病原微生物的检测方法研究进展

病原微生物的检测方法研究进展摘要：本文章主要对病原微生物的检测方法研究进展进行综述，具体介绍食品、环境方面的病原微生物的检测方法研究进展。以及本人对病原微生物检测方法发展的一些看法及体会。关键词：病原微生物检测方法PCR技术食品检测Abstract:Thisarticlemainlysummarizedresearchprogressondetectionmethodsofpathogenicmicroorganism，Specificintroductionfood,environmentresearchprogressofmethodsusedforthedetectionofpathogenicmicroorganisms.AndIhavesomeviewsonthedevelopmentofpathogenicmicroorganismdetectionmethodandexperienceKeywords:PathogenicmicroorganismsDetectionmethodPCRtechnologyFoodtesting病原微生物是指可以侵犯人体，引起感染甚至传染病的微生物，或称病原体。病原体中，以细菌和病毒的危害性最大。病原微生物指朊毒体、寄生虫（原虫、蠕虫、医学昆虫）、真菌、细菌、螺旋体、支原体、立克次体、衣原体、病毒。本文主要介绍的是在食品、环境、医药方面病原微生物检测方法的应用及研究，目的在于了解病原微生物的检测方法及其研究进展，增加生物学科普知识。1病原微生物概述1.1病原微生物概念病原微生物是指可以侵犯人体，引起感染甚至传染病的微生物，或称病原体。病原体中，以细菌和病毒的危害性最大。病原微生物指朊毒体、寄生虫（原虫、蠕虫、医学昆虫）、真菌、细菌、螺旋体、支原体、立克次体、衣原体、病毒。1.2病原微生物检测方法病原微生物的检测方法包括以下几类：1）生物化学方法2）血清免疫学方法3）分子生物学方法4）分子生物学与免疫学相结合的方法5）用生物传感器进行病原微生物的鉴定6）生物芯片7）蛋白质指纹图谱技术8）LANP技术2病原微生物的检测方法在食品方面的应用及研究进展食品病原微生物传统检验方法步骤非常繁琐，需要耗费大量人力、物力，且检测周期长灵敏度较低，难以满足国内外对食品检测的要求。这里介绍几种效益高且易操作现代食品病原微生物的检测方法。2.1微生物培养法微生物快速检测方法始于80年代早期，主要根据各种菌体的理化特性进行分析。而后不断出现改进方法，通过加入抑制剂、指标剂或者荧光物质等或借助快速的预处理方法缩短增菌时间，合并检验步骤，使培养和鉴定一步完成，从而达到快速检测的目的。常用的检测方法有1）疏水网膜法2）葡萄糖苷酶荧光法3）Oxoid沙门氏菌快速检测法。微生物培养法是食品检测中较常用切简单易行的食品检测方法。2.2免疫学方法免疫学法在食品检测中应用最为广泛，此技术是以抗原抗体的特异性反应为基础，通过病原物刺激机体产生免疫球蛋白建立的。根据检测技术的不同可分为免疫扩散法、凝集反应、酶联免疫吸附法和探针检测法。免疫学方法具有高度的特异性和灵敏性，且易操作，价格便宜，所以在食品的检测中是最为常用的方法。2.3分子生物学方法分子生物学方法可针对病原微生物的核酸分子特征进行鉴定。主要分为3种：1）核酸分子杂交2）基因重组法3）PCR技术。核酸分子杂交是有特异探针识别特异碱基序列实现杂交；基因重组法无需对待测菌株进行纯培养，而且无需什么特殊的试剂和设备简便易行，所以是一种很有前途的食品鉴定方法。PCP技术是一种核酸体外扩增技术，该方法灵敏度高，效果好，往往在很短时间内就能检测出食品中的病原微生物。3病原微生物的检测方法在环境方面的应用及研究进展（主要介绍水环境）当今水污染隐患令人担忧，世界卫生组织估计全球约有88%腹泻类疾病是由饮用水被病原微生物污染引起的。饮用含有病原微生物的水可以引发多种疾病，如霍乱、军团菌病、肺炎等等。1993年美国密尔沃基市因为应用水中包含隐孢子虫菌导致100人死亡。所以水污染的防治与检测迫在眉睫！下面是目前比较前沿的检测水污染的方法。3.1聚合酶链反应技术(PCR技术)PCR技术是当今较流行的分子检测技术。虽然PCR检测技术应用广泛，但是缺点是稳定性差，容易产生非特异性产物且水体出现假阳性现象较高。所以目前出现了很多改进的PCR技术，缩小其缺点，使其可信度变高，特异性更好。以下是利用相关PCR技术对水中病原微生物的报道，见表13.2RPA检测技术（Rationmetricpre-rRNAanalysis,RPA）PCR检测方法缺点很明显，稳定性差，容易产生非特异性产物。检测水体假阳性的概率相当高，可信度不高。RPA检测技术与PCR检测技术相比，RPA用于检测细菌在受到营养刺激后pre-rRNA的变化情况从而检测水中活的病原株。减少PCR检测技术中假阳性的干扰。同时该方法也避免了了由于试验过程中引入的DNA污染或者由于PCR试剂造成的污染的影响。3.3DNA芯片检测技术DNA芯片检测水中病原微生物是生物技术检测法中的新突破。DNA芯片也称DNA微阵列，是利用机械系统将DNA探针阵列分布于玻璃或硅基片上形成多个点，可在同一时间对大量样品进行高通量分析的技术。利用此技术检测水污染的流程图见图1芯片检测法的最大优点是快速，特别是是在水源处可能污染的情况下，尽快得到检测结果尤为重要。4本人的对病原微生物检测方法研究进展的一些看法及体会病原微生物对我们人类的危害极大，检测与防治病原微生物是一项重要的任务。所以我认为对于病原微生物的检测方法的研究应被鼓励，在未来希望有更优秀的检测方法出现，帮助人类去认识并且消灭病原微生物，让人类远离病原微生物的侵害，使人们的生活更加和谐与健康。参考文献矢野郁也内山竹彦病原微生物学M东京化学同人2002年8月李淑英李燕水中病原微生物分子检测技术研究进展J生物技术通报2012年第一期王辉张伟食品中病原微生物快速检测技术与研究进展J食品研究与开发期刊2012年第4期宋宏新马娜食品中病原微生物检测方法研究进展J生物技术通报2010年第4期汪长中吴璇病原微生物检测技术进展M安徽医药2013年3月李维彬郭从文病原微生物检测技术研究进展J生物技术通报2006年7月