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1植株全氮、全磷、全钾的测定一、待测液的制备（H2SO4—H2O2消煮法）二、植株全氮的测定（H2SO4—H2O2消煮，蒸馏法）三、植株全磷的测定（H2SO4—H2O2消煮，钒钼黄比色法）四、植株全钾的测定（H2SO4—H2O2消煮，火焰光度法一、待测液的制备（H2SO4—H2O2消煮法）1H2SO4—H2O2消煮原理植物样品在浓H2SO4溶液中，经过脱水、碳化、氧化等一系列的作用后，易分解的有机物则分解，然后再加入H2O2，H2O2在热的浓H2SO4溶液中会分解出新生态氧，具有强烈的氧化作用，可继续分解没被H2SO4破坏的有机物，使有机态氮全部转化为无机铵盐。同时，样品中的有机磷也转化为无机磷酸盐，故可用同一消煮液分别测定N、P、K（植株中K以离子态存在）。2主要仪器：万分之一电子天平、0.5mm筛、三角瓶（50ml）或消煮管、移液管（5、10ml）+吸耳球、弯颈小漏斗、消煮炉、吸管、漏斗、无磷钾滤纸、容量瓶（100ml）2试剂：浓硫酸（GBT625）：化学纯、比重1.8430%H2O2（GB6684）：阴凉处存放3操作步骤称取烘干、磨细的植物样品(过0.5mm筛)0.19g，置于50ml三角瓶（或消煮管）底部（勿将样品粘附在瓶颈上），加浓硫酸5mL，摇匀（最好放置过夜），瓶口盖一弯颈小漏斗，在电炉上先缓缓加热，待浓硫酸分解冒大量白烟时再升高温度（在消煮炉上先250℃消煮—温度稳定后计时，时间约30min，待浓硫酸分解冒大量白烟时再升高温度至400℃）。消煮至溶液呈均匀的棕黑色时，取下三角瓶，稍冷后提起弯颈漏斗，滴加30%H2O210滴，并不断摇动三角瓶。再加热(微沸)约7-10min，取下，稍冷后重复滴加30%H2O25~10滴，再消煮。如此反复进行3-5次，每次添加的H2O2应逐次减少，消煮至溶液呈无色或清亮后，再加热5-10min（以赶尽剩余的H2O2)，取下三角瓶冷却，用少量水冲洗漏斗，洗液流入三角瓶中。将消煮液无损地洗入100ml容量瓶中，用水定容，摇匀。过滤或放置澄清后供氮、磷、钾测定。二、植株全氮的测定（H2SO4—H2O2消煮，蒸馏法）1、方法原理蒸馏过程的反应：（NH4)2SO4+NaOH→Na2SO+2NH3+2H2ONH3+H2O→NH4OHNH4OH+H3BO3→NH4·H2BO3+H2O滴定过程的反应：NH4·H2BO3+H2SO4→（NH4)2SO4+2H3BO32、主要仪器、试剂（1）主要仪器：万分之一电子天平、移液枪(2ml)、移液管（5、10ml）、三角瓶（50、150ml）、容量瓶（100、1000ml）、量筒、研钵、酸式滴定管、pH仪、定氮仪（2）需用的试剂：40%NaOH溶液（10mol/L氢氧化钠溶液）：称取40g氢氧化钠（GB629分析纯）溶于100ml水中硫酸（GB625—77）：分析纯，0.005mol/L硫酸（将0.01mol/L硫酸标准溶液用水稀释一倍）或0.01mol/L盐酸标准溶液0.02mol/L硫酸标准溶液：量取浓硫酸（C.R）2.83ml，加蒸馏水稀释至5000ml，此为0.02mol/L的（1/2H2SO4）标准溶液，然后用标准碱或硼砂标定之，将0.02mol/L的（1/2H2SO4）标准溶液用水稀释4倍。硼酸—指示剂溶液：硼酸-指示剂混合液：每升A溶液中加20mlB混合指示剂，并用稀碱调节至红紫色（pH值约4.5）。此液放置时间不宜过长，如在使用过程中pH值有变化，需随时用稀酸或稀碱调节之。2A2％硼酸溶液：20g硼酸（GB628-78分析纯）溶于1L约60℃去离子水中。B甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：0.5g溴甲酚绿（HG3-1220-79）和0.1g甲基红（HG3-958-76）于研钵中，加入少量95％乙醇，研磨至指示剂全部溶解后，加95％乙醇至100ml。pH4.5的水3、测定步骤在150ml三角瓶中，加入2％硼酸-指示剂混合液5ml，放在定氮仪冷凝管末端，管口置于硼酸液面以上3～4cm处。之后吸取待测液10.00mL（含NH4+-N约1mg）置于蒸馏器的定氮内室中，于定氮仪相应位置上，盖上具塞并密封使之不漏气。然后从加液漏斗处向蒸馏室内缓缓加入20ml10mol/L氢氧化钠溶液，立即关紧蒸汽发生器上排气口的旋钮，同时打开蒸汽发生器和定氮冷凝管连接橡皮管上的夹子。通入蒸汽蒸馏，蒸馏约15min左右，馏出液体积约50ml时，即蒸馏完毕。取下三角瓶，关闭蒸汽发生器和定氮冷凝管连接橡皮管上的夹子，并打开蒸汽发生器上排气口的旋钮。用少量已调节至pH4.5的水洗涤冷凝管的末端，取下三角瓶。之后，用气压差的原理，倒吸的方法洗蒸馏瓶中的废液，洗净蒸馏瓶。用0.005mol/L硫酸（或0.01mol/L盐酸）标准溶液滴定馏出液由蓝绿色至刚变为紫红色。记录所用酸标准溶液的体积（ml）。空白测定所用酸标准溶液的体积，一般不得超过0.4ml。4、结果计算植株中N（%）=（V1-V0）×C×14×D×10-3×100/m式中：V1——样品测定所消耗标准酸mL数；V0——空白试验所消耗标准酸mL数；C——标准酸（H+1）的浓度mol·L-1；·14——氮原子的摩尔质量（g·mol）；10-3——mL换算为L；D——分取倍数，定容体积/分取体积，100/10m——干样品质量（g）。5、注意事项（1）碱液要过量。要求中和完硫酸后再过量2mL；（2）蒸馏装置不能漏气；（3）硼酸要足量。估算方法：按1mL浓度为10.0g·L-1的硼酸能吸收0.46mg的N计算；（4）指示剂和硼酸最好分开配置保存。因二者混合过久，有指示终点不明显的可能。（5）指示剂和硼酸的pH要调到4.5（变色点）。（6）定氮仪参数设置中，加碱量设置为3S；定氮仪开机预热后，要多空蒸几次，等读数稳定后再进行样品测定。三、植株全磷的测定（H2SO4—H2O2消煮，钒钼黄比色法）1、方法原理在酸性条件下，正磷酸能与偏钒酸和钼酸发生反应，形成黄色的三元杂多酸—钒钼磷酸。溶液黄色稳定，黄色的深浅与磷的含量成正相关，所以，可用比色法测定溶液中磷的含量。2、主要仪器、试剂（1）主要仪器：万分之一电子天平、电磁炉、移液管（1、5、10ml2个）、吸耳球、容量瓶（50ml8个、100、1000ml）、量筒吸管、塑料瓶、棕色瓶、pH试纸、烘箱722或723型分光光度比色计（2）试剂浓硝酸(分析纯)0.2%二硝基酚指示剂（0.25g2,6-二硝基酚或2,4-二硝基酚溶于100ml水中，其变色范围是pH2.4（无色）—4.0（黄色），变色点是pH3.1）6mol/LNaOH溶液（24gNaOH(分析纯)溶于水，稀释至100ml）磷标准液50ug·mL-1（准确称取经105℃烘干的KH2PO4(分析纯)0.2195g溶于水，移入1L容量瓶，加水约400ml，加入5ml浓H2SO4（或浓硝酸），用水定容，装入塑料瓶中低温保存）。钒钼酸铵试剂：3A液：将25.0g的钼酸铵［(NH4)6Mo7O24·4H2O，分析纯］溶于400mL水中。B液：将1.25g的偏钒酸铵(NH4VO3，分析纯)溶于300mL沸水中，冷却后，加入250mL浓硝酸(分析纯)，冷却至室温。将A液缓缓注入B液中，不断搅匀，加水稀释到1L，贮入棕色瓶中。3、测定步骤吸取消煮好的待测液20.00mL（含P0.05~1.0mg）置于50ml容量瓶中，加2,6-二硝基酚（或2,4-二硝基酚)指示剂2滴，用6mol·L-1NaOH调pH至刚显黄色，准确加入钒钼酸铵试剂10.00mL，用水定容，摇匀。同时做空白实验。15min后，用分光光度计在450nm处比色，以空白液调节吸光值的零点。标准曲线制作：准确吸取50ug·mL-1的P标准溶液0、1.0、2.5、5、7.5、10.0、15.0mL，于50mL容量瓶中，加与吸取的待测液等量的空白消煮液，同上述操作步骤显色和比色。该标准系列P的浓度分别为0、1.0、2.5、5、7.5、10.0、15.0ug·mL-1P。4、结果计算植株全P(%)=ρ·V×分取倍数×10-4/m式中：ρ——从标准曲线查得显色液P的质量浓度(ug/mL)V——显色液体积(mL)分取倍数：定容体积/分取体积，100/10m——烘干样品质量（g）10－4—将ug/L浓度单位换算为百分含量的换算因数5、注意事项显色液的酸度要求在0.04~1.6mol.L-1H+内，酸度过高时，显色不完全或不显色，酸度太低时则可能生成沉淀或其它物质的颜色；比色要在15min后、24h内完成。四、植株全钾的测定（H2SO4—H2O2消煮，火焰光度法）1、方法原理植物体内的钾几乎全部以离子状态存在于植物组织中，样品经消煮或浸提，并经稀释后，待测液中的K可用火焰光度法测定。2、主要仪器、试剂（1）主要仪器：容量瓶（50ml8个、1000ml）；移液管(1.0、5.0、10ml)+吸耳球、火焰光度计。（2）试剂：100ug·mL-1K标准溶液（准确称取在105℃干燥2h后的0.1907gKCl，溶于水，于1L容量瓶中定容，存于塑料瓶中。3、测定步骤吸取消煮好的待测液5.000mL（含K10mg/L~50mg/L），置于50mL容量瓶，用水定容，摇匀，直接在火焰光度计上测定，读取检流计读数。标准曲线制作：准确吸取100ug·mL-1Ｋ标准溶液0，0.5，1.0，2.5，5.0，10，20ml，分别放入50ml容量瓶中，加入与吸取的待测液等量的空白消煮液，加水定容即得0，1，2，5，10，20，40mg/LK的标准系列溶液。以浓度最高的标准溶液定火焰光度计检流计的满度，然后从稀到浓依次进行测定，记录检流计读数，以检流计读数为纵坐标绘制标准曲线。4、结果计算植株全钾(%)=ρ·V×分取倍数×10-4/m式中：ρ：从标准曲线查得显色液K的质量浓度(ug·mL-1)V：测定液体积(mL)50ml分取倍数：定容体积/分取体积，100/10m：烘干样质量（g)10－4：将ug/L浓度单位换算为百分含量的换算因数5、注意事项(1)按要求制作标准曲线；(2)标准溶液和待测液的组成要基本相同。因为，溶液组成的改变（包括酸碱、阴、阳离子的浓度）对测定结果有影响；(3)仪器状态（如空气压力、火焰的状态等）对测定结果有影响。植物全氮、磷、钾的测定植物中氮、磷、钾的测定包括待测液的制备和氮磷钾的定量两大步骤。植物全氮待测液的制备通常用开氏消煮法(参考有机肥料全氮的测定)。植物全磷、钾可用干灰化或其他湿灰化法制备待测液。本书介绍H2SO4—H2O2消煮法，可用同一份消煮液分别测定4氮、磷、钾以及其它元素(如钙、镁、铁、锰等)。一、植物样品的消煮(H2SO4—H2O2法)方法原理植物中的氮磷大多数以有机态存在，钾以离子态存在。样品经浓H2SO4和氧化剂H2O2消煮，有机物被氧化分解，有机氮和磷转化成铵盐和磷酸盐，钾也全部释出。消煮液经定容后，可用于氮、磷、钾等元素的定量。本法采用H2O2加速消煮剂，不仅操作手续简单快速，对氮磷钾的定量没有干扰，而且具有能满足一般生产和科研工作所要求的准确度，但要注意遵照操作规程的要求操作，防止有机氮被氧化成N2或氮的氧化物而损失。试剂：(1)硫酸(化学纯、比重1.84)(2)30%H2O2（分析纯)操作步骤：(1)常规消煮法称取植物样品(0.5mm)0.3～0.5g(准确至0.0002g)装入100ml开氏瓶的底部，加浓硫酸5ml，摇匀(最好放置过夜)，在电炉上先小火加热，待H2SO4发白烟后再升高温度，当溶液呈均匀的棕黑色时取下，稍冷后加6滴H2O2，再加热至微沸，消煮约7—10分钟，稍冷后重复加H2O2再消煮，如此重复数次，每次添加的H2O2应逐次减少，消煮至溶液呈无色或清亮后，再加热约10分钟，除去剩余的H2O2，取下冷却后，用水将消煮液无损转移入100ml容量瓶中，冷却至室温后定容(V1)。用无磷钾的干燥滤纸过滤，或放置澄清后吸取清液测定氮、磷、钾。每批消煮的同时，进行空白试验，以校正试剂和方法的误差。(2)快速消煮法称取植物样品(0.5mm)0.3～0.5g(称准至0.00