妥布霉素滴眼液含量测定

I摘要目的：研究妥布霉素滴眼液的含量测定方法，比较各种方法的优点。方法：(一)建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器检测法(HPLC-ELSD)测定妥布霉素滴眼液的含量。（二）采用双波长紫外分光光度法测定妥布霉素的含量。（三）以邻苯二甲醛(PHT)为显色剂的比色法测定妥布霉素滴眼剂的含量。（四）比较三种方法。结果：HPLC-ELSD方法专属性强，准确可靠，适用于妥布霉素滴眼液产品质量控制。双波长紫外分光光度法准确简便，重现性好，可用于制剂的质量控制。比色法具有快速、简便、准确、重现性好等优点，适合于产品中间体的质量控制和医院制剂的快速分析。关键词妥布霉素含量测定HPLC-ELSD含量测定比色法IIABSTRACTObjective:Researchthecontentdeterminationoftobramycineyedropsandcomparethemethods.Methods:(1)ToestablishanHPLC-ELSDmethodforthecontentdeterminationoftobramycineyedrops.(2)Toestablishthedoublewavelengthultravioletspectrophotometrymethodforthecontentdeterminationoftobramycineyedrops.(3)ToestablishthecolorimetricmethodusePHTasthechromogenicreagentforthecontentdeterminationoftobramycineyedrops.(4)Comparevariousmethods.Results:TheHPLC-ELSDissimpleaccurateandreliable.Itissuitablefortheroutinequalitycontroloftobramycineyedropspreparations.Thedoublewavelengthultravioletspectrophotometrymethodissimple,accurate,reliable,reproducible,andcouldbeusedfortheroutinequalitycontrolofthepreparation.Thecolorimetricmethodisrapid,simple,accurate,reproducible,rapidanalysisandqualitycontrolofthepreparationandthehospitalaresuitableforintermediateKeywordstobramycincontentdeterminationHPLC–ELSDcontentdeterminationcolorimetricmethodI目录第1章文献综述……………………………………………………………………11.1妥布霉素的发现以及应用……………………………………………………11.2妥布霉素含量测定方法以及优缺点…………………………………………21.3本课题研究的内容及意义……………………………………………………2第2章高效液相色谱-蒸发光散射检测器检测法………………………………32.1仪器与试药……………………………………………………………………32.1.1原料与仪器………………………………………………………………32.1.2色谱条件…………………………………………………………………32.2实验方法………………………………………………………………………42.2.1强力破坏试验……………………………………………………………42.2.2系统适应性试验…………………………………………………………42.2.3线性关系试验……………………………………………………………52.2.4灵敏度试验………………………………………………………………62.2.5稳定性试验………………………………………………………………62.2.6回收率试验………………………………………………………………62.2.7重复性试验………………………………………………………………62.2.8样品测定…………………………………………………………………62.3结果与对比……………………………………………………………………8第3章双波长紫外分光光度法……………………………………………………93.1仪器与试药……………………………………………………………………93.1.1原料与仪器………………………………………………………………93.1.2处方………………………………………………………………………93.2试验方法………………………………………………………………………93.2.1测定波长的选择…………………………………………………………93.2.2线性关系及标准曲线的绘制……………………………………………93.2.3回收率试验……………………………………………………………103.2.4含量测定………………………………………………………………103.3试验结果……………………………………………………………………10第4章比色法……………………………………………………………………114.1仪器与试药…………………………………………………………………114.2实验方法与结果……………………………………………………………11II4.2.1邻苯二甲醛(PHT)试液的配制[18]……………………………………114.2.2妥布霉素衍生物吸收光谱…………………………………………114.2.3妥布霉素衍生物稳定性……………………………………………114.2.4重现性………………………………………………………………114.2.5标准曲线的绘制……………………………………………………124.2.6样品含量测定………………………………………………………124.2.7回收率试验…………………………………………………………124.2.8比色法与微生物法的比较…………………………………………134.3试验结果………………………………………………………………14第5章结论……………………………………………………………………155.1准确性……………………………………………………………………155.2通用性……………………………………………………………………15参考文献…………………………………………………………………………16致谢……………………………………………………………………………181第1章文献综述妥布霉素属氨基糖苷类抗生素。抗菌谱与庆大霉素近似，对大肠埃希菌、产气杆菌、克雷白杆菌、奇异变形杆菌、某些吲哚阳性变形杆菌、铜绿假单胞菌、某些奈瑟菌、某些无色素沙雷杆菌和志贺菌等革兰阴性菌有抗菌作用；本品对铜绿假单胞菌的抗菌作用较庆大霉素强3～5倍，对庆大霉素中度敏感的铜绿假单胞菌对本品高度敏感。革兰阳性菌中，金黄色葡萄球菌（包括产内酰胺酶株）对本品敏感；链球菌（包括化脓性链球菌、肺炎球菌、粪链球菌等）均对本品耐药。厌氧菌（拟杆菌属）、结核杆菌、立克次体、病毒和真菌亦对本品耐药。本品的作用机制是与细菌核糖体30S亚单位结合，抑制细菌蛋白质的合成。1.1妥布霉素的发现以及应用妥布霉素（tobramycin）是1967年由链霉菌得到的抗生素，亦可从kanamycinB脱氧制备，临床制剂为其硫酸盐。妥布霉素适用于绿脓杆菌、变形杆菌(吲哚阳性和阴性)、大肠杆菌、克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属及葡萄球菌（包括耐青霉素G与耐甲氧西林菌株）所致的新生儿脓毒症、败血症、中枢神经系统感染（包括脑膜炎）、泌尿生殖系统感染、肺部感染、胆道感染、腹腔感染（及腹膜炎）、骨骼感染、皮肤、软组织感染（包括烧伤）、急性与慢性中耳炎、鼻窦炎等。该品用于绿脓杆菌脑膜炎或脑室炎时可同时鞘内注射给药；用于支气管及肺部感染时可同时气溶吸入该品作为辅助治疗。妥布霉素对多数D组链球菌感染无效。用于结膜炎、角膜炎等眼部细菌感染，特别是对庆大霉素耐药的革兰阴性秆菌感染，如严重的绿脓杆菌感染有效。妥布霉素由肌注后吸收迅速而完全。局部冲洗或局部应用后亦可经身体表面吸收一定量。吸收后主要分布于细胞外液；其中5～15%再分布到组织中，在肾皮质细胞中积蓄，该品可穿过胎盘。分布容积为0、26L/kg。尿液中药物浓度高，肌注1mg/kg后尿中浓度可达75～100μg/ml。滑膜液内可达有效浓度，在支气管分泌液、脑脊液、胆汁、粪便、乳汁、房水中浓度低。肌注1mg/kg后血药浓度可达4μg/ml；静滴上述剂量1小时，其血药浓度与肌注相似。T1/2为1、9～2、2小时，蛋白结合率很低。该品在体内不代谢，经肾小球滤过排出。24小时内排出2给药量的85～93%。该品可经血液透析或腹膜透析清除。1.2妥布霉素含量测定方法以及优缺点妥布霉素tobramycin是从黑暗链霉菌Streptomycestenebrarius发酵液中提取得到的具有广谱抗菌活性的氨基糖苷类抗生素，其含量测定方法主要有微生物效价测定法[1-3]、旋光法[3]、UV衍生化法[3]、高效液相色谱-间接光度检测法HPLC-IPD[4]、HPLC衍生化法[5-7]、HPLC电化学检测器法[8]及TLC[3]，但常用的微生物效价测定法测定误差较大，衍生化法影响因素较多，而电化学检测法使用不易，较难普及。近年来国内外有文献报道采用蒸发光散射检测技术ELSD分析氨基糖苷类抗生素[9-13]，中国药典2005年版也已收载该检测技术和部分相关品种；以HPLC-ELSD测定妥布霉素及其制剂的方法也陆续见诸报道。1.3本课题研究的内容及意义含量测定是指原料药可用已知纯度的对照品或符合要求的原料药进行测定，或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。制剂可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，必要时，与另一个已建立准确度的方法比较结果。一般制剂的含量测定的回收率是向辅料中加入处方量80％、100%、120%已知含量的主药，按含量测定的方法测定。溶出度测定方法的回收率按处方量50％、80％、100％加入主药进行测定。妥布霉素对听神经和肾脏有一定毒性，可引起肾损害，对肾脏的毒性较庆大霉素为少见，仅约1%的病人有肾功能武失常的征候，如管型尿、少尿、蛋白尿或血清肌酐浓度升高等。肾功能不全者可引起胃肠道反应：恶心，呕吐，食欲不振，腹胀，腹泻、可有肝损害，转氨酶升高、血小板减低、白细胞减低、粒细胞减低、皮疹、静脉炎等。血象改变、剂量大时可有神经毒性、二重感染、中毒性精神病均可发生。因此药品内含量检测直接关系到给药剂量，必须严格要求药品含量以确保给药剂量在可接受范围之内。3第2章高效液相色谱-蒸发光散射检测器检测法2.1仪器与试药2.1.1原料与仪器Agilent1100高效液相色谱仪，DikmaSEDEX75型ELSD检测器美国安捷伦科技有限公司；水为重蒸水；三氟乙酸、甲醇均为色谱纯；妥布霉素标准品批号：0340-200002，标示含量880umg-1由中国药品生物制品检定所提供；妥布霉素原料药1批批号：020501；硫酸妥布霉素原料药1批批号：021003；妥布霉素B组分杂质对照品无批号均由浙江海正药业股份有限公司提供；妥布霉素滴眼液样品5批。分别为：宁波唯森制药有限公司批号：20050301、20050302、20050303；杭州易舒特药业有限公司批号：20041201；眼力健杭州制药有限公司批号：2H0249；上市或长期留样至今样品，规格均为5mL∶15mg。2.1.2色谱条件色谱柱：AgilentZorbaxSB-C184.6mm×250mm，5um；柱温：35℃；流动相：0.2mol·L-1三氟乙酸溶液-甲醇92∶8；流速：0.8mL·min-1；ELSD漂移管温度：4