实验二、水中挥发酚类的测定——4-氨基安替比林分光光度法

1实验二、水中挥发酚类的测定——4-氨基安替比林分光光度法GB/T7490-87，水质挥发酚的测定蒸馏后4-氨基安替比林分光光度法1987-8-1实施1、挥发酚来源和危害（1）含义：根据酚类能否与水蒸气一起蒸出，分为挥发酚和不挥发酚。挥发酚通常是指沸点在230℃以下的分类，通常属于一元酚。（2）来源：酚类主要来自炼油、煤气洗涤、炼焦、造纸、合成氨、木材防腐和化工等废水。（3）危害：分类物质属于高毒物质，人体摄入一定量时，可出现急性中毒症状；长期饮用被分类污染的水，可引起头昏、出疹、瘙痒、贫血及各种神经系统症状。水中含低浓度（0.1～0.2mg/L）酚类时，可使得鱼肉有异味，高浓度（＞mg/L）时则造成中毒死亡。含酚浓度高的废水不宜用于农田灌溉，否则，会使农作物枯死或减产。水中含微量酚类，在加氯消毒时，可产生特异的氯酚臭。2、挥发酚测定方法的选择各国普遍采用4—氨基安替比林分光光度法。含量较高时（＞0.5mg/L），采用直接法；含量较低时（＜0.5mg/L），采用氯仿萃取法。3、水样的采集用玻璃仪器采集水样。水样采集后应及时检查有无氧化剂存在。必要时加入过量的硫酸亚铁，立即加磷酸酸化至pH=4.0（甲基橙指示），并加入适量（2ml）硫酸铜（1g/L），以抑制微生物对酚类的生物氧化作用，同时应冷藏（5～10℃），在采集24小时内进行测定。4、预蒸馏[做（1）（2），再蒸馏]水中挥发酚经蒸馏以后，可以消除颜色、浑浊度等干扰。但当水样中含氧化剂、油、硫化物等干扰物质时，应在蒸馏前先做适当的预处理。（1）氧化剂：当水样经酸化后滴于碘化钾-淀粉试纸上出现蓝色时，说明存在氧化剂。可加入过量的硫酸亚铁去除。（2）硫化物：水样中含少量硫化物时，用磷酸将水样pH调至4.0（用甲基橙指示），加入适量硫酸铜（1g/L），使之生成硫化铜去除。当含量较高时，将磷酸酸化的水样置于通风柜内进行搅拌曝气，使之生成2硫化氢逸出。（3）油类：将水样移入分液漏斗中，静置分离出浮油后，加粒状氢氧化钠调节至pH=12.0～12.5，用四氯化碳萃取（每升样品，用40ml四氯化碳萃取2次），弃去四氯化碳层，萃取后的水样移入烧杯中，在通风柜中于水浴上加温，以除去残留的四氯化碳，用磷酸调节至pH4.0。当石油类浓度较高时，用正己烷处理要比四氯化碳处理好。（4）甲醛、亚硫酸盐等有机或无机还原性物质：可分取适量水样于分液漏斗中，加硫酸使水样呈酸性，分次加入50ml、30ml、30ml乙醚或二氯甲烷萃取酚类，合并二氯甲烷或乙醚层于另一分液漏斗中，分次加入4ml、3ml、3ml的10%的氢氧化钠溶液进行反萃取，使酚类转入氢氧化钠溶液中，合并碱萃取液，移入烧杯中，置于水浴上加热，以除去残余的萃取溶剂，然后用水将碱萃取液稀释至原分取水样的体积。同时以水做空白试验。注意：乙醚为低沸点、易燃和具麻醉作用的有机溶剂，使用时要小心，周围应无明火，并在通风柜内操作。室温较高时，水样和乙醚应先置于冰水浴中降温后，再进行萃取操作，每次萃取应尽快完成。5、4—氨基安替比林直接光度法方法原理酚类化合物于pH10.00±0.2介质中，在铁氰化钾存在下，与4—氨基安替比林反应，生成橙红色的吲哚酚安替比林染料，其水溶液在510nm波长处有最大吸收。研究指出：酚类化合物中，羟基对位的取代基可阻止反应进行；但卤素、羧基、磺酸基、羟基和甲氧基除外，这些基团多半是能被取代下的；邻位硝基阻止反应生成，而间位硝基是不完全地阻止反应：氨基安替比林与酚的偶合在对位较邻位多见，当对位被烷基、芳基、酯、硝基、苯酰基、亚硝基或醛基取代，而邻位未被取代时，不呈现颜色反应。用光程为20mm的比色皿测定，酚的最低检出浓度为0.1mg/L。6、试剂（1）苯酚标消贮备液：称取1.00g无色苯酚(C6H5OH)溶于水，移入l000ml容量瓶中，稀释至标线，置于4℃冰箱内保存，至少稳定一个月。（2）贮备液的标定（标定原理：溴酸钾-溴化钾，酸性，生成溴单质，和苯酚发生定量反应，过量的溴酸钾氧化碘化钾析出碘，用硫代硫酸钠滴定。硫代硫酸钠用碘酸钾-碘化钾标定）（3）苯酚中间液：将苯酚贮备液用水稀释至10μg/ml的酚标淮个间液。使用时当天配制。3（4）缓冲溶液（pH为10）：称取20g氯化铵溶于100ml氨水中，加塞，置于冰箱中保存。（5）2%的4-氨基安替比林溶液：称取2g的4-氨基安替比林溶于水，稀释至100ml，置于冰箱中保存，可使用一周。注：固体试剂易潮解、氧化，宜保存于干燥器中。（6）8%的铁氰化钾溶液：称取8g铁氰化钾溶于水，稀释至100ml，置于冰箱中保存，可使用一周。（7）硫酸铜（1g/L）（8）磷酸（9）5%硫酸亚铁：称取5g硫酸亚铁固体，溶入100ml水中。7、分析步骤（1）校准曲线的绘制于8支50ml比色管中，分别加入0.00、0.50、1.00、3.00、5.00、7.00、10.00、12.50ml、浓度为10μg/ml的苯酚标淮中间液，加水至50m1标线。加0.5m1缓冲溶液，混匀，此时pH值为10.00±0.2，加4—氨基安替比林溶液1.0m1混匀。再加1.0m1铁氰化钾溶液，充分混匀，放置10min后，立即于510nm波长，以光程为20mm比色皿，以水为参比．测定吸光度。以水代替水样，经蒸馏后，按水样测定相同步骤进行测定，以其结果作为水样测定的空白校正值。（2）水样的测定分取适量的馏出该放入50m1比色管中，稀释至50ml标线。用与绘制校准曲线相同步骤测定吸光度，最后减去空白试验所得吸光度。（3）数据处理吸光度经空白校正后，求出吸光度对苯酚含量(μg)的回归方程，将水样测定吸光度减去空白值后，代入回归方程，得出水样中挥发酚含量，并根据水样体积，计算出水样中挥发酚含量（苯酚，mg/L）；最后，绘制吸光度对苯酚含量(μg)的校准曲线，并在图中标出测量点及其水样测定结果。8、4—氨基安替比休萃取光度法原理酚类化合物在pH=10.00±0.2介质中，在铁氰化钾的存在下，与4—氨基安替比林反应所生成的橙红色安替比林染料可被二氯甲烷所萃取，并在460nm波长处只有最大吸收。本方法适用于饮用水、地表水农、地下水和工业废水中挥发酚的测定。其最低检出浓度为0.002mg/L；测定上限为0.12mg/L。