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EZDNAMethylation-GoldKitEZDNA甲基化试剂盒-GoldCatalogNo.D5005Highlights在3小时内完全转化富含GC的DNA.两次加热变性的反应步骤简化了由未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶的过程.没有DNA沉淀.并且通过柱层析一步完成DNA的纯化和脱硫.洗脱的超纯DNA对于一系列的分子生物分析是非常理想的。描述EZDNAMethylation-GoldKitTM是我们EZDNAMethylationKit产品的改进版.EZDNAMethylation-GoldKit将DNA变性过程和亚硫酸氢盐转变过程转化为一步.此步骤采用温度变性来取代以前方案中使用氢氧化钠的化学变性过程.经过DNA亚硫酸氢盐转变,试剂盒可大量回收到DNA.两种试剂盒都是基于在胞嘧啶与亚硫酸氢钠之间发生的使胞嘧啶转变为尿嘧啶的三步反应.EZDNAMethylation-Gold与EZDNAMethylationKits都采用创新的柱内脱磺酸技术来减少不必要的DNA沉淀步骤以便每次都可以提供给研究人员较好的结果.试剂盒的设计可以减少模版降解和纯化过程中的DNA损失,并且完全转化未甲基化的胞嘧啶.回收的DNA对于PCR扩增、限制性内切酶消化、测序、微阵列等下游分析是很理想的.下图是EZDNAMethylation-GoldKit所呈现出的结果.在经过亚硫酸氢盐处理后的DNA测序结果。使用EZDNAMethylation-GoldKit处理的甲基化的CmpG(在#5核苷酸位点)DNA。回收的DNA通过PCR来扩增并且直接测序。在#5位置上甲基化的胞嘧啶仍然保持完整，当未被甲基化的胞嘧啶(i.e.,positions#7,9,11,14and15)通过亚硫酸氢盐处理完后全部转化为尿嘧啶。试剂制备CTConversionReagent的制备试剂盒中所提供的CTConversionReagent是固体混合物并且一定要在首次使用前制备好.通过添加900μl水,50μl的M-DissolvingBuffer,和300μl的M-DilutionBuffer到一管的CTConversionReagent中.在室温下溶解并且震荡10分钟或在摇床上摇动10分钟.如果看到没有溶解的试剂是很正常的,因为在溶液中的CTConversionReagent已经达到饱和状态.在使用之前将CTConversionReagent溶液在室温(20°C-30°C)下避光保存.每管的CTConversionReagent是针对10次DNA处理设计的.为了得到较好的结果,CTConversionReagent应当在制备后立即使用.如果不立刻使用的话,CTConversionReagent溶液可以在-20°C存储1星期.而且在使用之前存储的CTConversionReagent溶液一定要在室温下解冻并且通过震动或颠倒2分钟来混合.CTConversionReagent对光很敏感,所以要尽量减少在光下的暴露.M-WASHBUFFER的制备添加24ml(对于200次的D5006应为96ml)100%的乙醇到M-WASHBUFFER中来制备最终可以使用的M-WASHBUFFERProtocol每次制备的DNA范围在500pg到2μg之间.最佳量为200-500ng.在PCR管中添加130μl的CTConversionReagent到每20μlDNA样品中.如果DNA样品的体积小于20μl,则用水来弥补差量.通过轻弹试管或移液器操作来混合样品.ForExample:4μlDNA样品,加入16μl水,130μlCTConversionReagentNote:对于DNA体积20μl,就要调整CTConversionReagent的制备过程.对于每增加10μlDNA样品体积来说，水的量就要随之减少100μl.例如,40μlDNA样品,就要添加700μl来制备CTConversionReagent.DNA样品的最大体积为每次转化反应50μl.不要调整M-DissolvingBuffer或M-DilutionBuffer的体积.将样品管放到循环变温器并按以下步骤操作:1.98°C放置10分钟2.64°C放置2.5小时3.立刻进行下述操作或者在4°C下存储(最多20小时).添加600μl的M-BindingBuffer到Zymo-SpinICColumn中，并将柱放如试剂盒所提供的CollectionTube中.装填样品(从步骤2)到Zymo-SpinIC?Column含有M-BindingBuffer.盖上盖将柱颠倒数次来混合样品.全速(10,000xg)离心30秒.去除流出液.添加200μl的M-WashBuffer到柱中.全速离心30秒.添加200μl的M-DesulphonationBuffer到柱中并且在室温(20°C-30°C)下放置15-20分钟.在培养后,全速离心30秒.添加200μl的M-WashBuffer到柱中.全速离心30秒.再添加200μl的M-WashBuffer并且离心30秒.直接添加10μl的M-ElutionBuffer到柱基质中.将柱放置在1.5ml的管中.全速离心来洗脱DNA.DNA可立刻进行分析或储存在低于-20°C下以备以后使用.我们建议您对于每次PCR使用2-4μl洗脱的DNA.订购信息产品描述编号试剂规格EZDNAD500550rxns.Methylation-GoldKitD5006200rxns.