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课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数题型一选择培养基的作用及配制方法1．从混杂的微生物群体中选择优良的单一纯种的方法不包括()A．根据微生物对碳源需求的差别，使用含不同碳源的培养基B．根据微生物对特殊营养物质的需求，在培养基中增减不同的特殊营养物质C．根据微生物对抗生素敏感性的差异，在培养基中加入不同的抗生素D．根据微生物耐热性的不同，利用高温、高压消灭不需要的杂菌答案D解析利用高温、高压消灭不需要的杂菌的同时也会将需要筛选的微生物杀死，因此不能通过该方法得到目的微生物，D错误。2．某混合样品中微生物R含量极少，要得到大量的R，比较理想的方法是采用()A．天然培养基B．稀释涂布平板法C．利用适合R生长但同时抑制或阻止其他种类微生物生长的选择培养基D．用显微镜直接观察、寻找，再培养答案C解析在培养过程中可以通过选择该微生物能生长繁殖而抑制其他微生物生长繁殖的培养基，使微生物R能在该培养基上成为优势菌种而大量繁殖，C正确。3．可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是()A．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂B．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂C．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂D．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂答案A解析分解尿素的细菌与其他细菌的重要区别是分解尿素的细菌能以尿素为氮源，该细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红，我们可以准确地鉴定出该种细菌能够分解尿素。题型二菌落数目的统计方法4．下列不属于菌种计数方法的是()A．平板划线法B．稀释涂布平板法C．镜检法D．滤膜法答案A解析平板划线法可用于菌种的纯化和分离，不能用于计数，A错误；稀释涂布平板法常用来统计样品中活菌数目，镜检法也是测定微生物数量的常用方法，B、C正确；滤膜法常用于检测水样中大肠杆菌数目，通常是将已知体积的水样过滤后，将滤膜放到伊红美蓝培养基上培养，根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌数量，D正确。5．下列关于统计菌落数目的方法的叙述，不正确的是()A．采用平板计数法获得的菌落数往往少于实际的活菌数B．当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落C．为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数D．在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数在30～300间且差别不大，则应以它们的平均值作为统计结果答案C解析当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，A正确；当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落，B正确；一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，密度过大会不好计数，影响结果的准确性，C错误；涂布三个平板，作为重复组，若三个平板统计的菌落数在30～300间且相差不大，取其平均值作为统计结果能增强实验的说服力与准确性，D正确。题型三细菌分离与计数的实验设计6．下列关于测定土壤中微生物的数量，正确的叙述是()A．一般选用103～107倍的稀释液分别涂布B．测定放线菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释C．测定真菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释D．当第一次测量某种细菌的数量，可以将101～107倍的稀释液分别涂布到平板上培养答案B解析由于土壤中各类微生物的数量不同，在进行分离与计数时，就需要按照不同的稀释度分别进行涂布，A错误；测定放线菌的数量，一般选用103、104、105倍的稀释液进行平板培养，B正确；测定真菌的数量，一般选用102、103、104倍稀释，C错误；当第一次测量某种细菌的数量，可将稀释的范围放宽点，将103～107倍的稀释液分别涂布到平板上培养，D错误。7．在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验时，甲组实验用氮源只含尿素的培养基，乙组实验用氮源除含尿素外还含硝酸盐的培养基，其他成分都相同，在相同条件下操作、培养与观察，则乙组实验属于()A．空白对照B．自身对照C．相互对照D．条件对照答案D解析本实验甲组为实验组，乙组为对照组，给实验组某种处理，给对照组另一条件的处理，为条件对照。8．关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验中，下列操作需要在酒精灯火焰旁进行的一组是()①土壤取样②称取土壤③稀释土壤溶液④涂布平板⑤微生物的培养A．①②③④⑤B．②③④⑤C．③④⑤D．②③④答案D解析土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验需进行无菌操作，其中①土壤取样是在室外进行，⑤微生物的培养是在恒温箱中进行，其余过程都需要在酒精灯火焰旁进行，D正确。9．在“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”课题中，以土壤中的细菌为研究对象，要达到的目的是()①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌②从土壤中分离出能够分解氨的细菌③统计每克土壤样品中究竟含有多少分解尿素的细菌④统计所取土壤样品中究竟含有多少分解尿素的细菌A．①③B．②④C．①②D．③④答案A解析从土壤中分离分解尿素的细菌并对其计数，统计的是每克土壤样品中含多少分解尿素的细菌，用公式“每克样品中菌株数＝(C/V)×M”进行推测，其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数，①③正确。10．下列属于菌落特征的是()①菌落的形状②菌落的大小③菌落的多少④隆起程度⑤颜色⑥有无荚膜A．①②③④B．①②④⑤C．②③④⑥D．①②③④⑤⑥答案B解析菌落特征包括菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等，有无荚膜是单个细菌细胞的特征，不是菌落的特征。11．在做“分离能分解尿素的细菌”的实验时，A同学从对应稀释倍数为106倍的培养基中筛选出大约150个菌落，而其他同学在同样的稀释倍数下的培养基中只筛选出大约50个菌落。A同学的结果产生的原因可能有()①土样不同②培养基被污染③操作失误④没有设置对照A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④答案A解析A同学比其他同学所得的实验结果的数据大许多，可能是由于选取的土样不同、培养基灭菌不彻底或操作过程中培养基被污染，也可能是操作失误造成的，如所配制的培养基中混入其他含氮物质、稀释度不够准确等。12．欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，下列实验操作中不正确的是()A．将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释B．同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板C．可将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照D．用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌答案D解析将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释，以便于统计样品中活菌的数目，A正确；为避免偶然误差对实验结果的影响，同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板，B正确；生物实验要遵循对照原则，故要将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照，排除非测试因素对实验结果的影响，可使结论更有说服力，C正确；在以尿素为唯一氮源的选择培养基中加入酚红指示剂可筛选出分解尿素的细菌，D错误。13．图表所示配方的培养基可筛选某种细菌，该细菌可以在该培养基上生长、形成菌落。请回答下列问题：KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000mL(1)该培养基可筛选的细菌是____________，理由是____________________。(2)如果从土壤中获取的样本含该细菌的数量较少，则需要对样本中的细菌进行扩大培养，____________(填“能”或“不能”)用表格中的培养基，因为____________________________________________________。(3)如果对该细菌进行计数，则将得到的细菌用____________法接种，为了确定该细菌确实属于所要分离的细菌，需要在培养基中加入____________(试剂)。(4)另一种接种细菌的方法是____________，该方法操作时，每一次划线前都要进行灼烧，目的是__________________________。答案(1)尿素分解菌培养基中尿素是唯一的氮源(2)不能扩大培养应该用液体培养基，表格配方中含琼脂，是固体培养基(3)稀释涂布平板酚红指示剂(4)平板划线法杀死残留在接种环上的细菌解析(1)根据表格分析，培养基中尿素是唯一的氮源，说明该培养基筛选的细菌是尿素分解菌。(2)图表所示培养基中含有琼脂，说明是固体培养基，不能用于菌种的扩大培养，扩大培养应该用液体培养基。(3)微生物常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，其中后者可以用于菌种的计数；以尿素为唯一氮源且含酚红指示剂的培养基可以选择和鉴别尿素分解菌。(4)利用平板划线法接种时，每一次划线前都要进行灼烧，目的是杀死残留在接种环上的细菌。14．下图是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程。(1)图中选择培养基应以________为唯一氮源；鉴别培养基还需添加________作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成________色。(2)在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。该过程采取的接种方法是______________________，每克土壤样品中的细菌数量为________×108个；与血细胞计数板相比，此计数方法测得的细菌数目较________。(3)在实验中，下列材料或用具需要灭菌的是________，需要消毒的是________。(填序号)①培养细菌用的培养基与培养皿②玻棒、试管、锥形瓶和吸管③实验操作者的双手(4)实验结束后，使用过的培养基应该进行________处理后，才能倒掉。答案(1)尿素酚红红(2)稀释涂布平板法1.75少(3)①②③(4)灭菌解析(1)脲酶能够催化尿素分解为氨，故图中选择培养基应以尿素为唯一氮源，鉴别培养基还需添加酚红作指示剂。由于尿素被脲酶分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，从而使酚红指示剂变红。(2)用于统计细菌菌落数的常用方法是稀释涂布平板法，统计的菌落数应介于30～300之间，故选择细菌菌落数为156、178和191的平板计数。每克该土壤样品中的菌落数对应的应该是每毫升菌液中的细菌数目，所以每克该土壤样品中的菌落数为(156＋178＋191)÷3÷0.1×105＝1.75×108(个)。由于两个或多个细菌连接在一起时，往往统计的是一个菌落，此外，稀释涂布平板法统计的是活菌数，而血细胞计数板统计的是细菌总数，所以用此计数方法测得的细菌数较少。(3)在实验中，①培养细菌用的培养基与培养皿和②玻棒、试管、锥形瓶、吸管需要灭菌，③实验操作者的双手需要消毒。(4)为了防止污染环境，实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理后才能倒掉。1．对表层土壤中自生固氮菌的分离采取的原理(方法)是()A．依据自生固氮菌的生长繁殖不需要氮源B．依据不同微生物生长繁殖所需pH不同C．依据不同微生物生长繁殖所需温度条件不同D．依据不同微生物代谢类型不同答案A解析在无氮培养基上只有固氮菌能正常生长繁殖，可根据此特点来分离自生固氮菌，A正确。2.在光亮处用同一种培养液分别培养单细胞绿藻和单细胞酵母菌，其结果如图所示(甲为绿藻，乙为酵母菌)。造成这种现象的原因是()A．培养液中缺少无机盐B．培养液中氧气含量太高C．培养液中有机成分少D．培养液中不含二氧化碳答案C解析酵母菌为异养型生物，需直接摄取有机物，而绿藻是植物，可以进行光合作用合成有机物，所以在培养液中酵母菌最终被淘汰说明培养液中有机成分少，C正确。3．如图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的过程示意图，有关叙述错误的是()A．在配制步骤②、③所用的培养基时，应先调pH后高压蒸汽灭菌B．步骤③纯化分解尿素细菌的原理是将聚集的细菌分散，可以获得单细胞菌落C．步骤③采用稀释涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素D．步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种，比较细菌分解尿素的能力答案C解析在配制步骤②、③