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生物实验报告姓名：班级：日期：同组者：实验序号：实验题目：坐骨神经-腓肠肌标本的制备实验目的：1.学习蛙类动物双毁髓的实验方法。2．学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。实验原理：两栖类动物的离体组织所需要的生活条件比较简单，易于控制和掌握。因此在生理实验中常用蟾蜍的坐骨神经——腓肠肌标本来观察兴奋性、兴奋过程、刺激强度、刺激频率与肌肉收缩反应的一些规律以及骨骼肌的收缩特性等。实验对象：蟾蜍实验器材：常规手术器械（粗剪刀、手术剪、眼科剪、手术镊、眼科镊）蛙板、蛙钉、探针、锌铜弓、玻璃分针、培养皿、任氏液、滴管、手术线等。实验方法及步骤：1、破坏脑脊髓部位枕骨大孔。如果蟾蜍四肢松软，呼吸消失，表示脑脊髓已完全破坏，否则按上述方法再进行捣毁。2、剪去躯干上部及内脏在骶髂关节前1cm处用金冠剪（粗剪）剪断脊柱（可在下肢前端）。沿脊柱切口向下剪开两侧腹部皮肤至耻骨处，将头、前肢、内脏及腹部软组织全部剪掉，放于污物盘，只保留下端脊柱和下肢。在腹侧脊柱两旁可看到腰骶神经丛。注意切勿触及或损伤坐骨神经。3、剥后肢皮肤左手持镊子夹住脊髓断端，右手捏住断端边缘，剥掉全部后肢皮肤。将标本放于盛有任氏液的培养皿内，将手和手术器械洗净。4、分离两腿用金冠剪剪去尾骨杆（骶骨），沿脊椎中线将脊柱剪开，再沿耻骨联合正中央剪开两侧大腿，使两腿完全分离（切勿伤及神经），将两腿浸于任氏液中。5、游离坐骨神经取一后肢，腹面向上（背位），固定于蛙板上，沿脊柱侧用玻璃分针轻轻勾起坐骨神经，逐一剪去神经分支至股端。用金冠剪剪断脊柱，只保留一小段椎骨片与坐骨神经相连。将标本改为背面向上（腹位）固定，用镊子提起梨状肌，剪断，用玻璃分针将坐骨神经小心勾至背部。再沿坐骨神经沟（半膜肌和股二头肌的肌间缝）分离坐骨神经。用镊子夹住与神经相连的脊椎骨，提起神经，用眼科剪将神经分支及结缔组织膜顺序剪断，将神经一直游离到腘窝处。6、游离腓肠肌用镊子夹住脊椎骨，将神经搭在腓肠肌上，用剪刀将膝关节周围的大腿肌肉完全剪除，用金冠剪将膝关节上方的股骨刮干净，暴露骨股并在距膝关节上1cm处剪断，分离腓肠肌的跟腱，用线结扎，然后自跟腱的附着点剪断，提起跟腱，将腓肠肌分离至膝关节处，将小腿其余部分剪掉。这样就制备了一个附着在股骨上的腓肠肌并带有支配腓肠肌的坐骨神经的完整标本。7、标本检验左手用镊子轻轻提起结扎神经的线，右手用经任氏液沾湿的锌铜弓短暂轻触坐骨神经，如腓肠肌发生迅速的收缩反应，则表明机能完好。将标本置于任氏液中，稳定其兴奋性15－20min，即可进行实验。注意事项：在制备标本时，避免过度牵拉神经，不可用手或金属器械触碰神经干。避免动物皮肤分泌物（蟾酥、血液等）污染神经和肌肉，也不要用水冲洗，以免影响组织机能。制备标本时，要随时用任氏液润湿神经和肌肉，防止干燥。分离神经时，一定要把周围结缔组织剥离干净。实验要迅速，以免时间过长影响标本活性（兴奋性）。实验结果：用经任氏液沾湿的锌铜弓短暂轻触坐骨神经，腓肠肌发生迅速的收缩反应；用经任氏液沾湿的锌铜弓短暂轻触腓肠肌，也发生迅速的收缩反应。思考题：1．剥去皮肤的后肢，能用自来水冲洗吗？为什么？答：不能。任氏液是等渗溶液，而且ph和一些基本离子也模拟了体内的环境。用清水浸泡或冲洗的话细胞吸水过度会涨破。2．金属器械碰压、触及或损伤神经及腓肠肌，可能引起哪些不良后果？金属器械碰压神经与腓肠肌,会引起肌肉收缩,如果碰的较重,损伤部位及近端的神经就死亡了,以后刺激只能从损伤处向肌肉处之间的部分.另外容易使标本疲劳,失去活性。3．如何保持标本的机能正常？金属器械不要碰及、损伤神经或腓肠肌，保持湿润，常加任氏液，最好先泡一会。4．锌铜弓刺激检测标本活性的原理是什么？Zn的金属电势比铜低，形成一定的电势差（就相当于有电压），锌铜弓是把一根锌棒和一根铜棒一端焊在一起，另一段分开，则接触样本（例如神经干）时，会引起样本局部去极化，引发动作电位。创新与探索：你认为该标本的制作方法有哪些需要改进的地方？请说出你的想法。答：我认为本实验所需要的任氏液应在实验前配置好。当蟾蜍的下肢被分离出来后，应该尽快制作成标本。由于任氏液的配置溶剂的称量较复杂，如果在分离下肢后再配置会使标本活性降低，影响实验结果。