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第四讲浅尝现代生物技术——植物的组织培养知识点一植物组织培养的基础知识(1)理论基础：植物细胞具有。全能性离体的植物细胞、组织、器官_______外植体―――→脱分化愈伤组织试管苗―――→再分化――→移栽植物体(2)植物组织培养的基本过程：(3)植物组织培养影响因素：①选材：不同植物组织或同一植物组织的不同部分，培养的难易程度差别很大，菊花的组织培养，一般选择__________的茎上部的侧枝。未开花植株新萌生②培养基：植物组织培养需要适宜的培养基，常用的是MS培养基，在配制好的培养基中，常常需要添加生长素和细胞分裂素两种植物激素。实验中使用的生长素是，细胞分裂素是。萘乙酸(NAA)苄基腺嘌呤(6－BA)③其他条件：pH、温度和等条件对植物组织培养也很重要。光照知识点二菊花组织培养过程制备MS固体培养基：配制好的培养基用____________灭菌外植体消毒自然生长的茎离体→用70%的_____浸泡10min→再用5%的次氯酸钠浸泡5min→再用另一5%的次氯酸钠浸泡5min→最后用清洗始终在____________旁进行，对接种工具要用_________接种：高压蒸汽法乙醇无菌水酒精灯火焰灼烧灭菌生芽培养①培养基：培养基MS＋BA＋NAA②培养条件：温度为18～25℃；光照≥14.5h/d；pH为5.8～6.0③培养标准：健壮的炼苗①培养基：草炭土或生芽培养①培养基：培养基MS＋NAA②培养条件与发芽培养相同②培养条件：2～3d内湿度控制为；,2～3d后逐渐降低湿度至移栽(定植)发芽丛状苗生根蛭石80%自然湿度考点植物组织培养高度分化的植物细胞全能性表达的条件(1)离体状态。(2)营养物质：有机营养、无机营养。(3)植物激素：生长素、细胞分裂素。(4)无菌、适宜的外界条件。[典例]下面为植物组织培养过程的流程图，以下相关叙述不．正确的是()植物叶片――→a叶组织块――→b愈伤组织――→c有生根发芽能力的胚状结构――→d人工种子――→e种苗A．上述过程中脱分化发生在步骤b，在此过程中植物激素发挥了重要作用B．再分化发生在步骤d，是愈伤组织重新分化形成根或芽等器官的过程C．从叶组织块到种苗形成的过程利用的原理是植物叶片细胞具有全能性D．人工种子可以解决有些作物品种繁殖能力差、结子困难或发芽率低等问题[解析]植物组织培养的原理是植物细胞具有全能性；再分化发生在步骤c，为愈伤组织重新分化形成根或芽等器官的过程；植物激素在启动细胞分裂、脱分化和再分化中发挥重要作用。[答案]B实验操作中易错的几个问题(1)材料的选取：菊花的组织培养实验中，应选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。(2)外植体消毒：所用消毒剂为体积分数为70%的酒精和5%的次氯酸钠溶液，所使用的清洗液是无菌水。(3)培养过程：菊花的组织培养始终需光照。生长素和细胞分裂素在组织培养的作用(1)使用顺序不同，结果不同，具体如下：分化频率提高同时使用细胞既分裂又分化先使用细胞分裂素，后使用生长素有利于细胞分裂，但细胞不分化先使用生长素，后使用细胞分裂素实验结果使用顺序(2)用量比例不同，结果也不同：生长素用量细胞分裂素用量的比值高：利于根的分化、抑制芽的形成低：利于芽的分化、抑制根的形成适中：促进愈伤组织的生长简记为：高根低芽中愈伤。[针对练习]在植物组织培养再分化阶段中，逐渐改变培养基中植物激素X和植物激素Y的浓度比，细胞群的变化情况如下图所示。若培养基中植物激素X的浓度为a、植物激素Y的浓度为a＋0.2，则细胞群分化的结果最可能是试管()解析：由图可知，植物激素X的浓度小于植物激素Y的浓度时，有利于根的分化。答案：C[课堂对点练]题组一植物组织培养的基础知识1．植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性因素。按照不同顺序使用这两类激素，会得到不同的实验结果。若先使用生长素，后使用细胞分裂素，实验结果是()解析：植物组织培养过程中，细胞分裂素和生长素的使用顺序不同，培养的结果不同。先使用生长素，后使用细胞分裂素，有利于细胞分裂，但细胞不分化；先使用细胞分裂素，后使用生长素，细胞既分裂也分化；两者同时使用，细胞分化频率提高。答案：AA．有利于细胞分裂，但细胞不分化B．细胞既分裂也分化C．细胞分化频率提高D．有利于细胞分化，但细胞不分裂题组二植物组织培养实验2．下面是有关“植物的组织培养”的实验。请回答：(1)植物组织培养就是取离体植物组织，在________条件下接种到三角瓶中的琼脂培养基上，给予一定的________条件，使之产生________，或进而生根发芽。(2)若使用自然生长的茎进行组织培养，需先对茎进行消毒，然后在超净台中用________(填编号)清洗，再将茎的切段培养在生芽培养基中。A．蒸馏水B．无菌水C．自来水D．生理盐水(3)植物组织培养时必须在培养基中加入生长素和细胞分裂素，两者的摩尔浓度比决定组织分化的方向。当细胞分裂素/生长素的比例________时，诱导芽的生成。(4)茎的切段插入生芽培养基后，在每天不少于14.5h的________下保持18～25℃的温度培养，待长出健壮的________，后再分株转入含有较多________的生根培养基中继续培养使其生根。(5)生根后，要对幼苗进行锻炼，方法是逐渐降低幼苗生长空间的________，直到与自然环境的相似为止。解析：植物组织培养的过程要防止杂菌的生长，注意无菌操作。在菊花幼茎切段接种后，在日光灯下保持18～25℃的温度培养，每天光照不少于14.5h。生根后，要对幼苗进行锻炼，逐渐降低幼苗生长空间的湿度，直到与自然环境的相似为止。答案：(1)无菌温度和光照愈伤组织(2)B(3)高(4)光照丛状苗生长素(5)湿度