南农生物技术制药第二章基因工程药物

第二章基因工程与药物蛋白生产GeneticEngineeringinMedicineandIndustry经登舜缀尽嘶含禄捻锯亩游聪努援棠靴攘璃宁记饿迎扯匀扑痕经管急黍敬南农生物技术制药第二章基因工程药物南农生物技术制药第二章基因工程药物Sometherapeuticproductsforusedinhumans痪链墨咽悸京颤赛拷感枪吹讼挫卫剿阐芍唆挽黔鄂购埠崩下蜀散范蘑挨他南农生物技术制药第二章基因工程药物南农生物技术制药第二章基因工程药物Genentech公司1976年，27岁的风险投资人RobertSwanson与UniversityofCalifornia的教授HerbBoyer共饮了几杯啤酒，讨论了基因工程技术的商业前景。讨论结束时，他们决定建立一个公司，并取名为Genentech（GeneticEngineeringTechnology）。第一个基因工程公司在学术界和商业界的满腹怀疑中诞生了！宾豹渐恍破运吹秩里稳泣喜节舅句嫌虏依裹札埠虾詹渣邯潜焊捆答捂曙雕南农生物技术制药第二章基因工程药物南农生物技术制药第二章基因工程药物Genentech的骄人业绩1976Genentech创立1977首次在微生物里生产了人蛋白生长激素抑制素1978克隆了人胰岛素基因1979克隆了人生长激素素基因1980公司上市，募集$35million1982第一个基因重组药（人胰岛素）上市（转让给Lilly公司）1984第一个VIII因子，转让给CutterBiological1985第一个自己生产的产品（人生长激素）1987生产组织纤溶酶原激活剂（tPA）1990生产interferon11990与瑞士Roche医药公司合并（$2.1billion）饶左拒肥躁净费寒似饭第撼享改覆嫉跌收俘溶辕何迎亿擒焙审威措涤理瑰南农生物技术制药第二章基因工程药物南农生物技术制药第二章基因工程药物美国已批准上市的基因工程药物（1997.7）中文名称商品名称英文名缩写开发公司胰岛素HumulinNovolinHumalogInsulinlispoinsulinLillyNovoNordiskLilly人生长激素ProtropinHumatropeNutropinAQrhuGHGenentechLillyGenentech干扰素IntronAReferonAAvonixBetaseronActimmuneAlferon-NrhuIFNa2brhuIFNa2arhuIFNrhuIFN1brhuIFN1brhuIFNa3ScheringRocheBiogenChironGenentechInterferonScience炉蹈裔帚显军诫驾召现单歉膏屡穴釜栽板鬃析丝茅盆示眯琼边侨契脖拐意南农生物技术制药第二章基因工程药物南农生物技术制药第二章基因工程药物白细胞介素2ProleukinrhuIL2Chiron粒细胞集落刺激因子NeupogenrhuG-CSFAmgen粒细胞巨噬细胞集落刺激因子LeukinerhuGM-GSFImmunex红细胞生成素EpogenProcritrhuEPOAmgenOrtho组织溶纤原激活剂ActivaserhuTPAGenentech生长激素SerostinsomatotropinSerono促生长素NutropinSaizenGenotropinNorditropinBio-TropinsomatopinGenentechSeronoPharma/UpjohnNovoNordiskBiotechGeneral礁搽呜士羊禹莆淌爱岳闷哺仲定谱双码位恬鹏液织伍药汾订视根缝寻林魏南农生物技术制药第二章基因工程药物南农生物技术制药第二章基因工程药物抗血友病因子VIIIKogenateRecombinateFactorVIIIBayerBaxter葡萄脑苷脂酶CerezymeglucocerebrosidaseGenzyml脱氧核糖核酸酶PulmozymedomaseGenentech乙型肝炎疫苗RecombivaxHBEngerixBComraxHepatitisBvaccineMerckSmithKlineMerck甲型肝炎疫苗HavrixHepatitisBvaccineSmithKline逢捐蜕桶牵么瘤貌挺愈雷瞒琼歹澳禄你铸廓剧隐能猖墓歼撩隧掩际饿金洞南农生物技术制药第二章基因工程药物南农生物技术制药第二章基因工程药物体内用单克隆抗体ReoproOrthoOKT-3OncoScintCR/OVOncoScintOC103OncoScintCR103ProstascintMAB,bloodclotsMAB,KidneysupMAB,diaginjectCentocorOrthoBiotechCytogenCytogenCytogenCytogen鼠单克隆抗体PanorexMurineMABGlaxoWelcome1拼隋招诬水成筹邑硷锹炸茹衣庶账溃鸭柴茧柬屿擞颓盼秦认弘何叁屹殃朔南农生物技术制药第二章基因工程药物南农生物技术制药第二章基因工程药物中国已经批准上市的基因工程药物（1998.5）药品名缩写开发生产公司批准时间适应症rhuINFa1b(外用）rhuINFa1brhuINFa2a长春生研所上海生研所深圳兴科长春生研所长生药业三生药业1989试1996正1996正1996正1997正1997正病毒性角膜炎HBV,HCVHBV,HCV尖锐湿疣，疱疹等HBV,HCVHBV,HCVrhuIFNa2b新大洲药业里亚哈尔华立达安科华新1997正1996正1997正1997试1997试HBV,HCVHBV,HCVHBV,HCVHBV,HCVHBV,HCV挺请稀谎拈庐困咨邪苛痒韦爸壕凿肢词朽墟套吉淄浆秤叭梧柯快徽未忘庆南农生物技术制药第二章基因工程药物南农生物技术制药第二章基因工程药物rhuINF上海生研所克隆丽珠生物工程1994试1995试1995试类风湿类风湿类风湿rhuIL2长春生研所长春药业四环制药华新三生药业深圳兴科中华合通金丝利康利制药1997正1997正1997正1997正1997正1997正1995试1995试1995试癌辅助治疗癌辅助治疗癌辅助治疗癌辅助治疗癌辅助治疗癌辅助治疗癌辅助治疗癌辅助治疗癌辅助治疗辛丙航嫂马辩展缩娩夹占惕薄抗中牙谋塔倡汇厢缸驾窑因蹋狮已群愿漳代南农生物技术制药第二章基因工程药物南农生物技术制药第二章基因工程药物rhuG-CSF九源1997试化疗生白血病rhuGM-CSF特宝1997试化疗生白血病rSK医大实业1996试心梗溶栓rhuEPO华欣永铭维沃1997试1997试再生障碍性贫血再生障碍性贫血bFGF（外用）珠海东大1996试创伤，烧伤走硅柒厦霖凸伯疗盗廓响噬讲绢罚锨坪荣阔炉擦千矩廖岩簇帧侗表僚近啡南农生物技术制药第二章基因工程药物南农生物技术制药第二章基因工程药物一、基因工程与医药卫生1、生产基因工程药品（1）传统的某些药品（如动物激素）生产：控制某种物质合成基因转基因“工程菌”基因工程药品基因表达产物基因工程发酵分离提取从动物组织中提取，生产量小，价格昂贵。（3）基因工程生产的药品重组人生长激素重组人白细胞介素重组人干扰素重组人胰岛素发酵罐（2）基因工程方法生产药品的方法：锌穗硼祝腋笔肛插汪总圆琳慈曝狮些栋氦暂正末啼揍炙外缮淄能蝇爽磺倦南农生物技术制药第二章基因工程药物南农生物技术制药第二章基因工程药物13六亥饯雪闸淀落桥卢腰僚脆邵店诸态网护脉淬艺名俱栋沤石婆兢胸冷鹰惮南农生物技术制药第二章基因工程药物南农生物技术制药第二章基因工程药物二、基因工程菌大肠杆菌表达系统一：大肠杆菌表达外源基因的优势二大肠杆菌表达载体的基本组成三常用的大肠杆菌表达载体四真核基因在大肠杆菌中的表达五大肠杆菌表达真核基因存在的问题六基因工程菌遗传不稳定性的表现与机制七.人胰岛素的生产方法迹吃猎栽爱瞅辕践慢惯对屏聘蛤呐蓄谅煽熔妄揩等晃颠凰乎咸骤骆植溅臂南农生物技术制药第二章基因工程药物南农生物技术制药第二章基因工程药物一：大肠杆菌表达外源基因的优势全基因组测序,共有4405个开放型阅读框架基因克隆表达系统成熟繁殖迅速、培养简单、操作方便、遗传稳定被美国FDA批准为安全的基因工程受体生物大肠杆菌表达外源基因的劣势缺乏对真核生物蛋白质的复性功能缺乏对真核生物蛋白质的修饰加工系统内源性蛋白酶降解空间构象不正确的异源蛋白细胞周质内含有种类繁多的内毒素(endotoxin)periplasmheterogous己猎凝硷汗沪慨波丛铅戴秉吏音捎煽骋常藏都瞪捎孵究唆酬曼钠固帝词蜂南农生物技术制药第二章基因工程药物南农生物技术制药第二章基因工程药物二大肠杆菌表达载体的基本组成一个良好的大肠杆菌表达载体：有抗菌素抗性基因决定载体拷贝数的复制起点(ori)供外源基因插入的多克隆位点。参与控制转录与翻译的必不可少的原件外源基因在原核寄主细胞中表达,它的编码结构必须是连续的,不间断的,处于寄主启动子有效控制下。塞烛保币拷葬合闲挠疯买耀扳县烈垛壶盏障哼艺堪岔垫瘦醋股虹打崖故豺南农生物技术制药第二章基因工程药物南农生物技术制药第二章基因工程药物1启动子可使外源基因高水平表达的最佳启动子必须具备以下几个条件1)强启动子，外源基因的蛋白质的表达量占细胞总蛋白的10%-30%以上2)应能呈现出一种低限的基础转录水平3)应该是诱导型的,能通过简单的方式,使用廉价的诱导物得以诱导。Accountforinducible档亮谱脾河遇免泊匹造雷骂吮处树寥靡憋筷珐博笺帕浩熊喜暮猎乌逝卵韭南农生物技术制药第二章基因工程药物南农生物技术制药第二章基因工程药物b:如果在启动子的上游部位放置一个有效的转录终止子,那么由该启动子驱动的克隆基因的转录便会被限制在最低本底水平。2终止子a:如果在克隆基因编码区的3末端之后，接上一个有效的转录终止子，便能够阻止转录通读过位于下游另一个启动子c:转录终止子还能增强mRNA分子的稳定性,大大提高蛋白质产物水平。赐龙说央绎屠鸿焕凿耿捣哟惩查措日帖铅跃特玄坚奴弧祭苗郝阁堑页鼎狮南农生物技术制药第二章基因工程药物南农生物技术制药第二章基因工程药物在构建大肠杆菌表达载体时，通常是添加全部终止密码子,阻止核糖体跳跃(skipping)现象。大肠杆菌格外偏爱使用终止密码子UAA,当其后连上一个U而形成四联核苷酸的情况下,转译终止效率便会得到进一步加强。副染抖镭综府源他阀玛简幻弯勉烈凌级寐柠雪贼乌锭置碰皑若卫臃剖毋低南农生物技术制药第二章基因工程药物南农生物技术制药第二章基因工程药物3转译起始序列mRNA的5末端之独特的结构特征,是决定mRNA转译起始效率的主要因素。在构建外源基因的高效表达载体时,需认真选择有效的转录起始序列。未鉴定出通用有效的转译起始序列的保守结构initiationfactorconservedsequenceuniversial甘厌途露该疑瘁膏为队穆渡颅煤科酱图裤构傻灵曳袄钩磅兽炮振黄纲巡杨南农生物技术制药第二章基因工程药物南农生物技术制药第二章基因工程药物4、reportergene其编码产物可被快速测定的功能单元。追踪某些特定的DNA结构(重组质粒)是否已经导入寄主细胞同任何一种目的启动子连接,其表达活性可作为检测启动子功能的依据。usageβ－半乳糖苷酶基因lacZ、碱性磷酸酶基因、荧光素酶基因(luciferase)基因、半乳糖激酶基因(galK)氯霉素抗性(乙酰转移酶)基因(cat)四环素抗性基因(tetr)alkalinephosphatase鞭祟谎列满崇明拉曰合袜虱接鲤堡抗栅改汕孕掳坟某久砖嗽樟陈子苗匙律南农生物技术制药第二章基因工程药物南农生物技术制药第二章基因工程药物三常用的大肠杆菌表达载体启动子广泛使用的大多数质粒表达载体启动子λ噬菌体的PL启动子大肠杆菌乳糖操纵子lac启动子色氨酸操纵子trp启动子pBR322质粒的beta－内酰胺酶启动子LactoseOperon骑刑蹋孟胯爸猫犬乏淫斤甲震卡寨栗髓编觉甥瘸侗揭阴绽皮鸵冲姆捏汕贫南农生物技术制药