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土壤中有效磷的测定-NY/T1121.7-2014A碳酸氢钠提取——钼锑抗比色法适用于石灰性、中性土壤PH≥6.5方法提要由于浸提液(0.5MNaHCO3)提高了CO32-离子的活性，使其与Ca2+形成CaCO3沉淀，从而降低了Ca2+的活性,使一定量活性较大的Ca-P被浸出，同时也可使比较活性的Fe—P和AI-P通过水解作用而浸出(由于碳酸盐的碱溶液，也降低了铝和铁离子的活性，有利于磷酸铝和磷酸铁的提取。此外，NaHCO3碱溶液中存在着OH-、HCO3-、CO32-等阴离子均能置换吸附态的磷酸盐H2PO4-。)，从而增加了碳酸氢钠提取中性和石灰性土壤速效磷的能力。由于浸出液中Ca、Fe、Al浓度较低，不会产生磷的再沉淀；浸出液中的磷可用钼锑抗比色法定量测定。主要仪器设备1千分之一电子天平；2恒温水浴振荡器；3150ml塑料瓶和50ml塑料小烧杯；4锥形瓶(或比色管)：50mL或25mL比色管；5紫外分光光度计；试剂1氢氧化钠：10%(m/V)溶液；(调节浸提剂pH至8.5)2碳酸氢钠浸提剂［c(NaHCO3)=0.50mol·L-1，pH=8.5］称取42.0gNaHCO3溶于950mL水中，用10%氢氧化钠溶液调节pH至8.5(用酸度计测定)，用水稀释至1L。贮存于塑料瓶中备用。如贮存期超过20d，使用时须重新校正pH。3酒石酸锑钾［K(SbO)C4H4O6·1/2H2O］：0.30%(m/V)溶液；(提供三价锑离子,作用是生成的三元杂多酸比磷钼酸铵具有更强的吸光作用;同时,加快抗坏血酸的还原反应.)4抗坏血酸(C6H8O6左旋，比旋光度+21-22°,分析纯)(还原剂,抗坏血酸主要优点是生成的颜色稳定，干扰离子的影响较小，适用范围较广，但显色慢，需要加温。如果溶液中有一定的三价锑存在时，则大大加快了抗坏血酸的还原反应，在室温下也能显色。5钼锑贮备液：称取10.0g钼酸铵［(NH4)6Mo7O24·4H2O］溶于300mL约60℃水中，冷却。另取181mL浓硫酸，缓缓注入800mL水中，搅匀，冷却。然后将稀硫酸注入钼酸铵溶液中，搅匀，冷却。再加入100mL0.3%酒石酸涕钾溶液，最后用水稀释至2L，盛于棕色瓶中备用。(提供一定酸度和三价锑离子)6显色剂：称取0.5g抗坏血酸溶于100mL钼锑贮备液中。此溶液有效期不长，建议现用现配。7磷标准贮备溶液［c(P)=100μg·mL-1］：称取105℃烘干2h的磷酸二氢钾(优级纯)0.4390g，用水溶解后，加入5mL浓硫酸(防长霉菌,可使溶液长期保存)，转入1L容量瓶中，用水定容。此贮备溶液在冰箱中可长期保存。8磷标准工作溶液［c(P)=5μg·mL-1］：吸取5.00mL磷标准贮备液于100mL容量瓶中，加水定容。此工作溶液不宜久存。分析步骤1.有效磷的浸提:称取过2mm筛的风干土2.50g→置于150ml塑料瓶中→加入50.0ml浸提剂→恒温(251℃)振荡(18020转/分)301min→取出→干过滤于50ml塑料烧杯(弃去最初滤液)；2.显色：吸取滤液10.00mL→于干燥的50mL锥形瓶或25mL比色管中→加入5.00mL显色剂→轻摇以除去CO2→加水定容至刻度(若为50mL锥形瓶应加水10.00mL)→再摇匀[最后显色液酸的浓度为0.45mol/L,(1/2H2SO4)]→显色30min(室温高于20℃)以上3.标准曲线：分别准确吸取5μg·mL-1P标准溶液0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于25mL比色管(或容量瓶)中→加入10.0mL浸提剂→加入5.0mL显色剂→轻摇以除去CO2→加水定容至刻度→再摇匀→显色30min以后→于880nm波长处比色.4、比色用1cm光径比色皿在波长880nm处，以标准系列溶液的零浓度调节仪器零点进行比色，测量吸光度。从校准曲线上查出含磷量。数据处理有效磷(P)，mg·kg-1=C·V·D/m式中：C─从校准曲线上求得待测样品溶液中磷的含量，μg·mL-1；m─风干试样质量，g；V─显色液体积，25mL；D─分取倍数，即试样提取液体积/显色时分取的体积，（本试验为50/10）；平行测定结果以算术平均值表示，保留小数点后一位。精密度平行测定结果的允许误差测定值(P，mg·kg-1)允许差（P，mg·kg-1）10绝对差值≤0.510～20绝对差值≤1.020相对相差5%由光源室，单色器、试样室、光电管暗盒，电子系数及数字显示器等组成其原理:利用分光器(将光源发出的复合光分解为单色光)出射的单色光，通过一定厚度的比色皿，透射光由光电管接受，经电子线路放大器，由表头指示或具微机处理装置的仪器打印机得到吸光值或透光率，推算出被测成分的浓度。注意事项1）如果土壤有效磷含量较高，应吸取少量的滤液，并加浸提剂补足至10.0mL后显色，计算时按所吸取滤液的分取倍数计算。2）用NaHCO3溶液浸提有效磷时，温度影响较大。应严格控制浸提温度。3）土样经风干和贮存后，测定的有效磷含量可能稍有改变，但一般无大影响。4）由于锑磷钼杂多酸在常温（20℃—25℃）下易被抗坏血酸还原为磷钼蓝。所以显色温度以20℃为宜。5）操作所用的玻璃器皿，可用1+5的盐酸浸泡2h，或用不含磷酸盐的洗涤剂刷洗6)如果用容量瓶或比色管显色，摇匀时应小心，不要溅出溶液。7)振荡后立即摇匀过滤，否则放置时间过长,磷被再固定8）比色前，为消除误差，需测得比色皿的校正值，具体方法是：将比色皿洗净后加蒸馏水，放入比色槽推入光路，读取吸光值，再以吸光度最小的比色皿作参比（即调节吸光度为零），测其他的比色皿的吸光值。编上号，做好记录，作为比色皿校正值，在测定样品显色液时，哪个样品用的是哪只比色皿要记录好，在计算时，要扣除校正值后再查工作曲线。每一次往比色皿中倒入显色液时，要用显色液洗二三遍。一般先测颜色浅的，倒显色液于皿中容积2/3处，外面用擦镜纸吸干并擦拭干净，比色结束后将比色皿洗净再浸入盛有纯水的烧杯中。长期不用时，洗净、淋干放回比色盒，用前再用稀酸溶液和纯水浸洗干净。比色皿用后可用温热的（40-50℃）的2%的碳酸钠浸泡后洗净，以除去吸附的磷钼蓝显色物，必要时可用稀硝酸或铬酸洗液浸泡片刻后洗净。9）干扰离子的消除：主要有砷、硅、Fe3+硅的干扰可控制酸度抑制之。磷钼杂多酸在较高酸度下形成（0.4-0.8mol·L-1,H+）,而硅钼酸则在较低酸度下生成（0.1-0.4mol·L-1,H+）。土壤中的砷含量很低，而且砷钼酸还原速度较慢，灵敏度比磷低，不致影响磷的测定结果。而Fe3+影响溶液的氧化还原势，抑制蓝色的生成。而抗坏血酸能与Fe3+络合，保持溶液的氧化还原势。10)颜色在8小时内可保持稳定B盐酸-氟化铵——钼锑抗比色法适用于酸性土壤中有效磷的测定PH6.5方法提要用酸性氟化铵提取，形成氟铝化铵和氟铁化铵络合物，少量的钙离子则生成氟化钙沉淀，磷酸根离子则被释放提取到溶液中。反应式为：3NH4F+3HF+AlPO4→H3PO4+（NH4）3AlF63NH4F+3HF+FePO4→H3PO4+（NH4）3FeF6显色原理同碳酸氢钠浸提方法试剂1.氟化铵-盐酸浸提剂［c(NH4F)=0.03mol·L-1-c(HCl)=0.025mol·L-1］称取1.11g氟化铵溶于400mL水中，加入2.1mL盐酸，用水稀释至1L。贮存于塑料瓶中备用。2.酒石酸锑钾［K(SbO)C4H4O6·1/2H2O］：0.50%(m/V)溶液；3.钼锑贮备液：称取10.0g钼酸铵［(NH4)6Mo7O24·4H2O］溶于300mL约60℃水中，冷却。另取126mL浓硫酸，缓缓注入400mL水中，搅匀，冷却。然后将稀硫酸注入钼酸铵溶液中，搅匀，冷却。再加入100mL0.5%酒石酸涕钾溶液，最后用水稀释至1L，盛于棕色瓶中备用。4.5%硫酸溶液:吸5mL浓硫酸缓慢加入90mL水中,冷却后稀释至100mL.5.1:3氨水溶液.6.显色剂：称取1.5g抗坏血酸溶于100mL钼锑贮备液中。此溶液有效期不长，建议现用现配。7.磷标准贮备液和标准工作溶液：同Olsen法8.二硝基酚指示剂：称0.2g2,4或2,6二硝基酚溶于100mL水中.9.硼酸溶液:3%。称取30g硼酸溶于900mL热水中,冷却后稀释至1L。(主要为了和氟离子形成络合物,避免氟对磷的测定干扰)和腐蚀玻璃仪器.络合反应为:4F-+H3BO3+3H+(BF4)-+3H2O分析步骤1.有效磷的提取：称取过2mm筛的风干土5.00g→置于150ml塑料瓶中→加入50.0ml浸提剂→恒温(251℃)振荡(18020转/分)301min→干过滤于50ml塑料烧杯(弃去最初滤液)；同时做空白。2.显色：吸取滤液5.00～10.00mL→于50mL容量瓶中→加入10.0mL硼酸溶液→摇匀→加水至30ml左右→加2滴二硝基酚指示剂→稀酸和稀碱调节溶液刚显微黄色→加5.00mL显色剂→加水定容至刻度→再摇匀[最后显色液酸的浓度为0.45mol/L,(1/2H2SO4)]→显色约30min(室温高于20℃)3.标曲的绘制:分别准确吸取5μg·mL-1P标准溶液0、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL于50mL容量瓶中→加入10.0mL浸提剂→加入10.0mL硼酸溶液→摇匀→加水至30ml左右→加2滴二硝基酚指示剂→稀酸和稀碱调节溶液刚显微黄色→加5.00mL显色剂→加水定容至刻度→再摇匀→显色约30min→于700nm波长处比色.4.比色用1cm光径比色皿在波长700nm处，以标准系列溶液的零浓度调节仪器零点进行比色，测量吸光度。同时做空白试验。以扣除空白后的吸光值从校准曲线上查出磷含量数据处理、精密度、及注意事项同Olsen法