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GMP标准文件山东华禧药业有限公司标准操作规程SOP第1页共2页题目：检定菌贮存、接种和传代标准操作规程编号：SOP05-TY010-I分发号：颁布部门：质量部分发部门：质量部生效日期：起草人：审核人：批准人：起草日期：审核日期：批准日期：分发范围：质量部、化验室1目的与适用范围建立检定菌的贮存、接种、传代操作规程，规范检定菌的管理。适用于公司实验用的检定菌管理。2职责QC主管、微生物（无菌）检验人员对本规程的实施负责。3内容3.1来源：检定菌种由药检部门提供已接种好的菌种斜面。3.2保存3.2.1将购来的试管斜面菌种放入冰箱中冷藏保存。3.2.2将传代并经过培养后的菌种放入冰箱中保存。3.2.3检定菌应放置于冰箱中3-5℃保存。3.2.4每只保存菌种需标明菌名、统一编号、接种日期。3.3传代和接种3.3.1试验用菌种每月传代一次，在菌种接种室内进行传代和接种(传代数量为需用量外加4支，外加的4支供下一次传代用)。3.3.2先点燃酒精灯，在火焰旁的上部空间操作，灼烧接种环，灼杯红热至少三次。3.3.3将原有的菌种斜面培养基（简称菌种管）与接种的新鲜斜面培养基（简称接种管）持在左手拇指、食指及中指之间，注意能清楚地观察到斜面，菌种管在前，接种管在后。应斜持试管口向上呈45度角，使试管内斜面向上，两试管口平齐，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。3.3.3.1首先，以右手在火焰旁转动两管的棉塞，以便接种时易于拔取。再以右手持GMP标准文件山东华禧药业有限公司标准操作规程SOP题目：检定菌贮存、接种和传代标准操作规程编号：SOP05-TY010-I第2页共2页接种环的柄端，垂直或稍斜地把接种环在火焰上灼烧。灼烧时，应把环置于酒精灯的外焰上，因外焰的温度比内焰高，容易烧红。3.3.3.2使用右手的小指和手掌之间以及无名指与小指之间，在火焰旁分别拔出两支试管的棉塞，持住。再将试管口在火焰上通过，以杀灭管口可能沾污的细菌，但勿烧烫。3.3.3.3先将烧灼过的接种环插入菌种管内，抚接触无菌苔生长的培养基上，如有熔印则表明接种环未冷却，能烫死细菌。一定待冷后，再从斜面上挑取菌苔少许。取出时接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管，在斜面上轻轻划线接种。划线时一般先由下而上划一直线后，再由下而上划曲线。操作过程应迅速，勿使菌苔沾至管壁或管口。3.3.4当接种完毕，立即将管口通过火焰灭菌，右手到火焰旁塞上棉塞，不要将管口离开火焰旁去迎接右手的棉塞。最后将接种环烧灼灭菌放置原处，再把可能未塞紧的棉塞塞紧，即可进行培养。3.4操作过程中，如因不慎使棉塞触及火焰而着火，切勿用口吹，须在刚刚着火时迅速塞入试管，因管内氧气不足会很快熄灭。若棉塞外端着火，可用手捏熄。3.5若棉塞烧坏不宜再用，可另取未接种斜面培养基上的灭菌棉塞，代替塞上。3.6传代和接种使用后，应做好记录。3.7每次传代后要注意观察菌种的生长情况，在使用和下次传代时择优使用。3.7.1当发现菌种生长状态异常时应及时灭活处理，并购买新的菌种使用和传代。