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第2课时实验操作及实验结果题型一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是()A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板答案C解析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的一般步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。2．在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的过程中加入琼脂这一理想的凝固剂，下列关于琼脂的说法错误的是()A．不被所培养的微生物分解利用，对所培养的微生物无毒害作用B．在微生物生长温度范围内保持固体状态C．琼脂凝固点低，利于微生物的生长D．琼脂在灭菌过程中不会被破坏，透明度好，凝固力强答案C解析琼脂不会被微生物利用且对微生物无毒害作用，在灭菌过程中不会被破坏，透明度好，凝固力强，A、D正确；琼脂在水中加热至95℃时开始熔化，温度降至40℃时才开始凝固，微生物生长最适宜的温度范围一般为16～30℃，所以在微生物生长温度范围内保持固体状态，B正确；琼脂的凝固点相对于微生物生长的温度较高，一般不是微生物的营养成分，只起固化作用，对微生物的生长不会产生作用，C错误。3．下列叙述错误的是()A．右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞，为避免污染需放在酒精灯火焰附近B．倒平板整个过程应在火焰旁进行C．打开培养皿盖，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖D．为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置答案C解析右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞，为避免污染需放在酒精灯火焰附近，A正确；为了防止杂菌污染，倒平板整个过程应在火焰旁进行，B正确；操作方法为用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10～20mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，C错误；为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置，D正确。4．检验培养基是否被杂菌污染的最有效方法是()A．将未接种的培养基放在实验桌上培养B．将未接种的培养基放在窗台上培养C．将未接种的培养基放在恒温箱中培养D．将已接种的培养基放在恒温箱中培养答案C解析检验培养基有没有被杂菌污染，可将未接种的培养基放在恒温箱中培养。如果在培养过程中未接种的培养基上没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染；若未接种的培养基上有菌落生长，说明培养基被杂菌污染，C正确。5．下列关于制备牛肉膏蛋白胨培养基的叙述，错误的是()A．培养基应先调pH再进行灭菌B．培养基应先灭菌再分装到培养皿C．熔化琼脂时要不断用玻璃棒搅拌D．使用高压蒸汽灭菌锅时直接将灭菌锅密封加热答案D解析使用高压蒸汽灭菌锅时，应把灭菌锅内的水加热煮沸，将其中原有的冷空气彻底排出后，将锅密闭，继续加热使锅内气压逐步上升，D错误。题型二大肠杆菌的纯化6．下列依次表示倒平板、接种的位置以及平板划线法接种的路径的示意图，其中错误的是()答案D解析平板划线法除第一次划线外，每一次划线都从上一次划线的末端开始，D错误。7．下列有关平板划线操作的叙述，不正确的是()A．第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物B．除第一次划线外，每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上的菌种C．在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液D．划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者答案C解析在第二区域内划线时，接种环上的菌种来源于第一次划线的末端，C错误。8．有关稀释涂布平板法，叙述错误的是()A．首先将菌液进行一系列的梯度稀释B．然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面C．适宜条件下培养D．结果都可在培养基表面形成单个的菌落答案D解析稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养，A、B、C正确；在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，D错误。9．涂布平板操作需要用到()A．接种环、滴管、酒精灯B．接种环、酒精灯、移液管C．酒精灯、移液管、涂布器D．接种环、酒精灯、涂布器答案C解析涂布平板时，需要移液管将菌液进行一系列梯度稀释；需要用酒精灯对涂布器进行灼烧灭菌；进行涂布时，需用涂布器将菌液涂布均匀，该操作要在酒精灯的火焰旁进行。10．分离纯化大肠杆菌最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。下列有关这两种方法的叙述错误的是()A．均将大肠杆菌接种在固体培养基的表面B．获得的每个菌落均是由一个细菌繁殖而来的子细胞群C．都应在火焰附近进行操作，以防止杂菌污染D．稀释分散菌种的原理不同，均能达到分离纯化大肠杆菌的目的答案B解析用稀释涂布平板法时，如果稀释得当，在平板表面就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能是由一个细菌细胞繁殖形成的；平板划线中最后一次划线的末端处形成的菌落才是由单一的细胞或孢子繁殖形成，这种菌落才符合要求，但也存在两个或多个细胞聚集在一起形成一个菌落的情况，B错误。题型三菌种的保藏11．菌种保藏应该控制的条件是()①高温②低温③干燥④有光⑤隔绝空气⑥适当氧气A．①④⑥B．②③⑥C．①⑤⑥D．②③⑤答案D解析考虑不同类型微生物的保藏条件时，一定要从该微生物的代谢入手考虑，其保藏条件应该既不利于其代谢又不影响其生存。低温、干燥、缺氧等条件，抑制微生物的代谢作用，使其生命活动降低到极低的程度或处于休眠状态，从而延长菌种生命以及使菌种保持原有的性状，防止变异，②③⑤正确。12．以下关于菌种保藏的叙述错误的是()A．菌种保藏的目的是保持菌种的纯净B．固体斜面培养基可用于菌种的临时保藏C．菌种的长期保存一般采用甘油管藏的方法D．由于甘油管藏菌种在－20℃条件下保存，因此对甘油可不必灭菌答案D解析采用甘油管藏的方法保存菌种时，所用的甘油必须灭菌，D错误。13．请回答下列有关微生物培养与分离的问题：(1)微生物的培养都需要培养基，在配制固体培养基时加入的凝固剂一般是________。(2)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的一般流程包括：计算―→称量―→溶化―→A―→B上述流程中A代表____________，实验室中这个步骤常用的方法有______________________________；流程中B代表________________，该步骤进行的适宜温度是________℃左右。(3)某微生物纯化培养的结果如下图甲，在________(填图中编号)区域出现了单个菌落，产生每个菌落的最初细菌数目是________个，据图分析，在培养基上划线接种时，划线的顺序依次是________________(用编号表示)。某研究者接种培养后得到的平板如图乙所示，推测接种时可能的操作失误是______________。(4)将分离纯化的菌种进行临时保存时，可在低温下使用试管斜面保存，但该方法除保存时间短外，菌种还易____________________；若需较长时间保存菌种，可用的方法是______________。答案(1)琼脂(2)灭菌干热灭菌和高压蒸汽灭菌倒平板50(3)②1①―→③―→②涂布不均匀(4)被污染或产生变异甘油管藏法解析(1)琼脂是制备固体培养基最常用的凝固剂。(2)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的流程包括：计算―→称量―→溶化―→灭菌―→倒平板，因此流程中A表示灭菌，干热灭菌和高压蒸汽灭菌是实验室中常用的培养皿、培养基灭菌方法。流程中B代表倒平板，该步骤进行的适宜温度为50℃左右。(3)从图甲可知，②号区域出现了单个菌落；1个菌落由1个细菌繁殖形成；根据各区域菌落的多少可判断，划线的顺序依次是①―→③―→②。由图乙可知，菌落分布不均匀，推测接种时可能的操作失误是涂布不均匀。(4)试管斜面保存菌种，菌种易被污染或产生变异，若需较长时间保存菌种，可采用甘油管藏法。14．图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，回答相关问题：(1)图甲是利用____________法进行微生物接种，图乙是利用______________法进行微生物接种。这两种方法所用的接种工具分别是________和________；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是________和酒精消毒。(2)平板划线时，为保证微生物的数目随划线次数的增加而逐步减少，每次划线都要从__________________开始，平板划线结束后，最后一次划的线不能与第一次划的线________。(3)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？________________________。(4)下图是接种后培养的效果图解，其接种方法是________(填“图甲”或“图乙”)。(5)假设用图乙所示方法接种培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是什么？______________________________________。答案(1)平板划线稀释涂布平板接种环涂布器灼烧灭菌(2)上一次划线的末端相连(或相接、相交、交叉等)(3)火焰附近存在着无菌区域(4)图乙(5)稀释倍数不够，菌液的浓度太高解析(1)图甲和图乙分别是平板划线法和稀释涂布平板法进行微生物接种，这两种方法所用的接种工具分别是接种环和涂布器。(2)平板划线时，每次划线都要从上一次划线的末端开始，最后一次划线不能与第一次划线相连。(3)由于在酒精灯火焰附近存在着无菌区域，因此接种常在火焰附近进行。(4)培养基上的菌落分布均匀，接种方法为稀释涂布平板法。(5)采用稀释涂布平板法进行菌种分离时，稀释度要足够高，否则会使微生物不能分散成单个细胞。1．下列关于微生物培养基的叙述，错误的是()A．制备固体培养基，可以在液体培养基中加入凝固剂琼脂B．微生物在固体培养基表面生长形成的菌落，可以用肉眼观察到C．所有培养基都含有相同的水、碳源、氮源和无机盐等四类物质D．培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素答案C解析琼脂是凝固剂，对微生物无害，制备固体培养基时，可在液体培养基中加入琼脂，A正确；微生物在固体培养基上生长，可以形成肉眼可见的菌落，B正确；培养不同的微生物，所需配方存在差异，C错误；培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，D正确。2．下列有关微生物实验的叙述，不正确的是()A．获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染B．平板划线法操作完成后，培养基进行高压蒸汽灭菌，接种环进行灼烧灭菌C．分离不同的微生物要采用不同的稀释度D．观察菌落的特征可以用来进行菌种的鉴定答案B解析防止杂菌污染是获得纯净培养物的关键，A正确；平板划线法操作完成后，培养基不能灭菌处理，B错误；不同微生物在环境中的数量是不同的，因此，分离不同的微生物应采用不同的稀释度，C正确；不同菌种形成的菌落特征不同，因此，通过观察菌落的特征可以鉴定菌种，D正确。3．下列关于配制培养基的叙述，正确的是()A．配制固体培养基必须加入琼脂B．培养细菌时需将pH调至中性或微酸性C．培养自生固氮菌的培养基中不需添加氮源D．发酵工程一般用半固体培养基或液体培养基答案C解析在配制固体培养基时，可加入琼脂作为凝固剂，但琼脂并不是唯一的凝固剂，A错误；培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，B错误；发酵工程应用于生产实践一般用液体发酵，可以连续培养，提高产量，D错误；自生固氮菌能够将空气中的N2还原为NH3，因此培养基中不需加氮源，C正确。4．在微生物的实验室培养中，下列哪项操作不需要在无菌条件下进行()A．配制培养基B．倒平板C．接种D．培养答案A解析配制培养基时不需要在无菌条件下进行，因为配制后的培养基需要进行高压蒸汽灭菌，A符合题意。5．关于牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备，叙述错误的是()A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板D．等平板冷却凝固约5～10min后将平板倒过来放置答案A解析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基时，其操作顺序为计算→称量→溶化→灭菌→倒平板，A错误；由于牛肉膏比较黏稠，称量时可连同称量纸一同放入烧杯，B正确；待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板，C正确；平板冷凝后，应将