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1CFX96快速梯度定量PCR仪快速操作指南一．运行实验1.确认系统数据线和电源线连接正常后，打开CFX96开关，系统将自主进入自检模式。2.自检完成后，双击启动Bio-RadCFXManager控制软件,软件将自动搜索仪器设备，完成连接后，“DetectedInstruments”列表出现设备名称的序列号，同时PCR仪器屏幕显示有红色“Underremotecontrol”字体。3.软件启动后，会出现“StartupWizard”操作导航指示，选择“CreateaNewRun”,同时选择“CFX96“，最后点击”OK”确认进入新运行程序等编辑界面；如需要运行如“打开文件”、“运行相同实验”等请分别选择不同的选项即可。4.在“RunSetup”的条件下，点击“”标签，可分别选择“CreateNew”：可新建热循环程序；“SelectExisting”可调用已有程序；”ExpressLoad”：下拉菜单中可选择的各种标准预设的热循环程序；“EditSelected”：对选中程序进行再编辑。4.1新建或编辑程序时，可在图形或文字区域输入各步骤设定温度、时间值等。4.2：插入一个普通控温步骤4.3：插入一个温度梯度步骤4.4：插入热循环范围，包括循环起始步骤和重复次数（总循环数＝输入的重复次数’MoreTime’+1）.4.5：插入一个融解曲线程序4.6或：插入或删荧光采集步骤4.7：对反应条件进行优化，包括温度梯度设置、降落PCR设置、升降温速率调节等4.8：删除步骤4.9编辑完成后点击“OK”确认并保存程序，该保存的程序方便下次调用。5.在完成程序设置后，点击后下角的“NEXT”或左上角的“”,进入检测样品设置界面。可分别选择“CreateNew”：可新建样品信息设置；“SelectExisting”可调用已有设置；”ExpressLoad”：下拉菜单中可选择的各种标准的简单预设模块；“Edit2Selected”：对选中样品设置信息进行再编辑。新建或编辑样品设置请按如下操作进行：5.1从“”下拉框中选择荧光扫描模式，“SYBR/FAMOnly”为单通道快速扫描模式，适合使用染料法（如SYBRGreen/EvaGreen）或FAM探针的检测；“AllChannels”为全通道检测模式，可同时对5个通道扫描，适合与任意探针的检测；”FRET”模式适用与FRET探针的使用。在完成这步后可直接跳入步骤6运行实验，从而节约时间，在这种情况下，以下”5.*”步骤可在实验运行中或实验运行结束后再进行编辑，从而尽最大可能的节约时间。5.2“”：选择实验时所使用的荧光分子，注意如果为”SYBR/FAMOnly”模式其仅能选择“FAM、SYBRGreen”5.3“”通过下拉框选择所选反应孔的检测样品类型，包括未知样品（Unknow）、标准品、阴性对照、阳性对照等等。5.4在“”打勾：为所选样品指定检测的荧光类型（此列为SYBRGreen），根据实验需要还可以在“TargetName”中输入扩增基因名称5.5在””输入所选检测孔的样品名，并打勾确认。5.6如有重复性设置，可在复选重复性测试孔后在“”中逐一指定；或者点击“”进行快速的重复反应孔设定。即在“”中分别填入重复的次数和重复起始编号，并在””中选择重复放置的方向。最后点击“”即可。5.7如果在样品类型“SampleType”中选择的为“Standard”，则需要为标准品浓度赋值，可在“”中对对应孔逐一赋值。5.8可在“”设定相对表达量差异分析时的内参、对照样品及各样品的实际扩增效率5.9在“”可解除所选样品重复状态设置35.10“”可删除当前选定的样品孔设置。5.12如有疑问，点击“”再次查看板编辑的流程5.13最后点击左上角的“Settings－PlateType”选择实验所用耗材的类型。5.14编辑完成后点击“OK”确认并保存孔位设置，该保存的设置可方便下次调用。6.确定样品设置后点击右下角的“NEXT”或者点击“”进入运行系统。此时可在“Notes”中输入实验测试的目的等相关信息，并在“”输入样品反应体积。最后点击“”按钮仪器会自动打开样品槽，此时按照设置好的样品位置放置好样品，然后点击“”让仪器自动关闭样品槽（注意：样品槽开或关闭时请勿强行扳开或压合），热盖闭合后“”会变亮，此时点击“”，确定实验数据的保存位置后，程序将开始运行。7.Note：程序运行中或运行结束后都可点击“”对“第5步骤”编辑的样品类型进行再编辑，也可按照“第5步骤”的流程编辑新的设置类型等。8.实验结束后，点击“”，取出并丢弃反应板或管，同时点击“”关闭样品槽后，再退出程序，关闭仪器电源，最后关闭电脑后方可离开。二．数据查看9.如需查看后分析数据，可直接点击“.pcrd”文件或点击软件左上角“File-Open-Datafile”，选择需要分析的测试结果文件。10.对于“”中的“Quantification”可查看扩增曲线、标准曲线、96孔板位置及Ct值；“QuantificationData”可查看所有反应孔的实验数据（包括设置的样品名、检测基因名及Ct值和标准差等）；“MeltCure”可查看所选反应孔其检测因子的融解曲线等；“MeltCureData”可查看所有反应孔的各因子其扩增子的Tm值等信息；在编辑完成各样品反应孔的样品名及检测因子名后，再指定内参因子或指定内参因子和对照样品后，点击“GeneExpression”4即可得到各样品中各因子的表达量差异变化示意图和变化倍数；“EndPoint”指扩增完成后其终点荧光值；“CustomerDataView”可在同一界面查看扩增曲线、融解曲线、Ct值、96孔板设置的样品信息等；“QC”可设置数据判定的标准；“RunInformation”可查看实验反应程序。详细的数据查看方式可查看CFXManagerSoft的中文使用说明书。11.如需对不同的反应文件综合起来进行相对定量表达量差异分析，可点击左上角的“File-New-GeneStudy”，打开窗口后，点击“”添加需要进行综合进行表达量差异分析的文件；添加完场后选择“”进入另一个界面，此时在“”设定相对表达量差异分析时的内参、对照样品及各样品的实际扩增效率即可显示各样品中各因子的表达量差异示意图及差异倍数等。详细的数据分析方式可查看CFXManagerSoft的中文使用说明书。三．使用注意事项1.设备长时间不使用时，请勿将热盖打开，以免灰尘在Block上长期积累，影响热传递2.热盖打开和闭合时让设备自由运行，不得强行扳开或压合3.请勿同时使用不同规格的耗材4.为避免意外断电，建议为设备配置UPS稳压电源5.程序未结束时不得关闭系统电源，不得带电扳动设备背后的锁定杆6.PCR运行时请不要搬动设备，如需长途运输仪器请将仪器设备设置到运输状态，并合理打包后在运输（可联系BIO-RAD工程师）7.该仪器为贵重设备，最好有专人管理！BIO-RAD广州地区售后服务电话020-87322339