NanoQuant模块使用说明NanoQuant是Tecan开发的应用于Infinite200酶标仪的微量(2ul)核酸样品测量工具模块。NanoQuant模块包括NanoQuant板一块、辅助加样器一个、说明书一套。NanoQuant模块的使用条件InfiniteM200和F200酶标仪均可配置NanoQuant模块,配置于M200时NanoQuant支持核酸定量检测和核酸荧光染料标记效率检测,配置于F200时仅支持核酸定量检测,不支持荧光染料标记效率检测。在F200上使用NanoQuant模块,配置滤光片架一个,依次安装如下滤光片:位置1:260nm(带宽5nm)位置2:280nm(带宽3nm)位置3:340nm(带宽10nm)位置4:空NanoQuant模块需要的计算机硬件和软件配置:计算机硬件最低配置:CPU:P31.5GHz硬盘:40G内存:512MB显示器分辨率:1024×768光驱:CD-ROM必需软件:WindowsXPProfessionalSP2以上或WindowsVistaTecanI-control1.5Excel2003或更高版本NanoQuant模块的使用方法NanoQuant的使用只需按照说明书和软件提示进行,测量结果将自动处理并输出到Excel中。简单的使用操作描述如下:1.打开Infinite200酶标仪电源,运行I-control1.6,联机。2.点击I-control软件界面左下角的Applications标签,进入NanoQuant检测界面。3.选择NanoQuant检测界面左侧导航栏中的“QuantifyNucleicAcid”标签,进入核酸定量检测界面。右侧窗口中“Plate”自动选择为NanoQuantPlate,无需更改;“Blanking”窗口中,用鼠标选择至少两个检测点,作为空白样品,空白值将取平均值,如果不同点的空白CV值大于10%,空白值无效,请清洁Nanoquant板后重新做空白;也可以选择“StartBlanking”按钮上面的“IndividualBlanking”:,这时每孔的空白值将只用于各自孔的样品。点击“SampleID”按钮可以输入样品的序号或名称;“AbsorbanceMeasurements”中的“Wavelengths”即检测波长是事先设好的,不可更改;在“Sample”的“Type”下拉菜单中选择要检测的核酸类型。4.随后点击“Blanking”窗口右下角的“StartBlanking”按钮,仪器将弹出酶标板托架,将已加好空白样品的NanoQuant板放入托架,正确的放置位置是NanoQuant板上的Tecan商标处于右下角,点击弹出窗口上的“确定”按钮,即开始空白样品的测量。5.空白测量完毕后,测量窗口变色,NanoQuant板弹出,此时去除空白样品,加入待测样品,将NanoQuant板放于酶标板托架上。用鼠标选择样品所在的点,点击菜单栏上的“Start”图标开始样品测量。如果需要重新定义空白,点击“Blanking”窗口右下角的“RepeatBlanking”按钮即可返回先前的定义空白样品界面。6.测量结束,结果将自动导入Excel,随后I-control弹出窗口询问是否继续测定,如继续测定点击“确定”即可,但此时不可以改变样品的位置;如需要改变样品位置,点击“取消”,然后按照上述步骤5的方式进行操作。空白样品定义一次即可,在不关闭I-control时可一直使用。样品类型和染料类型的自定义在I-control中可自定义样品类型和染料类型。自定义样品类型只需点击“AbsorbanceMeasurements”窗口中的“Sample”“Type”下拉条右侧的“EditSamples…”字样,在弹出窗口中填写样品的名称、摩尔消光系数和比率波长(与260nm光吸收做比率的光吸收波长)。此项功能如有疑问,请查阅NanoQuant的说明书和样品及染料的说明书。有关样品定量计算的方法和公式,以及其它问题,请查阅NanoQuant说明书。NanoQuant板的维护NanoQuant板是高精度的光学设备,需要注意避免接触油脂、灰尘或腐蚀性物质,外壳如有沾污请用软布擦拭干净。使用时要注意放置平稳,避免摔打撞击。测量结束后,请立即用去离子水冲洗透镜内表面(平面),要避免样品干结在透镜表面。如果有可能,将透镜浸入去离子水中浸泡片刻,再甩去水滴,用擦镜纸或脱脂棉签擦干。如果空白值升高,可以采用下述方法进行清洗:1.将超声波清洗槽注入蒸馏水,将一个大烧杯注入蒸馏水,放在清洗槽里;2.把NanoQuant板的盖子浸入水中,保证所有透镜都在水下,打开超声波清洗槽打开清洗NanoQuant板;3.按照2的方法清洗NanoQuant板的底;4.用无油的高压空气吹干NanoQuant板,或者用无纤维残留的实验室用吸水纸吸去残留的水;5.石英透镜被触摸或有赃物时重复上述清洗程序,最好在每天测量前都做这样的清洗;注意不要在透镜上加入任何乳油物质,比如变性乙醇,这些物质会严重削弱透镜的光学性能;如以上方法不起作用,用棉签蘸取蒸馏水或者70-100%的非变性乙醇,集中清洁透镜的上下表面。随后用上述超声波清洗方法洗去残留的乙醇和纤维。!请特别注意:国产无水乙醇可能含有吸附到透镜上的杂质,请使用SIGMA出品的无水乙醇。附图:数据输出样式(DEMO数据,非实测)说明:结果中每个样品有四个数据:Abs中是260nm和280nm的光吸收扣除参比(310nm或340nm光吸收)和空白值后的结果,因为NanoQuant的光路长度为0.5mm,故测值要比用普通分光光度计和用酶标板测得的要小很多。Value中列出的是核酸浓度(ng/ul)和核酸质量(260nm/280nm)。