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生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程（中国药典2015版）质量部1生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程2细胞基质的概念生产非重组制品所用的细胞基质，系指来源于未经修饰的用于制备其主细胞库的细胞系/株和原代细胞。生产重组制品的细胞基质，系指含所需序列的、从单个前体细胞克隆的转染细胞。生产杂交瘤制品的细胞基质，系指通过亲本骨髓瘤细胞系与另一亲本细胞融合的杂交瘤细胞系。3细胞系/株历史资料具体化2010版要求如采用已建株的细胞系/株，应从具有一定资质的细胞保藏中心获取细胞，且应提供该细胞在保藏中心的详细传代过程，包括培养过程中所使用的原材料的相关信息，具有细胞来源的证明资料。2015版要求如采用已建株的细胞系/株，应具有细胞来源的证明资料。应从能够提供初始细胞历史及其溯源性书面证明材料的机构获得，且应提供该细胞在该机构的详细传代记录，包括培养过程中所使用的原材料的相关信息，如种类、来源、批号、生产日期及有效期、制备或使用方法、质量标准及检测结果等。4细胞培养操作要求（新增）细胞来源的供体原材料的选择细胞培养的体系细胞收获及传代•体外培养细胞龄的计算二倍体细胞龄以细胞群体倍增水平计算，也可以每个培养容器细胞群体细胞数为基础，每增加一倍作为一世代粗略估算，即1瓶细胞传2瓶(1:2分种率)，再长满瓶为1世代；1瓶传4瓶(1:4分钟率)为2世代；1瓶传8瓶(1:8分种率)则为3世代。生产用细胞龄限制在细胞寿命期限的前2/3内。连续传代细胞系的细胞龄可以群体倍增水平计算，也可以按照固定的传代比率进行传代，每传一次为一代。（传代细胞系则以一定稀释倍数进行传代）细胞系的建立细胞冻存人员5细胞库管理2010版细胞库为三级管理，即原始细胞库、主细胞库及工作细胞库。如为引进的细胞，可采用主细胞库和工作细胞库组成的二级细胞库管理。在某些特殊情况下，也可使用MCB一级库，但须得到国务院药品监督管理部门的批准。2015版三级细胞路管理包括细胞种子、主细胞库（MCB）及工作细胞库(WCB)。在某些特殊情况下，也可以采取细胞种子及MCB二级管理，但须得到国务院药品监督管理部门的批准。6细胞活力要求的变化•为保证细胞冻存后仍具有良好的活力，冻存前的细胞活力应不低于90%。•冻存后应取一定量的可代表冻存全过程的冻存管复苏细胞，复苏后细胞的活力应不低于80%。7细胞检定项目要求8生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程一、对生产用细胞基质总的要求二、连续传代细胞系的特殊要求三、人二倍细胞株的特殊要求四、重组细胞的特殊要求五、原代细胞的要求六、检定用细胞的要求附录1：逆转录酶活性检查法附录2：成瘤性检查法附录3：致瘤性检查法9一、对生产用细胞基质总的要求•（一）细胞系/株历史资料•（二）细胞培养操作要求•（三）细胞库•1、细胞库的建立•2、细胞库的管理•（四）细胞检定•（五）生产细胞培养10（三）细胞库•1、细胞库的建立三细胞库管理包括细胞种子、主细胞库（MCB）及工作细胞库（WCB）。在某种情况下，也可采用细胞种子及MCB二级管理，但须得到国务院药品监督管理部门的批准。•2、细胞库的管理•非生产用细胞应与生产用细胞严格分开存放。•冻存前的细胞活力应不低于90%，冻存后应取一定量的可代表冻存全过程的冻存管复苏细胞，复苏后细胞的活力应不低于80%。11（四）细胞检定•细胞检定主要包括以下几个方面：细胞鉴别、细菌、真菌检查、分支杆菌检查、支原体检查、外源因子和内源因子的检查、成瘤性/致瘤性检查等。必要时还须进行细胞生长特性、细胞染色体检查、细胞均一性及稳定性检查。•细胞库建立后应至少对MCB细胞及生产终末细胞（EOPC）进行一次全面检定。12细胞检定项目要求13二、连续传代细胞系的特殊要求•1、用于生产的细胞代次用于生产的传代细胞系，代次应有一定限制。用于生物制品生产的细胞最高限定代次须经批准。2、生产过程中的细胞检查（同前）14三、人二倍细胞株的特殊要求•1、染色体检查•2、无菌检查•3、支原体检查•4、病毒检查•5、成瘤性检查•6、生产过程中的细胞检查（1）染色体检查（2）细胞鉴别实验（3）无菌检查（4）支原体检查（5）对照细胞外源病毒因子检测15四、重组细胞的特殊要求•1、细胞基质的稳定性生产者须具有该细胞用于生产的目的基因的稳定性资料，稳定性检测的项目及方法依据产品的特性确定，对于细胞基质来说，稳定性的分析是保证MCB/WCB与EOPC之间的一致性，包括：重组细胞的遗传稳定性（如插入基因拷贝数、插入染色体位点、插入基因的序列等）、目的基因表达稳定性、目的产品持续生产的稳定性，以及一定条件下保存时细胞生产目的产品能力的稳定性等资料。2、细胞鉴别试验16五、原代细胞的要求•（一）动物组织来源和其他材料•（二）原代细胞培养物的检查1、细胞形态检查2、特定病毒检查3、对照细胞检查17六、检定用细胞的要求•（一）细胞资料•1、检定用细胞应具有明确的合法来源，及相关的来源证明资料。•2、如使用传代细胞系/株，应建立细胞库体系，即主细胞库及工作细胞库，如细胞使用量较少，可建立单一细胞库。各制品应根据其特性以及保证检测结果的可靠性基础上，在该细胞允许的最高限定代次内，规定相应检定用细胞的代次范围（应在确定细胞代次的±1代范围内）。检定时从工作细胞库复苏细胞后，不能再回冻。•3、应详细记录检定用细胞建库的过程，包括细胞培养所用原材料的来源、批号，细胞生长液的配制方法、使用浓度等，记录细胞的传代及冻存过程，并建立细胞冻存及使用台账。18（二）细胞检定应至少进行一下1-3项检定，根据检定用细胞用途的不同，还应进行一下其他相关项目的检定。1、细胞鉴别试验2、无菌检查3、支原体检查4、外援病毒污染检查5、其他检测①成瘤性检查②病毒敏感性检查③细胞功能检查1920