14.水处理微生物过程王志平wangzply@sjtu.edu.cnMicrobialprocessinwastewatertreatment09:472一、环境污染的生物效应生物监测生物效应检测有机物重金属营养盐气态污染生物污染污染项目生态系统迁移转化生物转化生物浓缩生物积累生物放大种群结构变化个体行为变化组织器官变化分子水平变化生物群体生产活动交通运输生活消费环境风险评价09:473微生物净化的本质微生物需要从外界获得能量以维持自身生命活动及增殖,在此过程中通过自身生理代谢活动实现受污染环境中有机污染物、氮磷等营养盐及某些重金属离子的迁移转化,实现污染物的无害化、稳定化化;微生物是自然环境生态系统的最终分解者,然而,由于微生物代谢是通过酶催化完成的,而酶催化有专一性,因此根据污染物的特征需要有不同的微生物参与其分解净化。09:474微生物催化降解的必要条件存在含有某种降解酶的微生物;污染物必须是具有适宜酶的微生物可获得的(胞内酶对应小分子,胞外酶对应大分子);适宜的环境及营养条件。09:475微生物代谢活性—微生物种类、生长期目标污染物特征—空间结构、分子量大小、元素组成、毒性环境因素—营养、温度、pH、氧化还原电位影响微生物催化降解的因素09:476生物净化的进展通过现代分子生物学技术加深对微生物的认识;以基因工程手段改变或强化微生物有效功能的表达,获得高效工程菌株;构建微生物功能菌群;营造适合作用的代谢环境;工程技术方法的发展促进相关微生物工艺。09:477二、有机污染物的降解有机污染物的生物净化一般被称为生物降解;微生物分解有机物的能力是巨大的;依据微生物对有机物的降解能力大小可分为易生物降解的、难生物降解的和不可生物降解的;生物降解过程是以微生物的代谢为核心,污染物在分解过程中则遵循物理化学原理,其危害和暴露过程对环境的影响是环境毒理学关心的内容。09:4781.生物降解的一般概念矿化(mineralization)矿化是将有机物完全无机化并获取能源和小分子营养质的过程,是与微生物生长相关的过程。共代谢(co-metabolism)共代谢是需要有另一种基质的代谢提供能源和营养质,由非专一性酶促反应完成的复杂污染物降解过程,一般仅使有机物分子得到修饰或转化,但不能使其完全分解。09:479内源呼吸微生物在利用外部基质进行生理代谢获取能量及营养质同时,细胞物质同时也在进行自身的氧化分解,即内源代谢或内源呼吸。外源有机物充足时,消耗的细胞组分会被持续更新,微生物自身的氧化分解并不明显;而在外源基质不足时,微生物的内源呼吸作用则成为向微生物提供能量、维持其生命活动的主要方式。09:47102.好氧生物降解有机物的好氧分解过程中,有机物的降解、微生物的增殖及溶解氧的消耗这三个过程是同步进行的,也是控制好氧生物处理成功与否的关键过程;不同的生物处理工艺中,有机物的分解速率、微生物的生存方式、增殖规律,溶解氧的提供方式与分布规律均有差异,而关于好氧生物处理过程的研究及改良也是针对这三个关键过程开展的。09:4711好氧有机物分解过程09:4712TCA生物氧化的一般过程糖三酯酰甘油蛋白质葡萄糖脂酸+甘油氨基酸乙酰CoA2H呼吸链H2OADP+PiATPCO209:4713在温度适宜、溶解氧充足的条件下,微生物的增殖速率主要与微生物(M)与基质(F)的相对数量,即F/M相关;在静态培养条件下,随着时间的延长,基质浓度逐渐降低,微生物的增殖经历适应期、对数增殖期、衰减期及内源呼吸期。09:47143.厌氧生物降解厌氧生物处理是在无氧条件下,利用多种专性厌氧微生物(水解、发酵及产氢产甲烷细菌)的代谢活动,将有机物转化为无机物(沼气和水)和少量细胞物质的过程。发酵过程产生的H2很少,主要由丙酮酸脱水形成,与专性厌氧氧化产氢的机理不同。09:4715厌氧有机物分解过程09:4716(1)水解阶段复杂有机物首先在发酵性细菌产生的胞外酶作用下分解为溶解性小分子有机物;如纤维素被纤维素酶水解为纤维二糖与葡萄糖,蛋白质被蛋白酶水解为短肽及氨基酸等;水解过程通常比较缓慢,是复杂有机物厌氧降解的限速阶段。09:4717(2)发酵(酸化)阶段溶解性小分子有机物进入发酵菌(酸化菌)细胞内,在胞内酶作用下分解为挥发性脂肪酸(VFA),如乙酸、丙酸、丁酸以及乳酸、醇类、二氧化碳、氨、硫化氢等,同时合成细胞物质。在此过程中,溶解性有机物被转化为以挥发性脂肪酸为主的末端产物,因此这一过程也称为酸化,酸化过程是由许多种类的发酵细菌完成的。其中重要的类群有梭状芽孢杆菌(Clostridium)和拟杆菌(Bacteriodes)。09:4718(3)产乙酸阶段产酸阶段绝大多数是严格厌氧菌,但通常有约1%的兼性厌氧菌生存于厌氧环境中,这些兼性厌氧菌能够起到保护严格厌氧菌,如产甲烷菌免受氧的损害与抑制的作用。发酵酸化阶段的产物丙酸、丁酸、乙醇等,在此阶段经产氢产乙酸菌作用转化为乙酸、氢气和二氧化碳。09:4719(4)产甲烷阶段在此阶段,产甲烷菌在二氧化碳存在时,利用氢气生成甲烷;也可以直接利用乙酸生成甲烷,二者的比例一般为3/7。利用乙酸产甲烷的菌有索氏甲烷丝菌(Methanothrixsoehngenii)和巴氏甲烷八叠球菌(Methanosarcinabarkeri)产甲烷菌都是严格厌氧菌,要求生活环境的氧化还原电位在-150~-400mV范围内。09:47204.缺氧(anoxic)处理在没有分子氧存在的条件下,一些特殊的微生物类群可以利用含有化合态氧的物质,如硫酸盐、亚硝酸盐和硝酸盐等作为电子受体,进行代谢活动。09:4721(1)硫酸盐还原在特定条件下,硫酸盐或亚硫酸盐会被硫酸盐还原菌(sulfatereductionbacteria,SRB)在其氧化有机污染物的过程中作为电子受体而加以利用,并将它们还原为硫化氢。SRB的生长需要与产酸菌和产甲烷菌同样的底物,因此硫酸盐还原过程的出现会使甲烷的产量减少。09:4722根据利用底物的不同,SRB分为:氧化氢的硫酸盐还原菌(HSRB);氧化乙酸的硫酸盐还原菌(ASRB);氧化较高级脂肪酸的硫酸盐还原菌(FASRB)。SRB分类硫酸盐还原需要有足够的有机质,其质量比应超过1.67;与甲烷相比,硫化氢的溶解度要高很多,容易造成处理出水COD偏高。09:4723(2)反硝化反硝化脱氮反应由脱氮微生物进行。通常脱氮微生物优先选择氧而不是亚硝酸盐作为电子受体。但如果分子氧被耗尽,则脱氮微生物开始利用硝酸盐,即脱氮作用在缺氧条件下进行。有关问题将在后面讨论。09:4724在实际生物处理过程中,好氧、兼性、厌氧分解分别担任着各自的角色;在人工处理构筑物中,由于具备良好的工程措施,可以选择微生物的种类并控制相应的分解过程;在活性污泥曝气池中具有选择优势的是好氧及兼性细菌,发生的主要分解反应是好氧分解,但在局部微环境下仍可能有厌氧/缺氧反应发生。5.工程实际中的应用09:4725由于微生物个体微小,每个微生物所处的环境也是微小的;从空间角度看,影响微生物生存状态的环境是微小的;微环境直接影响微生物的活动状态;由于微生物种群结构、物质分布和化学反应的不均匀性,菌胶团内部及生物膜内部存在多种多样的微环境;各种微环境下生存着适生种类的微生物,可以发生相应的生物化学反应。微环境的意义09:4726在微生物絮体、颗粒或生物膜内会形成不同的微生态环境,造成适合不同生物反应过程的宏观环境(好氧区、缺氧区);生物群体并不在好氧及缺氧区之间循环,而在固定位置处形成不同的微环境;精细地控制溶解氧浓度即可保证微环境缺氧环境,使得好氧区产生的N03-得以还原。微环境典型-同步硝化反硝化09:4727难降解有机物的降解历程相对要复杂得多;一般而言,难降解有机物结构稳定或对微生物活动有抑制作用,适生的微生物种类很少;不同类型难降解有机物的降解历程也不尽相同;许多难降解有机物的降解与质粒有关,降解质粒编码生物降解过程中的一些关键酶类;质粒是菌体内的环状DNA分子,是染色体之外的遗传物质,可以通过克隆质粒表达功能基因。6.难降解有机物09:4728优先控制污染物黑名单挥发性卤代烃苯系物氯代苯酚类多氯联苯硝基苯苯胺类多环芳烃类酞酸酯类农药丙烯腈亚硝胺氰化物重金属09:4729aerobicanaerobicabioticFEMSMicrobiolRev34(2010)445–475(1)氯代烃的降解途径09:4730VC,DECassimilatingbacteria;aerobic;anaerobicdegradingmicrobes氯烃降解的典型细菌Alkenemonooxygenase/EaCoMT09:4731氯烃降解的典型放线菌FEMSMicrobiolRev34(2010)445–47509:4732VC、cDEC好氧降解途径FEMSMicrobiolRev34(2010)445–47509:4733(2)PCB好氧降解途径StuartEStrand09:4734PCB好氧降解途径StuartEStrand09:4735(3)酚类的典型降解途径09:4736粪产碱杆菌(Alcaligenesfaecalis)醋酸不动杆菌(Acinetobactercalcoaceticus)假单胞菌(Pseudomonassp.)隐球菌(Cryptococcussp.)醋酸不动杆菌(Acinetobactercalcoaceticus)假丝酵母菌(Candidasp.)皮状丝孢酵母菌(Trichosporoncutaneum)酚类降解的典型微生物09:4737(4)常见含氮芳香族化合物FEMSMicrobiolRev32(2008)474–50009:4738含氮芳香族化合物降解途径FEMSMicrobiolRev32(2008)474–50009:4739含氮芳香族化合物的典型降解微生物FEMSMicrobiolRev32(2008)474–50009:4740(5)多环芳烃的典型降解途径FEMSMicrobiolRev32(2008)927–955萘09:4741多环芳烃的典型降解途径NADHoxidoreductase,aferredoxinandanoxygenasecomponentFEMSMicrobiolRev32(2008)927–955菲09:4742多环芳烃的典型降解途径FEMSMicrobiolRev32(2008)927–955芴09:4743多环芳烃的典型降解途径FEMSMicrobiolRev32(2008)927–955芘09:4744粪产碱杆菌(Alcaligenesfaecalis)假单胞菌(Pseudomonassp.)青枯菌(Ralstoniasp.)丛毛单胞菌(Comamonassp.)鞘氨醇单孢菌(Sphingomonassp.)红球菌属(Rhodococcussp.)节杆菌属(Arthrobactersp.)结核分支杆菌(Mycobacteriumsp.)PAHs降解的典型微生物FEMSMicrobiolRev32(2008)927–95509:4745苯系物的苯甲酰辅酶A降解途径FEMSMicrobiologyReviews22(1999)439^45809:4746苯系物的苯甲酰辅酶A降解途径FEMSMicrobiologyReviews22(1999)439^45809:4747针对目标污染物的特性,以目标物为主要营养基质从受污染环境或具有相似污染特性的环境中富集筛选所需的微生物菌属。7.功能性微生物的筛选分离09:4748选择简便有效的诱变剂挑选优良的出发菌株处理单细胞悬液(均匀态)选用最适剂量充分利用协同效应设计或采用高效筛选方案或方法功能微生物的筛选原则09:4749确定目标选择分离源筛选的设定:培养条