Fortebio-分子相互作用仪讲座PPT

Octet生物分子相互作用系统ForteBioInc.•2004年由华人物理学家创立,2009年开始在中国销售•专利的生物膜干涉Bio-LayerInterferometry(BLI)技术•总部在美国硅谷•全球超过350个用户，中国14个用户•全球第二的专业非标记技术厂商–SDi2010MarketReportsurvey–成长最快速的非标记技术公司•公司发展的远景：成为每个实验室都能拥有的分子互作系统专业的服务•在中国有2名硬件工程师，3名应用工程师•除了提供批量生产的生物传感器以外，还可以为用户定制传感器•提供实验方法开发和优化服务国内用户名单军事医学科学院2台NovoNordisc中国研发中心中国生物制品药品检定所神州细胞工程有限公司中科院武汉病毒所厦门大学天津商业大学上海药明康德新药开发有限公司GSK中国研发中心Novartis中国研发中心上海旭华生物科技有限公司江苏太平洋美诺克生物药业有限公司江苏泰康生物医药有限公司实时检测，非标记的生物分子互作检测平台Octet可分析多种生物分子间的相互作用CellsBacteriaVirusIgMIgAIgG,IgD,IgEAntibodyFragmentsProteinsPeptidesNucleotides(DNA)SmallMoleculesAtoms200nm1000nm0.1nm11,000100,0001,000,00075nm150MWSize7nm1nmBacteriaVirusAntibody-AntigenReceptor-LigandDNA-DNADNA-ProteinAntibodyFragment-AntigenAntigen–FusionProteinAntibody-PeptideMultipleAntibodyPairingsAntibody-SmallMoleculeProtein-SmallMoleculeCurrentOctetassayswithinbluearea亲和力测定•BindingKD•Onandoffrates•Rankorder结合特异性•Yes/Nokineticscreening•Epitopebinning/mapping蛋白质浓度定量（混合物）•Picogramtomilligramdynamicrange•ContaminanttestingOctet系统可提供的数据Octet系统和特点Octet系统的优点•更高的通量,更快的实验流程•8-16个样品同时检测，是非标记技术中通量最高的•15-30分钟可以完成96个样品的分析•没有溶液控制系统，不需要清洗和维护流路，直接开始读取数据•操作简单•适应多用户的情况，经过半天的培训就可以操作和使用•不需要特别优化实验条件，传感器是抛弃式的•更宽的应用范围•直接检测粗制的样品，甚至是样品中存在不溶解的成分•耐受各种溶液环境，只有结合到传感器表面的分子才会被检测•病毒颗粒等大分子样品也能得到动力学结果•检测共价键结合的样品•更低使用和维护的成本•相对其他的非标记检测系统，耗材的成本低•系统稳定，未来的使用和维护成本也低传感器种类12种ApplicationSensorTypeRegenerationQuantitationAnti-HumanIgGFcAnti-MurineIgG(Fab’)2ProteinA/G/LStreptavidin(SA)Anti-Penta-HIS(HIS)YesYesYesYesKineticsStreptavidin(SA)SuperStreptavidin(SSA)AmineReactive(AR)Aminopropylsilane(APS)Anti-hIgGFcCaptureSurface(AHC)Anti-mouseCaptureSurfaceYesYesYesYesYesKitsDipandReadImmunogenicityKitDipandReadResidualProteinADetectionKitNoNo可以根据用户的应用设计传感器为目前种类最多的供应商传感器可再生使用ADAIDCycle#nmShiftMab#210.7049Mab#220.7435Mab#230.7431Mab#240.7822Mab#250.7702Mab#260.6712Mab#270.7221Mab#280.7654Mab#290.7515Mab#2100.7729Streptavidin(SA)sensor表面固定了生物素化的蛋白质药物10%的猴血清样品，含有抗该药物的抗体可同时平行优化8种传感器再生条件每个传感器表面结合抗体以后进行再生，如此反复10次由于8个传感器上的数据可以同时检测，因此3分钟内就可以得到8个数据最终每个样品的检测成本仅为4元人民币Avg.nmShift0.7427StDev0.0346%CV4.7%Regenerationsolution=1mMHClOctet产品简介OctetInstruments•5种型号-OctetQK,OctetQke,OctetRED,OctetQK384,OctetRED384•使用通用的样品板(96and384well)•没有流路系统•样品经过检测后，仍然留在原处，可以回收再使用Biosensors•浸入样品即检测，1至16个样品可以同时检测•10种传感器可供选择，分析不同种类的样品•传感器为抛弃式设计，既可以检测共价键结合的样品也可以再生使用Softwareandcomputer•常用实验方法已经预制在模板中•不需要单独购买软件Validationoptions•经过验证,提供IQOQ服务,符合美国FDACFRPart11标准OctetSystemSpecificationsOctetQKOctetQKeOctetQK384OctetRED96OctetRED384MolecularWeightRange10,000D5000D5000D150D150DDataAcquisitionRate0.6Hz0.3Hzor0.6Hz0.3Hzor0.6Hz2,5,or10Hz2,5,or10Hz#Spectrometers112816#ChannelsperRead1-81-81-161-81-16MicroplatePositions11212BiosensorRerackingNoYesYesYesYesRobotCompatibleNoNoYesNoYesMicroplateFormats96,96HA96,96HA96/96HA384/384TW9696/96HA384/384TWMinimumSampleVolume80µLperwell80µLperwell40µLperwell180µLperwell40µLperwellAffinityrange(approximate)0.1mMto0.1nM0.1mMto0.1nM0.1mMto0.1nM1mMto10pM1mMto10pMSampleUsageNon-destructiveandrecoverableTemperatureControl4°Caboveambientto40°C21CFRPart11ComplianceAvailableasoptionforallsystems96HA96wellmicroplatewithhalf-areawellsize384TWForteBio384tilted-wellmicroplateOctet384系统的优点兼容96孔板和384孔板•更高的通量,更少的样品消耗•最小体积只要40ul16通道同时检测，让所需实验时间更短两个样品板位置•更多的实验方案•一次连续分析更多样品全自动化解决方案•可与多种液体工作站连接Octet全自动功能•Automateddoorandplatestage•Workswitharticulatedarmandtrack-styleroboticsystems•Platestagepresentsthebiosensortray,sampleandreagentplatesforrobot•OctetsoftwarehasautomationhooksenabledtointeractwithrobotsoftwareOctet“96”系统的内部自动化的传感器移动样品一直保留在微孔板内，是不破坏样品的检测“浸入”式检测，检测快8通道同时检测，一次可检测多个样品Octet384系统的内部两个微孔板的位置，一次可连续分析更多的样品每个微孔板独立使用，即可以是96孔板，也可以是384孔板。即可以同时使用一块96孔板+384孔板根据实验步骤设定将传感器在样品板的不同位置移动当生物分子结合到传感器表面就形成了一层生物膜生物膜对透过传感器的光的波形造成干涉现象干涉现象以相位移动的方式被检测，从而可以检测结合到传感器分子数量的变化生物膜光干涉技术Bio-LayerInterferometry(BLI)Y=Y0+Ae-kd*tY=Y0+A(1-e-kobs*t)kobs–kd[ConcAg(M)]ka=Ab+AgComplexkakdKD=kdkaForsimple1:1binding:ka=rateofassociationor“on-rate”kd=rateofdisassociationor“off-rate”Non-linearcurvefitofdata生物分子结合动力学BufferLigand-BiotinProteinofInterestBinding(nm)TimeBaselineLoadingBaselineAssociationDissociation•8-16个样品可以被同时平行检测•检测数据被事实记录•实验方法可根据用户的要求来设计•动力学和亲和力由软件分析得到OctetBiosensorsOctet系统测定动力学的工作流程OctetRED进行蛋白质浓度测定的工作流程StandardsTestSamplesBinding(nm)Time(sec)BindingRateConcentration•利用标准品在不同浓度时结合速率的差异来定量样品的浓度•15-30分钟可以分析各样品•标准曲线可以重复使用•病毒颗粒等其他样品也可定量OctetBiosensors120Octet软件•可灵活输出各种格式，Excel表，JEPG格式等•动力学分析直接得到ka,kdandKD结果•浓度分析直接得到，ug/ml,ng/ml等浓度计算结果051015202530354045502006200720082009YTD2010PublicationsCitingOctetPlatformPublicationsandPatentsPeer-ReviewedPublications快速增长的文献发表数量从2005年底有第一个用户，到2010年有超过100多篇文献的发表MultipleSystemsatTopPharmaandBiotechOctetAcademicandGovernmentCustomersCenterforDiseaseControlEmoryUniversityErasmusMedicalCenterFachhochschuleNordwestschweizBaselFloridaGulfCoastUniversityInstituteofBasicMedicalSciencesAcademyInternationalAIDSVaccineInstituteJeonnamInstituteKagoshimaUniversityKennesawStateUniversityKoreaUniversityNIHPennStateUniversityScrippsFloridaSt.JudeUniversityStanfordUniversityTexasA&MUniversityTUDarmstadtUniversitätWü