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维和药业秘密第1页共4页目的：建立一个安捷伦1290Infinity型高效液相色谱仪使用、维护、保养规程，保证检验人员能按规程正确使用仪器，确保仪器的准确性、精密度。防止仪器损坏，延长使用寿命，保证仪器正常运行。范围：适用于安捷伦1290Infinity型高效液相色谱仪的使用、维护和保养。责任：质量管理部。程序：1.开机1.1打开计算机，进入WindowsXP画面。1.2打开Agilent1290InfinityHPLC各模块电源。1.3待各模块自检完成后，双击“仪器1联机”图标，化学工作站自动与Agilent1290InfinityHPLC通讯。1.4从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”、“系统视图”、“命令行”，使其命令前有“√”标志来调用所需的界面。1.5右键点击泵下面的瓶图标，选择“瓶填充”，输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积。点击“确定”。1.6从菜单“视图”中，选中“在线信号”，选中“信号窗口1”，然后点击“改变…”钮，将所要绘图的信号移到右边的框中，点击“确定”。(如同时检测二个信号，则重复，选中“信号窗口2”。)2.排气2.1首先在泵模块单击右键，在方法编辑中，泵的参数设置部分，选好需要排空的通道（保证是开的）。2.2右键点击仪器状态视图中泵的图标，选择控制。2.3勾上清洗，并且输入流量、时间、比例，开启“泵”、“清洗”功能，点击“确定”，就可以排空管道。排空的时候阀会自动切换，无需人为介入。2.4当我们发现泵头里面有气泡出不来的时候，选择开启“注入”，然后点击确定。此时泵会用很强烈的方式朝外泵液体，并持续20次自动停止。3.编辑数据采集方法3.1开始编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法…”项，在方法编辑选项仅选择“仪器/采集”，点击“确定”，进图下一画面。3.2方法信息：在“方法注释”中加入方法的信息（如：Thisisfortest!），点击“确定”，进入下一画面。3.3进样方式选择根据自动进样器的类型，选择合适的进样方式，本机默认为“HipAls”。3.4泵参数设定：在“流量”处输入流量，如1.5ml/min，停止时间：10min。在“溶剂B”处输入70.0，(A=100-B)，也可“添加”一行“时间表”，编辑梯度。在“压力限”处输入柱标题安捷伦1290Infinity型超高效液相色谱仪使用、维护、保养规程生效日期起草人审核人批准人起草日期审核日期批准日期颁发部门编号复印份数分发至维和药业秘密第2页共4页标题安捷伦1290Infinity型超高效液相色谱仪使用、维护、保养规程颁发部门质量管理部编号SOP-ZL(WB)091-02子的最大耐高压，以保护柱子。3.5自动进样器参数设定:选择合适的进样方式，如：“进样体积1.0ul，标准进样”----只能输入进样体积，此方式无洗针功能；“进样量1.0ul，针清洗后进样”----此方式有洗针功能，“针清洗”一般选择为“冲洗端口，时间3.0秒”。3.6柱温箱参数设定:在“温度”下面，如无特殊规定，左侧、右侧设置成同样温度，使柱箱温度左右一致。3.7DAD检测器参数设定:检测波长:254nm，带宽=4nm，参比波长=360nm，带宽=100nm;检测波长：一般选择最大吸收处的波长。样品带宽：一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。参比波长：一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域。参比带宽：至少要与样品信号的带宽相等，许多情况下用100nm作为缺省值。峰宽（响应时间）：其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。狭缝-狭缝窄，光谱分辨率高；宽时，噪音低。同时可以输入采集光谱方式，步长，范围，阈值。选中所用的灯。可以开启光学单元温度控制；可以设定8通道信号等。3.8保存方法从“方法”菜单，选中“方法另存为…”，输入一方法名，如“测试”，点击“确定。4.单次样品运行从“运行控制”菜单中，选择“样品信息”选项，输入操作者名称，如“安装工程师”；在“数据文件”中选择“手动”或“前缀/计数器”；在“样品参数”中填入“样品位置”、“样品名称”。点击“确定”，在“仪器”菜单选择“系统开启”。等仪器准备好，基线平稳，从“运行控制”菜单中选择“运行方法”，进样。5.面积百分比数据处理5.1选择界面退出“仪器1联机”界面，双击“仪器1脱机”图标，进入数据分析画面。5.2调用信号从“文件”菜单选择“调用信号”，选中您的数据文件名。点击“确定”，则数据被调出。5.3做谱图优化：从“图形”菜单中选择“信号选项”。从“范围”中选择“满量程”或“自动量程”及合适的时间范围或选择“自定义量程”调整。反复进行，直到图的比例合适为止。点击“确定”。5.4积分优化:从“积分”菜单中选择“积分事件”选项。选择合适的“斜率灵敏度”、“峰宽”、“最小峰面积”、“最小峰高”。从“积分”菜单中选择“积分”选项，则数据被积分。如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。点击左边“√”图标，将积分参数存入方法。5.5打印报告:维和药业秘密第3页共4页标题安捷伦1290Infinity型超高效液相色谱仪使用、维护、保养规程颁发部门质量管理部编号SOP-ZL(WB)091-02从“报告”菜单中选择“设定报告”选项。点击“定量结果”框中“定量”右侧的黑三角，选中“面积百分比”，其它选项不变。点击“确定”。从“报告”菜单中选择“打印报告”，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则点击“报告”顶部的“打印”钮。6.关机关机前，先关灯，用相应的溶剂充分冲洗系统。退出化学工作站，依提示关泵，及其它窗口，关闭计算机。关闭Agilent1290各模块电源开关。关闭稳压器。7.定量数据处理7.1点击“方法”菜单，选择“调用方法L..”，在方法目录中选择要进行定量设定的方法，该方法是经过积分和谱图优化过的方法。点击“确定”，则选择的方法被调出。7.2从“文件”菜单中选择“调用信号…”选项，选中标样的数据文件名，点击“确定”，则数据被调出。检查确认积分和谱图优化的参数是否合适。7.3从“校正”菜单中选择，“新建校正表”按钮，确认选项在“自动设定”，级别为“1”，点击“确定”。若要信号单独计算，则选择“校正模式”中的“每个信号单独计算”。7.4在覆盖现有校准表中对话框中，选择“是（Y）”。若方法中没有旧的校准表，无此项。7.5则所有积过分的峰，其保留时间、峰面积按序显示在校准表中。依次输入化合物的名称、含量，校准曲线显示在右下方。可以设定参考峰等。若用内标方法定量，还须选择内标，点击“内标“下的区域，选择那个峰作为内标峰，指定每个色谱峰以那个内标为参比。点击“确定”。7.6在删除含量为零的行对话框中选择“是（Y）”。则校准表中未输入含量的峰从表中删除。7.7点击“校正”菜单，选择“校正设置”按钮，输入单位：如“mg/ml”；其它项不变。点击“确定”。7.8打印报告:从“报告”菜单中选择“设定报告（R）…”选项。点击“定量结果”框中“定量”右侧的黑三角，选中“外标法”，其它选项不变。点击“确定”。----若是用内标法定量，则选“内标法”。从“报告”菜单中选择“打印报告“，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则点击“报告”顶部的“打印”钮。---可以选择打印到文件中，如PDF格式。7.9若有多个浓度标样，则依次调出校正数据，调出每一个校正数据后，点击“校正”菜单，选择“添加级别“，第2级数入”2“，类推。在校准表中输入每级的组份浓度。7.10在方法菜单中，选择“运行时选项表”，确认“标准数据分析选项”也被选中，点击“确定”。点击“保存”按钮，存储修改的方法。此方法包含校准表，建立完毕。8.使用后填写使用登记。9.HPLC使用过程中的注意事项维和药业秘密第4页共4页标题安捷伦1290Infinity型超高效液相色谱仪使用、维护、保养规程颁发部门质量管理部编号SOP-ZL(WB)091-029.1流动相使用中的问题9.1.1要求使用色谱纯级的溶剂。9.1.2HPLC应使用超纯水，混合水溶液需用＜0.2µm的滤膜过滤。水必须放在棕色瓶中，使用前要经过超声处理。由于水长时间放置易滋生细菌，因此应尽量使用新鲜制得的纯水。当有机溶剂的比例低于10%时，最好现用现配，放置不应超过三天。当纯水做为单独一元溶剂时，应每天更换。且长时间不用，该管道及滤头应保存在有机溶剂中。9.1.3注意过滤水相或有机相时选用不同的滤膜。常用0.45µm的滤膜，如果使用亚二微米颗粒色谱柱，检验使用0.2µm的滤膜。9.1.4四氢呋喃、醚类等有机溶剂应放在棕色瓶中，以防光照变质。9.1.5注意要定期更换、过滤容积，尤其是水相或缓冲盐流动相。9.2溶剂转换问题9.2.1反相色谱中溶剂转换若系统及柱子中为纯甲醇（或乙腈），如需换到缓冲液流动相，则至少应以20-30ml90%的水/甲醇（或乙腈）作为过渡，以免流动相中的缓冲盐析出，造成系统压力过高，甚而可能堵塞管路及色谱柱。当实验结束，冲洗柱子时，同样也应该注意冲洗的溶剂与流动相的兼容性。9.2.2反相色谱与正相色谱的转换一般两种条件的转换中间一定要充足的溶剂转换，一般会选用与水和正己烷均能以任意比例混溶的异丙醇冲洗。如果异丙醇冲洗的时间不够，则可能会在检测器内形成油珠状液滴。出现类似检测器内有气泡的症状。9.3避免的溶剂9.3.1卤化物碱金属溶液对不锈钢有腐蚀性的酸溶液。9.3.2高浓度的无机酸，例如：硝酸和硫酸。9.3.3能都形成卤素自由基或酸的氯化试剂及其混合物。9.3.4含有过氧化物的色谱级醚必须用氧化铝干燥剂。9.3.5在有机溶剂中的有机酸溶液。9.3.6含有强络合剂的溶液。9.3.7四氯化碳和异丙醇或四氢呋喃混合液。9.3.8如果使用PEEK毛细管，还应该注意尽量避免使用二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃等有机溶剂。