海水养殖废水氨氮降解菌的筛选及培养条件研究周鑫

周鑫,王素英＊,池凌钰,王英卓,林翠仪　(,300134)　[目的]探讨海水养殖废水氨氮降解菌的筛选及其最佳培养条件。[方法]通过亚硝化细菌筛选和反硝化细菌筛选方法,从海水养殖废水中分离筛选出亚硝化细菌和反硝化细菌各1株,命名为ZW38和ZL5,并对其最佳培养条件进行了研究。[结果]经鉴定,菌株ZW38属于亚硝化单胞菌属,菌株ZL5属于副球菌属。两菌株在37℃条件均获得最大生物量,但菌株ZW38生长缓慢,最适生长pH值是6.0～8.0;而菌株ZL5的稳定期较长,到38h时达到最大生物量,最适生长pH值是6.0～7.5。当摇床转速为130r/min时,菌株ZW38在装液量为40ml/250ml时生长最好;菌株ZL5在装液量为20ml/250ml～80ml/250ml的生长情况无显著差异。[结论]将ZW38和ZL5联合应用可以有效地将海水养殖废水中的氨态氮降解成为对环境无毒无害的气态氮。　海水养殖;亚硝化细菌;反硝化细菌;分离筛选;培养条件　S182　　　A　　　0517-6611(2009)11-04908-03ResearchontheScreeningofAmmoniaNitrogenDegradationBacteriainMarineCultureWastewaterandItsCultureConditionZHOUXinetal　(CollegeofBiologicalTechniqueandFoodScience,TianjinCommercialUniversity,Tianjin300134)Abstract　[Objective]Theaimwastodiscussonthescreenofammonianitrogendegradationbacteriainmarineculturewastewateranditsop-timumculturecondition.[Method]Throughthescreeningofthenitrosobacteriaandthedenitrobacteria,eachstrainofnitrosobacteriaandde-nitrobacteriawasseparatedandscreenedresp.formthemarineculturewastewater,namedasZW38andZL5,andtheiroptimumculturecon-ditionswerestudied.[Result]TheidentificationshowedthatthestrainZW38belongedtoNitrosomonasandZL5belongedtoParacoccus.2strainsallobtainedthemostbiomassat37℃,butthestrainZW38grewslowlyanditsoptimumgrowthpHvaluewas6.0-8.0;thestrainZL5hadlongerstationaryphase,whichreachedthemostbiomassat38handitsoptimumgrowthpHvaluewas6.0-7.5.Whentherotationspeedwas130r/min,thestrainZW38growthwasbestwhentheliquidvolumeinflaskwas40ml/250mlandthestrainZL5growthwasnotremarkablydifferentwhenliquidvolumeinflaskwas20ml/250ml-80ml/250ml.[Conclusion]ThecombinedapplicationofstrainsZW38andZL5couldeffectivelydegradetheammoniacalnitrogeninmarineculturewastewaterintothegaseousnitrogenwiththepoisonlessandharm-lessintheenvironment.Keywords　Marineculture;Nitrosobacteria;Denitrobacteria;Isolationandscreening;Culturecondition　天津市高等学校科技发展基金计划重点项目(2004ZD20)。　周鑫(1983-),男,天津人,硕士研究生,研究方向:环境微生物。＊通讯作者,E-mail:[e-mail]。　2009-01-21　　,[1],,[2]。[3],,,。,,[4]。,。,,、、。,,、[5]。、,,,,、。,N2[6],,。,,,,。1　1.1　　。1.2　　、、[7],(SM)、(BTB)、(DM)[8]。1.3　1.3.1　。[7],、、。1.3.1.1　。2ml50ml250ml,30℃、130r/min,,(NH4)2SO4,,。1ml,。4,。1.3.1.2　。1ml30℃,7d。,,1d,4℃,。1.3.1.3　。2d,4000r/min15min2～3,0.1gpH7.2,30℃、130r/min24h,　金琼琼　　卢瑶,JournalofAnhuiAgri.Sci.2009,37(11):4908-4910,4994(GB/T5009.33-1996),。1.3.1.4　。5,。1.3.2　。Takaya[8],、、。1.3.2.1　。2ml50ml(SM)250ml,30℃、120r/min3d,2mlSM,,3。1.3.2.2　。BTB,30℃1～3d。BTB,DM3,。1.3.2.3　。10mlDM,DM,,,,。1.3.3　。[9]。1.3.4　。(OD=1)ZW38ZL51%,37℃、130r/min,12h、4h,4℃、4000r/min,,100ml,540nm722S。1.3.5　pH。pH,10ml,1%。30℃,130r/min。80h,24h,,540nm。1.3.6　。250ml,50ml,1%,,80h,24h。1.3.7　。250ml,10、20、30、40、50、60、70、80、90ml。1%,30℃、130r/min。80h,24h,,540nm。2　2.1　　,ZW2、ZW10、ZW14、ZW17、ZW19、ZW20、ZW38ZW438。1,ZW20、ZW38。ZW20ZW385,。5,ZW382.20mg/(L·d),。ZW201.74mg/(L·d)。ZW38。1　Table1　TheformationrateofnitritefrompreliminaryscreeningstrainsofnitritebacteriaPreliminaryscreeningstrains∥mg/(L·d)ProductionrateofnitritePreliminaryscreeningstrains∥mg/(L·d)ProductionrateofnitriteZW21.36ZW191.77ZW101.57ZW202.15ZW141.19ZW382.16ZW172.08ZW431.922.2　　、BTB9,ZL1、ZL2、ZL3、…、ZL9。2、3,ZL5。ZL5。2　Table2　TheproductionofnitritefromthepreliminaryscreeningstrainsStrains1d2d3d4d5dZL1--+++++ZL2----+ZL3+++++ZL4----+ZL5++++++++++ZL6++++++++ZL7++++++++ZL8++++++++ZL9+++++++　:“-”;“+”。　Note:“-”meanscolorlessand“+”meanscolorful.3　Table3　TheaerogenesisofthepreliminaryscreeningstrainsStrains1d2d3d4d5dZL1-----ZL2-----ZL3-----ZL4-----ZL5--++++ZL6----+ZL7----+ZL8---++ZL9----+　:“-”;“+”。　Note:“-”meansnoaerogenesisand“+”meansaerogenesis.2.3　　ZW38,、。。()。,。《》,ZW38(Nitrosomonas)。ZL5(),。490937卷11期　　　　　　　　　　　　　　　　周鑫等　海水养殖废水氨氮降解菌的筛选及培养条件研究。,。,ZL5(Paracoccus)。2.4　ZL5ZW38　1、2,ZL520h;ZW38,50h。ZW38ZL5,9632h。,。1　ZW38Fig.1　ThegrowthcurveofZW382　ZL5Fig.2　ThegrowthcurveofZL52.5　pHZL5ZW38　pH。3,pH3,pH,。pH6～8,。pH,pH。,ZW38pH6.5～8.0,ZL5pH6.0～7.5。3　pHZW38ZL5Fig.3　InfluencesofpHvalueonthegrowthofZW38andZL52.6　ZL5ZW38　,。10～60℃ZW38ZL5,4。4,10℃,,,37℃OD,。,。,ZL5ZW3837℃。4　ZW38ZL5Fig.4　InfluencesoftemperatureonthegrowthofZW38andZL52.7　ZL5ZW38　,。5,ZW38130r/min,40ml/250ml,;ZL5,40ml/250ml,,20ml/250ml～80ml/250ml,。5　ZW38ZL5Fig.5　InfluencesofmediumvolumeonthegrowthofZW38andZL53　(1)ZW38ZL52。,ZW38(Nitrosomonas),ZL5(Para-coccus)。37℃,ZW38,pH6.0～8.0;ZL5,38h,,ZL5NO-3NO-2,NO-2ZW38,ZL5(下转第4994页)4910　　　　　　　　　　安徽农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　20091　TTable1　NumberofspleenTlymphocytesinmiceimmunizedwithre-combinantDNAvaccineGroupCD4+CD3+CD8+CD3+pIRES-ORF2-ORF526.96±1.9517.64±1.10Inactivatedvaccine22.28±1.4814.73±1.05pIRES12.25±1.377.76±1.933　PRRSVORF5GP5,GP5;ORF2。,ORF5ORF2,pIRES-neoPRRSV-PCV2pIRES-ORF2-ORF5。IFAWesternblot,BHKPRRSVGP5PCV-2Cap。,,,ELISAT。ELISA,PRRSVPCV-2,,。,,,;,;,。,。T,pIRES-ORF2-ORF5CD8+CD3+pIRES,Th1。(ADE)PRRSV[7],PRRS,。ORF5pVAX1、pVIR-IL-18CMV,,IL-18。PRRSV-PCV2,。,PRRSV-PCV2。。[1]KEFFABERNKK.Reproductivefailureofunknownetiology[J].AmAssoSwinePractNewsletter,1989,1(2):1-9.[2]郭宝清,陈章水,刘文兴,等.从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究[J].中国畜禽传染病,1996,87(2):1-4.[3]PIRZADEHB,GAGNONCA,DEAS.GenomicandantigenicvatiationsofporcinereproductiveandrespiratorysyndromemajorenvelopeGP5glyco-protein[J].