色谱定量基础

HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation色谱定量基础HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation数据处理参数峰处理参数：SLOPE，WIDTH，DRIFT，T.DBL峰积分标记：E，S，T，V，L定性参数：时间窗％，时间带定量参数：METHOD，ID表显示参数：ATTENHPLCBusinessDeptShimadzuCorporation判断峰起点滤除低平噪声（如蛇行等）SLOPE的确定：通过SLOPETEST进行，测定时间为10倍WIDTH的时间。默认值：填充柱：200毛细管柱：500峰处理参数SLOPE：10倍Width的所有信号的总和，用于：HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation峰处理参数去除高频噪声数据采集速度，WIDTH/10采一次数据控制S.TEST时间，斜率测试时间为10×WIDTH注：填充柱，峰宽：5S毛细柱，峰宽：2～3SWIDTH：半高峰宽，用于：HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation峰处理参数DRIFT：判断相邻峰的积分方式注：1）设定值为0时，积分仪将自动判断2）如DRIFT与基线至峰谷连线较接近时，积分将不稳定，导致面积值变化较大，需加以注意。HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation峰处理参数设定值为0时，积分仪自动判断；不使用时可设为1000。T.DBL：峰展宽一倍所需要的时间举例：T.DBL＝10min，则Rt＝10min时，峰宽变为2×WIDTH，斜率变为SLOPE/2Rt＝20min时，峰宽变为4×WIDTH，斜率变为SLOPE/4HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation积分峰标记（MK）E：超量程峰S：拖尾峰（一般指溶剂峰）T：尾上峰，作过拖尾处理的峰V：与前邻峰垂直分割L：前沿峰标记：HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation定性参数保留时间允许误差：时间窗％，相对法设定简单，但所测组分保留时间跨度大时，不易设定时间带，绝对法设定较繁，需逐一设定HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation定量参数校正级别单级校正多级校正HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation单级校正对每一组分仅做一级校正（可以是多次分析同一浓度的标样，取其平均值）组分响应值大小随浓度变化而呈线性变化时才可使用单级校正单级校正曲线必须通过原点单级校正HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation单级校正制备一个混合标样或各组分单独标样，浓度应尽可能接近实际样品中各组分的浓度分析标样建立校正表（ID表）分析待测样品并使用校正表进行校正计算，得到待测样品中各组分的浓度需要时进行再校正单级校正过程HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation多级校正对每一组分至少作两个不同浓度水平的校正当组分响应值随浓度变化而呈非线性变化时须使用多级校正校正曲线可以不通过原点多级校正HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation多级校正制备一系列不同浓度的混合标样，其浓度范围应包含实际样品中各组分的浓度依次分析各级工作标样建立多级校正校正表（ID表）分析待测样品并使用校正表进行校正计算，得到样品中各组分的浓度需要时进行再校正多级校正过程：HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation定量参数面积归一化法校正面积归一化法外标法内标法校正方法HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation面积归一化法公式：%100%AiAiCi优点：1）无需做校正，简便，快速2）进样量不严格要求缺点：1）所有组分都流出且被检测到2）所有组分的检测灵敏度都相同HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation校正面积归一化法公式：式中：Fi为校正因子，Fi＝浓度（含量）/面积%100)(%AiFiAiFiCi优点：进样量不严格要求缺点：1）所有组分都流出且被检测到2）所有组分都需作校正HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation外标法公式：iFiFAiCi21优点：1）不需所有峰都流出或被检测到2）只对所测组分作校正3）可以校正检测器的非线性响应（多级校正）缺点：1）进样量必须准确2）仪器必须有良好的稳定性HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation内标法公式：ISISCiFiFAAiCi)(21优点：1）进样量不严格要求2）只对所测组分作校正3）可以校正检测器的非线性响应（多级校正）缺点：1）必须在样品中加一内标组分2）操作较为繁琐HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation内标法样品中无该组分色谱性质稳定化学性质与所测组分相似不会与样品发生反应内标物浓度应适当，峰面积比值在0.7～1.3范围内选择内标物的标准：HPLCBusinessDeptShimadzuCorporationNoCalculation：只画图，不计算Normalization：面积归一化法CorrectedNormalization：校正面积归一化法InternalStandard：内标法，内标峰ID设为1号ExternalStandard：外标法CorrectedNormalizationwithFactor：带修正系数的归一化法ExponentialCalculation：指数计算法Multi-internalStandard：多内标法定量方法