搜索
台州市食品药品检验研究院文件编号:TZSY/HCSP007-2019高效液相色谱仪期间核查操作规程第1页共10页2019年版第1次修订2019年12月20日发布2020年01月01日实施编制（/修订）：审核：批准：台州市食品药品检验研究院文件编号:TZSY/HCSP007-2019高效液相色谱仪期间核查操作规程第2页共10页2019年版第1次修订2019年12月20日发布2020年01月01日实施1.核查目的为使高效液相色谱仪运行正常，确保检验数据的准确、可靠，特制订本规程。2.适用范围适用于高效液相色谱仪紫外-可见光检测器、二极管阵列检测器、荧光检测器、示差折光检测器、蒸发光散射检测器在两次检定之间的运行检查。3.核查依据高效液相色谱仪使用说明书JJG705-2014《液相色谱仪检定规程》4.环境条件检测室内室温应在15～30℃，相对湿度20%～85%。室内无强烈的机械振动和电磁干扰。5.核查内容及方法5.1外观检查5.1.1仪器名称、型号、制造厂名、产品系列号、出厂日期等标牌内容齐全。5.1.2检查仪器电源线、信号线等插接紧密，各开关、旋钮、按键等功能正常，指示灯灵敏，显示器清晰。5.1.3检查贮液器是否清洁，检查吸滤头是否堵塞，若有堵塞现象，可先用异丙醇超声处理，然后再用甲醇或乙睛清洗干净。5.1.4开启仪器各部分电源,检查泵、检测器、柱温箱，电脑主机与软件等运行状况是否正常。5.2输液系统核查5.2.1流量设定值误差SS和流量稳定性误差SR,，SS和SR应符合表1的要求。表1SS和SR的技术要求流量设定值（mL/min）0.51.02.0台州市食品药品检验研究院文件编号:TZSY/HCSP007-2019高效液相色谱仪期间核查操作规程第3页共10页2019年版第1次修订2019年12月20日发布2020年01月01日实施测量次数333流动相收集时间(min）1055允许误差SS±5%±3%±2%SR3%2%2%5.2.2检定方法按表1的要求设定流量，启动仪器，等压力稳定后，在流动相排出口用事先清洗称量过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确在5～10min收集，称重。按(1)、(2)、(3)式计算SS和SR.Fm=(W2-W1)/ρr·t(1)SS=︱F-FS︱/FS×100%(2)SR=(Fmax-Fmin)/F×100%(3)式中:Fm:流量实测值，mL/minFS:流量设定值，mL/minW2:容量瓶+流动相的质量，gW1:容量瓶的质量，gρr:实验温度下流动相的密度，g/cm3t:收集流动相的时间，minFmax:同一组测量中流量最大值，mL/minFmin:同一组测量中流量最小值，mL/minF:同一组测量的算术平均值，mL/min5.3检测器核查●5.3.1紫外-可见光检测器和二极管阵列检测器5.3.1.1基线噪声和漂移选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流速为1.0mL/min,紫外检测器的波长为254nm，开机预热，待仪器稳定后记录基线30min,由检测器的衰台州市食品药品检验研究院文件编号:TZSY/HCSP007-2019高效液相色谱仪期间核查操作规程第4页共10页2019年版第1次修订2019年12月20日发布2020年01月01日实施减倍数和测得的基线峰-峰高对应的信号值，按公式（4）计算基线噪声，用检测器自身的物理量（AU）作单位表示。基线漂移用30min内基线偏离起始点最大信号值（AU/30min）表示。Nd=KB(4)Nd-检测器基线噪声K-衰减倍数B-测得的基线峰-峰高对应的信号值5.3.1.2最小检测浓度选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流速为1.0ml/min,紫外检测器的波长为254nm，用微量注射器注入20uL的0.1ug/mL(1×10-7g/ml)萘-甲醇溶液，记录色谱图，由色谱峰和基线噪声峰-峰高，按式（5）计算最小检测浓度CL。CL=2NdCV/20H(5)CL-最小检测浓度，g/mlNd-基线噪声峰-峰高,mmH-标准溶液的色谱峰高,mmC-标准溶液浓度,g/mlV-进样体积,ul5.3.1.3定性、定量重复性核查将仪器各部分连接好，选用C18色谱柱，以100%甲醇作为流动相，流量为1.0ml/min，检测波长为254nm，基线稳定后注人20uL的100ug/mL(1×10-4g/mL)萘-甲醇标准溶液，连续自动进样6次。要求：定性重复性误差6次测量值的RSD应小于或等于1.0%；定量重复性误差6次测量值的RSD应小于或等于3.0%。●5.3.2荧光检测器台州市食品药品检验研究院文件编号:TZSY/HCSP007-2019高效液相色谱仪期间核查操作规程第5页共10页2019年版第1次修订2019年12月20日发布2020年01月01日实施5.3.2.1基线噪声和漂移将仪器各部分连接好，选用C18色谱柱，以100%甲醇作为流动相，流量为1.0mL/min，激发波长选在290nm，发射波长选在330nm，仪器预热稳定后，记录基线30min，根据检测器的衰减倍数和测得的基线峰一峰高对应的响应信号值，按式(4)计算基线噪声，用检测器自身的物理量(EU)做单位表示。基线漂移用30min内基线偏离原点的值（EU/30min）表示。5.3.2.2最小检测浓度在5.3.2.1的色谱条件下，待基线稳定后由进样器注人20uL的0.1ug/mL(1×10-7g/mL)萘-甲醇溶液，记录色谱图，按式(5)计算最小检测浓度。5.3.2.3定性、定量重复性核查用100%甲醇作为流动相，流量为1.0mL/min，激发波长和发射波长分别为290nm和330nm，基线稳定后注人20uL的10ug/mL（1×10-5g/mL）萘-甲醇标准溶液，连续自动进样6次。要求：定性重复性误差6次测量值的RSD应小于或等于1.0%；定量重复性误差6次测量值的RSD应小于或等于3.0%。●5.3.3示差折光检测器5.3.3.1基线噪声和漂移选用C18色谱柱，将仪器各部分联接好，以甲醇作为流动相，流量为1ml/min,参比池充满流动相，灵敏度选择在最灵敏挡，接通电源，待仪器稳定后记录基线30min，根据检测器的衰减倍数和测得的基线峰一峰高对应的响应信号值，按式(4)计算基线噪声，用检测器自身的物理量(RIU)表示。基线漂移用30min内基线偏离原点的值（RIU/30min）表示。(实验中应特别注意，室温的波动不要超过2℃)。5.3.3.2最小检测浓度台州市食品药品检验研究院文件编号:TZSY/HCSP007-2019高效液相色谱仪期间核查操作规程第6页共10页2019年版第1次修订2019年12月20日发布2020年01月01日实施在5.3.3.1的色谱条件下，待基线稳定后由进样器注人20uL的5.0ug/mL甲醇中胆固醇溶液标准物质，记录色谱图，按式(5)计算最小检测浓度。5.3.3.3定性、定量重复性核查示差折光检测器用100%的甲醇为流动相，流量为1.0mL/min，灵敏度选在中间挡，注入20uL的200ug/mL（2.0×10-4g/mL）的甲醇中胆固醇溶液标准物质，连续测量6次。要求：定性重复性误差6次测量值的RSD应小于或等于1.0%；定量重复性误差6次测量值的RSD应小于或等于3.0%。●5.3.4蒸发光散射检测器5.3.4.1基线噪声和漂移选用C18色谱柱，将仪器各部分联接好，以甲醇作为流动相，流量为1ml/min,漂移管温度70℃，雾化气体流速为（2.5-3.0）L/min或适当的气体压力（280-350）kPa，灵敏度选择在适合的挡位，接通电源，待仪器稳定后记录基线30min，根据检测器的衰减倍数和测得的基线峰一峰高对应的响应信号值，按式(4)计算基线噪声，用检测器自身的物理量(mV)表示。基线漂移用30min内基线偏离原点的值（mV/30min）表示。5.3.4.2最小检测浓度在5.3.4.1的色谱条件下，待基线稳定后由进样器注人20uL的5.0ug/mL（5.0×10-6g/mL）甲醇中胆固醇溶液标准物质，记录色谱图，按式(5)计算最小检测浓度。5.3.3.3定性、定量重复性核查蒸发光散射检测器用100%甲醇作为流动相，流量为1.0mL/min，灵敏度选在中间挡，注入20uL的200ug/mL(2.0×10-4g/mL)的甲醇中胆固醇溶液标准物质，连续测量6次。要求：定性重复性误差6次测量值的RSD应小于或等于1.5%；定量重复性误差6次测量值的RSD应小于或等于4.0%。台州市食品药品检验研究院文件编号:TZSY/HCSP007-2019高效液相色谱仪期间核查操作规程第7页共10页2019年版第1次修订2019年12月20日发布2020年01月01日实施6.核查结果处理1、经核查合格的仪器可继续使用。2、核查结果超出允许范围，应停止使用并申请维护修理、计量检定、执行本规程。3、在每两次检定之间核查一次，出现异常情况或长期未用时核查，在大批量样品检验时核查。7.期间核查记录表格详见附页。台州市食品药品检验研究院文件编号:TZSY/HCSP007-2019高效液相色谱仪期间核查操作规程第8页共10页2019年版第1次修订2019年12月20日发布2020年01月01日实施高效液相色谱仪核查记录仪器型号温度相对湿度仪器编号检定员核查日期1外观名称核查项目符合不符合外观仪器上应有仪器的名称、型号、制造厂名、产品系列号、出厂日期等标牌内容齐全仪器电源线、信号线等插接紧密，开关、旋钮、按键等功能正常，指示灯灵敏，显示器清晰。贮液器清洁；吸滤头未堵塞；仪器各部分电源,泵、检测器、柱温箱，电脑主机与软件等运行状况正常。2.输液系统名称核查项目技术要求，%核查结果，%结论输液系统流量设定值误差SS0.5mL/min≤±51.0mL/min≤±32.0mL/min≤±2流量稳定性误差SR0.5mL/min≤31.0mL/min≤22.0mL/min≤2台州市食品药品检验研究院文件编号:TZSY/HCSP007-2019高效液相色谱仪期间核查操作规程第9页共10页2019年版第1次修订2019年12月20日发布2020年01月01日实施3检测器核查检测器名称核查项目技术要求核查结果结论紫外-可见光和二极管阵列检测器基线噪声≤5×10-4AU基线漂移≤5×10-3AU/30min最小检测浓度≤5×10-8g/mL萘-甲醇溶液荧光检测器基线噪声≤5×10-4EU基线漂移≤5×10-3EU/30min最小检测浓度≤5×10-9g/mL萘-甲醇溶液示差折光检测器基线噪声≤5×10-7RIU基线漂移≤5×10-6RIU/30min最小检测浓度≤5×10-6g/mL胆固醇-甲醇溶液蒸发光散射检测器基线噪声≤1mV基线漂移≤5mV/30min最小检测浓度≤5×10-6g/mL胆固醇-甲醇溶液台州市食品药品检验研究院文件编号:TZSY/HCSP007-2019高效液相色谱仪期间核查操作规程第10页共10页2019年版第1次修订2019年12月20日发布2020年01月01日实施4定性定量重复性名称技术要求RSD,%核查结果RSD,%结论紫外-可见光和二极管阵列检测器峰面积（定量）≤3.0保留时间（定性）≤1.0荧光检测器峰面积（定量）≤3.0保留时间（定性）≤1.0示差折光检测器峰面积（定量）≤3.0保留时间（定性）≤1.0蒸发光散射检测器峰面积（定量）≤4.0保留时间（定性）≤1.5备注