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附件9：促进消化功能评价方法（征求意见稿）保健食品评价试验项目、试验原则及结果判定Items,PrinciplesandResultAssessment1试验项目1.1动物实验1.1.1体重、体重增重、摄食量和食物利用率1.1.2小肠运动实验1.1.3消化酶测定1.2人体试食试验1.2.1临床症状观察1.2.2胃/肠运动实验2试验原则2.1动物实验和人体试食试验所列指标均为必做项目。2.2在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。3结果判定3.1动物实验：动物体重、体重增重、摄食量、食物利用率，小肠运动实验和消化酶测定三方面中任二方面实验结果阳性，可判定该受试样品有助于促进消化功能动物实验结果阳性。3.2人体试食试验：临床症状积分结果和胃/肠运动实验结果阳性，可判定该受试样品有助于促进消化功能人体试食试验结果阳性。3.3动物实验和人体试食试验均为阳性结果，可判断受试样品具有有助于促进消化功能的作用。促进消化功能检验方法MethodfortheAssessmentofFacilitatingDigestionFunction1动物实验1.1实验原理胃肠道是营养物质的摄取、消化与吸收的器官，对食物的消化作用主要是依靠其运动、消化酶的分泌来完成的。如果某一保健食品能对这一环节或几环节有调节作用，那它就有可能有促进消化功能的作用。1.2实验项目促进消化功能动物实验包括大鼠体重、体重增重、摄食量和食物利用率实验；小肠运动实验；消化酶的测定等三部分。1.3实验动物根据实验项目可选用单一性别成年小鼠或大鼠。小鼠18g~22g，每组10只~15只，大鼠120g~150g，每组8只~12只。1.4剂量分组及受试样品给予时间实验设三个剂量组和一个阴性对照组，以人体推荐量的10倍（小鼠）或5倍（大鼠）为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组和模型对照组。受试样品给予时间30d（小肠运动实验受试样品给予时间7d~15d），必要时可延长至45d。1.5实验内容1.5.1体重、体重增重、摄食量和食物利用率选用同一性别的大鼠。实验开始时动物体重的差异应不超过平均体重的10％。分不同剂量实验组和阴性对照组，经口给予受试样品，每周测2次体重和食物摄入量。实验结束时计算体重、体重增重、摄食量和食物利用率。1.5.2小肠运动实验选用同一性别的小鼠，分不同剂量实验组、空白对照组和模型对照组，模型对照组用复方地芬诺酯或洛哌丁胺造模。可用墨汁或炭末加阿拉伯树胶作为指示剂。经口给予受试样品。实验结束前禁食不禁水20h，于测定当天各实验组和空白及模型对照组再给予一次受试样品或蒸馏水，30min后各实验组和模型对照组给予复方地芬诺酯5mg/kgbw~6mg/kgbw或洛哌丁胺5mg/kgbw~6mg/kgbw(依据复方地芬诺酯或洛哌丁胺的实用剂量取用，用研钵研碎呈粉末后按实验所需浓度配制，注意要待溶质完全溶解、充分摇匀后使用。)，空白对照组给予蒸馏水，30min后各组再给予指示剂(精确称取阿拉伯树胶100g，加水800ml，煮沸至溶液透明，称取活性碳粉100g加至上述溶液中煮沸三次，待溶液凉后定容到1000ml，于冰箱中4℃保存，用前摇匀)，25min后断颈处死动物，计算墨汁推进率。按下式计算墨汁推进率：墨汁推进率（%）＝墨汁推进长度（cm）/小肠总长度（cm）×100%。1.5.3消化酶的测定选用同一性别的大鼠。分不同剂量实验组和阴性对照组，实验开始时动物体重的差异应不超过平均体重的10％。经口给予受试样品。实验结束前各组动物禁食不禁水24h，采用乙醚麻醉大鼠幽门结扎法收集一定时间内排出的胃液，测定单位时间内胃液量。取胃液1mL放入50mL的三角烧瓶中，加入0.05mol/L盐酸溶液15mL摇匀，放入新鲜制作的蛋白管两根。塞好瓶口，在37℃恒温箱中孵育24h，取出蛋白管，用尺测量蛋白管两端透明部分的长度（mm），以四端之值求其平均值。计算胃蛋白酶活性和胃蛋白酶排出量。胃蛋白酶活性单位（μ/mL）＝四端蛋白管透明部分长度均值2×16胃蛋白酶排出量（μ/h）＝胃蛋白酶活性×每h胃液量1.6数据处理和结果判定计量资料可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。食物利用率和墨汁推进率资料需进行数据转换，X＝Sin-1p，式中P为食物利用率和墨汁推进率，用小数表示，然后再进行方差分析。1.6.1体重、体重增重、摄食量和食物利用率实验组与阴性对照组比较，体重、体重增重、摄食量三项指标中任一指标增加，经统计处理差异有显著性，且食物利用率与阴性对照组比较不明显降低，可判定该实验结果阳性。1.6.2小肠运动实验在模型成立的前提下，实验组与模型对照组比较，墨汁推进率增加，经统计处理差异有显著性，可判定该实验结果阳性。1.6.3消化酶的测定实验组与阴性对照组比较，胃液量、胃蛋白酶活性，胃蛋白酶排出量三项指标中任一指标增加，经统计处理差异有显著性，可判定该实验结果阳性。结果判定动物体重、体重增重、摄食量、食物利用率，小肠运动实验和消化酶测定三方面中任二方面实验结果阳性，可判定该受试样品有助于促进消化功能动物实验结果阳性。2.人体试食试验2.1受试者纳入标准选择功能性消化不良，伴有长期胃肠不适，主诉食欲不振，早饱、气多，胃肠胀满等18至65岁的自愿受试者。2.2受试者排除标准：2.2.1急性腹泻者。2.2.2严重器质性病变引起的消化不良者。2.2.3体质虚弱无法接受试验者。2.2.4合并有心血管、肝、肾和造血系统等严重全身性疾病患者。2.2.5短期内服用与受试功能有关的物品，影响到对结果的判断者。2.2.6未按要求服用受试样品，无法判断试食结果者。2.3试验设计及分组要求采用自身和组间两种对照设计。按受试者的消化症状轻重随机分为试食组和对照组，尽可能考虑影响结果的主要因素如年龄、性别、病程等，进行均衡性检验，以保证组间的可比性。每组受试者有效例数不少于50例。2.4受试样品的剂量和使用方法试食组按推荐服用方法、服用量服用受试产品，对照组用安慰剂或空白对照，也可用具有同样作用的阳性物。受试样品给予时间30d，必要时可延长至45d。试验期间不改变原来的饮食习惯，正常饮食。2.5观察指标2.5.1安全性指标2.5.1.1一般状况包括精神、睡眠、饮食、大小便、血压等2.5.1.2血、尿便常规检查2.5.1.3肝、肾功能检查2.5.1.4胸透、心电图、腹部B超检查（在试验开始前检查一次）2.5.2功效性指标：2.5.2.1临床症状观察：准确记录受试者试验前后的临床症状，按下表给予量化评分，比较试验前后症状积分的变化。2.5.2.2胃／肠运动试验：所有受试者在试验前、试验结束时均进行胃／肠运动检查，推荐用钡条透视法（在进食的条件下检查）。2.6数据处理和结果判定试验数据为计量资料，可用t检验进行分析。凡自身对照资料可以采用配对t检验，两组均数比较采用成组t检验，后者需进行方差齐性检验，对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态方差齐后，用转换的数据进行t检验；若转换数据仍不能满足正态方差齐要求，改用t’检验或秩和检验；但变异系数太大（如CV50％）的资料应用秩和检验。表临床症状积分2.6.1临床症状结果判定2.6.1.1试食前后试食组自身比较及试食后试食组与空白对照组组间比较，临床症状积分明显减少，经统计处理差异有显著性，可判定该指标阳性。（适用于选用空白对照组）2.6.1.2试食前后试食组自身比较临床症状积分明显减少，经统计处理差异有显著性，且试食后试食组与阳性对照组组间比较，临床症状积分无明显增加，可判定该指标阳性。（适用于选用阳性对照组）2.6.2胃／肠运动试验结果判定试食前后试食组自身比较及试食后试食组与对照组组间比较，胃／肠运动试验指标明显改善，且钡条排出率大于等于30%为有效，经统计处理差异有显著性，可判断该指标阳性。2.6.3人体试食试验结果判定临床症状积分结果和胃/肠运动实验结果阳性，可判定该受试样品有助于促进消化功能人体试食试验结果阳性。症状轻（1分）中（2分）重（3分）食欲食欲较差食欲差食欲很差腹痛持续时间短，不需服药经常发作，引发两胁不适频繁发作，引发两胁疼痛腹胀腹胀有时发作腹胀较频繁，在较长时间内不缓解腹胀频繁嗳气泛酸烧心间有发作，偶有嗳气、泛酸、烧心饮食不适即泛酸、烧心引起两胁不适较频繁发作，泛酸、烧心可有两胁疼痛失眠疲乏偶有发作饮食不适即发作较频繁发作人体试食原始记录格式、动物试验原始记录格式有助于促进消化功能保健食品人体试食观察表产品名称_______________________________编号______________姓名___________性别______年龄______职业_______民族______住址或电话___________________________________________________既往史______________________________________________________家族史______________________________________________________胃镜检查结果：_______________________________________________诱因：情志不畅饮食不节劳累受寒吸烟史：年支/日饮酒史：年两/日发病时间____________________病程_______年工作性质:脑力轻体力重体力症状变化观察项目试食前年月日试食中年月日试食后年月日食欲不振早饱餐后饱胀不适上腹痛反酸烧心嗳气恶心便秘便溏小结注：症状重度3分；中度2分；轻度1分；无症状0分体格检查项目试食前试食后项目试食前试食后发育营养状况脊柱四肢五官及颈部胸部：心，肺腹部检查：压痛（肝脾）心率（次/分）血压（mmHg）精神小便临床检测项目结果项目结果项目结果EKGB超胸透化验检查项目试食前试食后项目试食前试食后HGBg/LCREumol/LRBC*1012/LBUNmmol/LWBC*109/LTCmmol/LALTu/LTGmmol/LASTu/LTPG/LGLUmmol/LALBG/L胃动力检查项目试食前试食后胃肠运动试验钡条试验报告：试食前________________________________________________________试食后________________________________________________________诊断：疗效判断：有效无效并发症：不良反应：观察者：年月日有助于促进消化功能保健食品动物试验原始记录格式1．剂量设计：推荐量/人·日(/kgBW)样品前处理及配制：1.1墨汁配制：准确称取阿拉伯树胶100g，加去离子水800ml,煮沸至溶液透明，称取活性炭50g加入上述溶液混匀，煮沸3次，冷却至室温加去离子水定容至1000ml。于4℃冰箱中存放，用前摇匀。1.20.5mg/ml复方地芬诺酯悬液配制：取复方地芬诺片20片(2.5mg/片)，用乳钵研磨后，加去离子水至100ml，临用前配制。1.30.05mol/L盐酸：取12N浓盐酸1.25ml加去离子水至300ml。2操作步骤:2.1小肠运动实验：动物检疫年月日-年月日，未见异常，可用于试验。于年月日选健康小鼠只，雌性，随机分为5组，每组只。分别按推荐日摄入量(/kgBW)即、、10、倍即、、/kgBW为三个剂量组。以为溶剂，按ml/10gBW经口灌胃。阴性对照组按ml/10gBW经口灌胃给予溶剂。模型对照组按ml/10gBW经口灌胃给予溶剂。各组每天灌胃一次，连续天。于月日，隔夜禁食16h，不限水。于月日