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2015：2015－03－11：（2009ZKC04－16）：（1988－），，，，（）15202430998（）1092211866＠qq．com；，（1954－），，，，、，（）wuling．chen＠263．net。541320157HubeiAgriculturalSciencesVol．54No.13Jul.，2015，、、［1］。1500～2000，、，50％～80％，，1～40，6~8。，，90％［2］。。4：、、、。，，，［3，4］。、［5］。1，1，2，1，1，1（1．，710069；2．，450046）：、2，L－1D－2，、，L－1D－2，，。，（Sphingobacteriummultivorum）（Zoogloeaoryzae）。9％、72h、pH7．5，，85％。，。：；；；：Q93－331；X741：A：0439－8114（2015）13－3104－04DOI：10．14088／j．cnki．issn0439－8114．2015．13．009ScreeningonHighlyEfficientOil－degradingBacteriaandTheirApplicationinOilSewageDisposalHUANGMin－gang1，FURui－min1，2，GUYa－nan1，GUOYan－zhao1，CHENWu－ling1（1．CollegeofLifeScience，NorthwestUniversity，Xi＇an710069，China；2．HenanInstituteofEducation，Zhengzhou450046，China）Abstract：Twostrains（L－1，D－2），whichcandegradepetroleum，wereisolatedfromcrudeoilofXinjiangoilfieldandDaqingoilfieldrespectively．Afterthemorphological，physiological，biochemicalandmolecularanalysis，thetwostrainswereidentifiedandmixedtogetherinequalproportiontoformthemicrobialagents．Then，themicrobialdegradationratesofcrudeoilwithdifferentconcentrationandpropertiesweretested．Afterthat，themicrobialagentswerepreliminarilyappliedtocrudeoilsewagedisposal．Aswasshownintheresults，thestrains（L－1，D－2）wereidentifiedasSphingobacteriummultivorumandzoogloeaoryzaerespectively．Theoptimalinoculatingconcentrationofthemicrobialagentswas9％，theoptimalprocessingtimewas6h，andoptimalpHwas7．5．Underthatcondition，theremovalrateofcrudeoilcouldreach85％．Therefore，thetwooil－degradingbacteriumwereconsideredtohavegreatutilizationpotentialsonoilsewagedisposal．Keywords：oil－degradingbacteria；crudeoil；oilsewage；waterdisposal1311．11．1．1，1。1．1．2：NaCl10g，NH4Cl1．5g，K2HP040．5g，MgS040．5g，CaCl20．2g，KCl0．1g，FeS04·7H200．02g，5mL，1000mL，pH7．0；：3g，10g，NaCl5g，20～30g，1％，1000mL，pH7．0～7．2；：NaCl10g，NH4Cl1．5g，K2HP040．5g，MgS040．5g，CaCl20．02g，KCl0．1g，FeS04·7H200．02g，1000mL，pH7．0，。1．1．3，2。1．21．2．110g200mL，35℃、150r／min7d，［6］。D－1～D－6，L－1～L－7。，1mL100mL4g／L，，150r／min，35℃，5dGC［7］，3，4g／L，，。LB，。1．2．2，LB，32℃24h，，，［8］。1．2．3［9］，DNA16SrDNA。16SrDNAPCR（27F：5′-AGAGTTGTCATGGCTC-3′1492R：5′-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3′），。PCR（94℃，5min；94℃，50s→50℃，50s→72℃，90s，30；72℃，10min）。PCR，MEGA3．0NCBI16SrDNA，1000［10］。1．2．41）。，，1、2、4、6、8、10g／L，5％，3，，150r／min，35℃，5、10、15d，GC。＝（m1-m2）／m1×100％，，m1，m2。2）。，4g／L，5％，4，3，1（＋）、2（＋），，150r／min，35℃，15d，GC。1．2．5，L－1D－21∶1，1000mL，35℃、150r/min，、、pH3，L16（43），34，，。22．11//%57.4237.68//%21.6116.52//%6.7220.822//mg/L//mg/L//mg/LpH//℃1000~300062～15642750～512508.5～10.842～552000109470009.7548.5：3105201576，L－1～L－7D－1～D－6，，，，L－1D－2。3。L－1D－2LB，，L－1D－2，。［8］L－1D－2：L－1D－2，，，L－1LB，，，，D－2LB、、。L－1D－216SrDNAPCR，1500bp，1，PCR，1491bp1482bp，NCBI16SrDNA，Bioedit7．0，，（2），，L－1SphingobacteriummultivorumIAM14316（AccessionNo．NR＿040953）99％，D－2ZoogloeaoryzaeA－7（Ac-cessionNo．AB201043）97％，，L－1（Sphingobacteriummultivorum）D－2（Zoogloeaoryzae）：2．22．2．1，，。L－1D－21∶1，5％，，3，3，，，5d，，12．4%～32．3%。10~15d，4g／L，，4g／L，，4g／L，，，，，、，。，，。5d，1g／L；10d15d，4g／L。，，，．10d，，，（4g／L），。2．2．2，，［11］；，，35d10d15d80706050403020100//%1g／L2g／L4g／L6g／L8g／L10g／L3L1L2L3L4L5L6L7//%46.59.812.638.432.726.825.2D1D2D3D4D5D6//%33.142.515.728.325.731.362L－1D－21L－1D－216SrDNAPCR2000bp1000bp750bp500bp250bp100bpL-1D-2310613412345678910111213141516T1T2T3T4RpH2（7．5）21（6）113（8．5）4（9）334414232210．8290．8258．2249．2801（3％）3（9％）4（12％）2（6％）323311412244222．6241．8271．3273．350．73（72h）4（96h）342（48h）1（24h）1342413221202．9239．2273．0293．991//%61.286.164.356.152.946.749.582.870.353.681.437.564.774.358.469.2﹥﹥，，［12］。、4，，，，，。4，，，。，，，。2．3L16（43）［13］，4，4R3﹥R1﹥R2，，pH，。4，pH7．5、12％、96h，、，pH7．5、9%、72h。32，、，2（Sphingobacteriummultivorum）（Zoogloeaoryzae）。L－1D－2，46．5％42．5％。［14，15］、。1∶1，、，，、，，4g／L，；。，34，，9％，pH7．5，72h，。，［16］，。，，，。，。，，。：［1］《、、》．、、［M］．：，2001．［2］，，，．121009080706050403020100//%1（），2（）4（3113）：310713［J］．，2014，39（2）：126－128．［3］，，，．［J］．，2013，13（15）：4313－4316．［4］，，，．［J］．，2006，19（4）：20－26．［5］，，，．［J］．，2003，23（12）：13－15．［6］，，，．2［J］．，2014，30（1）：60－64．［7］．GC－MS［J］．，2012（4）：92－99．［8］RE，NE．［M］．．《》，．：，1984．［9］FANIR，BANDIC，BAZZICALUPOM，etal．PhylogenyofthegenusAzospirilllumbasedon16SrDNAsequence［J］．FEMSMicrobiolLetters，1995，129：195－200．［10］HANJ，SUNL，DONGX，etal．Characterizationofanovelplantgrowth－promotingbacteriastrainDelftiatsuruhatensisHR4bothasadiazotrophandapotentialbiocontrolagenta-gainstvariousplantpathogens［J］．SystApplMicrobiol，2005，28（1）：66－76．［11］，，，．［J］．，2008，27（1）：230－233．［12］．［D］．：，2013．［13］，，，．［J］．，2003，24（3）：279－284．［14］筭，，，．［J］．，2012，32（7）：1572－1578．［15］．、［D］．：，2010．［16］，，，．［J］．，2009，25（2）：80－83．（）!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!（3107）：［1］，，，．［J］．，2000，20（4）：552－558．［2］MEYERLD．Evaluationoftheuniversalsoillossequation［J］．JournalofSoilandWaterConservation，1984，39：99－104．［3］，，．GIS［J］．，2007，16（1）：102－107．［4］，，，．GISCSLE［J］．，2009，23（5）：61－66．［5］，，．［J］．，2006，21（9）：31－38．［6］，，．［J］．，2008，6（3）：1－7．［7］SL190-1996，［S］．［8］WISCHMEIERWH，SMITHDD．PredictingRainfallErosionLossesfromCroplandinEastoftheRockyMountains［M］．Washington，DC：USDepartmentofAgriculture，1965．［9］，，，．RUSLE：［J］．，2011，31（3）：161－167．［10］，，，．［J］．，2011，31（1）：249—255．［11］．［J］．，2002，20（）：1－9．［12］，，．GISRUSLE———［J］．，2007，25（5）：