ABI7500校正步骤

ABI7500校正软件版本：SDS2.0.4或1.41.校准前准备A.原校准文件备份到SDSDocuments中把原校准文件拷出来进行备份，以防如果本次校准某个环节没通过，还可以使用原校准文件，以保证机器的运行。B.校正试剂板融化回复到室温C.准备96孔反应盘托2.校准1.ROI（regionofinterest）校准试剂板采用ROI（含各种荧光染料），先后校正五个通道。进入1.4software中点击instrument，在下拉菜单中选择calibrate；A.首先点击blockup让热盖升起B.点击Snapshot照相，如果96孔没有全呈现白色，调节ExposureTime,然后再点击Snapshot进行照相，直到96孔刚好到都呈现白色和极个别孔有一点点红色之间的临界状态，然后点击GenerateCalibration查看校正的结果，当WeelsFound显示数值为96，SaveCalibration显示为可点击状态时这个通道校正成功，然后点击SaveCalibration保存校正结果，此时下面的通道符号后对应显示为OK。依次将5个通道校正完毕。C.如果因灯光强度不足造成校正通过不了，可清洁灯泡或更换卤素灯，然后再做校正。2.背景校准：A.原理：7500使用背景校正文件去除以后实验中的背景荧光，主要检测通道是否有污染存在，试剂盘里为纯水B.判断标准：A-D通道不能超过72000；E通道不能超过900001.4版本软件和2.04版本软件适用这同一标准C.校正步骤C.11.4软件在NewDocument中的Assay的下拉菜单中选择Background，2.04软件在InstumentMaintenanceManager中选择BackgroundC.2放入Background试剂盘，运行程序C.3结果分析：A-D通道不能超过72000；E通道不能超过90000C.4BLOCK清洁处理：对于Background数值超过标准的孔用纯水处理BLOCK，无纺布擦干，再用10%乙醇处理BLOCK，无防布擦干。C.5清洁过后再次进行Background校正，达到标准后点击Extract将数据结果提取到文件中。图1为09年6月17日做的背景校正，各孔线均匀整齐，都在范围之内。图2为10年11月3日做的背景校正，孔A6A通道荧光值超过72000此仪器目前使用09年的校准数据，因孔的不正，有所偏移，各别孔的荧光值无法准确读取，直接影响到CT值。3.光学校正：A．原理：7500软件产生五通道对于7500系统物理影响的数据补偿。B．试剂盘：ROI试剂盘C．校正步骤C.11.4软件在NewDocument中的Assay的下拉菜单中选择Calibration，2.04软件在InstumentMaintenanceManager中选择OpticalCalibrationC.2放入ROI试剂盘，运行程序，60度5minC.3结果：5个通道都有一定的数值范围。C.4点击Extract将数据结果提取到文件中。4.纯荧光校正：A.原理：使用96孔纯荧光反应板运行程序，获得纯荧光数据，以确定仪器中所使用的纯荧光特征。对以下十种荧光进行校正。B.试剂盘：dye试剂盘C.校正步骤C.11.4软件在NewDocument中的Assay的下拉菜单中选择PureSpectra，2.04软件在InstumentMaintenanceManager中选择PureSpectraC.2放入dye试剂盘，依次完成10个染料的校正，每个程序运行，60度5min每个染料校正完应进行提取保存。1．CY32．CY53．FAM4．JOE5．NED6．ROX7．SYBR8．TAMRA9．TEXASRED10．VIC注：1.4软件校正完后要手动提取校正文件，2.04整个校正时连贯了自动分析提取校正结果。