扩增的DNA片断大小约65Obp,将其克隆到pM1D8一T载体中,用sal工和油oI双酶切鉴定和序列测定后,进一步将其插入成f一28a中,构建了原核表达载体PET一28a一NSI,其在五co1z’BL21(DE3)中以IPTG诱导表达,经SDS一pAGE分析,表达特异带约为30DK。western一bl。tting分析表达产物具有抗原性。利用表达的蛋白作为抗原包被酶标板,建立区分野毒感染鸡与用灭活苗免疫鸡的ELISA鉴别诊断方法,临床检测结果表明:该NS卜ELISA方法特异性强,敏感性高,NSI一EILSA诊断特异性达94.%4,诊断敏感性为%,%3,可用于禽流感的鉴别诊断。关键词:禽流感病毒NSI基因克隆原核表达EL工SA反硝化真菌一细菌优化组合的筛选及反硝化能力的研究张山江月郑永良陈舒丽邹爆平刘德立(华中师范大学生命科学学院武汉430079)反硝化是利用反硝化菌的作用将硝态氮或亚硝态氮转化为气态氧的过程。反硝化现象广泛存在于自然界,在过去曾一度认为反硝化只存在于细菌中,关于反硝化作用基本机制的信息都来自于细菌。细菌反硝化作用以及催化反硝化的各类酶的基本特性己被阐明。然而最近研究发现,在真菌中也存在反硝化作用。真菌的反硝化过程中有着与细菌不同的特点:反硝化细菌还原反应的最终产物是NZ。但大多数真菌反硝化作用的终产物是N刃,只有少数真菌与其它微生物共同反硝化(C。一denitrification)生成N:。真菌反硝化作用强,且厌氧条件不严格。丝状真菌易于吸附,培养后易收获。对真菌反硝化作用的机制和反硝化细菌一真菌组合的筛选及反硝化作用条件的研究,将为生物除氮技术提供一个新的途径。本试验从多种真菌中筛选出反硝化能力强的真菌F和Y分别与一株具有高脱氮活性的细菌HS一03进行1+l组合。通过单因素多水平试验,确定了混合培养的最佳条件:以唬拍酸钠为碳源,NaNo3为N源,C加为10,pH==.75,温度30℃,微厌氧条件下培养。在最佳培养条件下,F十HS·03和Y+HS一03均能在30小时内将10mM的NO3-去除90%以上。关锥词:真菌一细菌组合,反硝化,最佳培养条件