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[基础对点]知识点一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.在培养基的配制过程中，具体有如下步骤，其正确顺序为()①溶化②调pH③加棉塞④包扎⑤分装⑥称量A．①②⑥⑤③④B．⑥①②⑤③④C．⑥①②⑤④③D．①②⑤④⑥③答案B解析上述步骤中，培养基的配制顺序为称量→溶化→调pH→分装→加棉塞→包扎，B正确。2．下列有关倒平板操作的叙述，错误的是()A．将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上B．使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰C．将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌面上D．等待平板冷却凝固后需要倒过来放置答案C解析整个倒平板过程要防止外来杂菌的入侵，因此灭过菌的培养皿应放在火焰旁，A正确；打开的锥形瓶瓶口应迅速通过火焰，B正确；培养皿应打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不能将培养皿盖完全打开，C错误；平板冷却凝固后需要倒过来放置，D正确。3．下列关于制备牛肉膏蛋白胨培养基的叙述，错误的是()A．培养基应先调pH再进行灭菌B．培养基应先灭菌再分装到培养皿C．熔化琼脂时要不断用玻璃棒搅拌D．使用高压蒸汽灭菌锅时直接将灭菌锅密封加热答案D解析把灭菌锅内的水加热煮沸，将其中原有的冷空气彻底排出后，将锅密闭，继续加热使锅内气压逐步上升。知识点二纯化大肠杆菌4.下列有关平板划线接种法的操作错误的是()A．将接种环放在火焰上灼烧B．将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液C．沾取菌液和划线要在火焰旁进行D．接种环划线要将最后一区的划线与第一区的划线相连答案D解析为了避免杂菌污染，沾取菌液和划线要在火焰旁进行，C正确；每次划线之前都需灼烧灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环，A正确；灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高，杀死菌种，B正确；在平板划线时不要将最后一区的划线与第一区相连，D错误。5．如图为纯化大肠杆菌的一个操作环节，下列相关叙述中，错误的是()A．该操作步骤是接种，方法是平板划线法B．除第一次划线外，以后的每一次划线的起点是上一次划线的末端C．图中细菌密度最小的是5处D．每次划线前要用酒精灯灼烧接种环，接着进行下次划线答案D解析每次划线前都要灼烧接种环灭菌，然后等其冷却后进行下次划线，D错误。6．稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法。下列相关叙述错误的是()A．操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释B．需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面C．不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个菌落D．操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理答案C解析若菌液浓度过大，形成的菌落连在一起，得不到单个的菌落，C错误。7．下图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，据图分析不正确的是()A．获得图A效果的接种方法是稀释涂布平板法B．获得图B效果的接种方法是平板划线法C．若在纯化土壤细菌时菌液浓度过高，培养基上的菌落可能会连成一片D．在接种前要对培养基进行消毒处理答案D解析在接种前要对培养基进行高压蒸汽灭菌处理，D错误。8．将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱的目的是()A．对比观察培养基有没有被微生物利用B．对比分析培养基是否被杂菌污染C．没必要放入未接种的培养基D．为了下次接种时再使用答案B解析对未接种的培养基进行培养，起到对照作用，可确定培养基是否被杂菌污染，B正确。9．利用稀释涂布平板法纯化的大肠杆菌，经培养后发现培养基上出现了多种菌落，不可能的原因是()A．培养基制备过程中被杂菌污染B．接种过程中，无菌操作不符合要求C．系列稀释时，无菌操作不符合要求D．大肠杆菌的种类不同答案D解析大肠杆菌培养基中出现了多种菌落，说明污染了杂菌，杂菌可能来自培养基，也可能是因为操作过程中无菌操作不符合要求，A、B、C正确；大肠杆菌就是一种类型的细菌，因此不会导致培养基上出现多种菌落，D错误。知识点三菌种保藏10.为了保持菌种的纯净需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是()A．对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法B．临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上C．临时保藏菌种容易被污染或产生变异D．对于需要长期保存的菌种，可以采用低温4℃保藏的方法答案D解析低温4℃保藏属于临时保藏的方法，而对于需要长期保存的菌种，需放在－20℃的冷冻箱中保存，D错误。[能力提升]11．做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是()A．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C．为了防止污染，接种环经火焰后应趁热快速挑取菌落D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上答案D解析高压灭菌加热结束，等待压力表指针回到零后，才能开启锅盖，不能打开放气阀使压力表指针回到零，A错误；倒平板过程中培养皿的皿盖打开一个稍大于瓶口的缝隙即可，B错误；接种环火焰上灼烧后，待冷却后才可以快速挑取菌落，C错误；用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上，D正确。12.下图是实验室使用某种接种方法在培养基上培养某种微生物的结果，相关说法错误的是()A．该图最可能是用稀释涂布平板法进行接种的B．在操作时，为防止杂菌污染，需进行严格的消毒和灭菌C．恒温培养箱中培养时需要将平板倒置D．该接种方法常用于微生物的分离纯化答案A解析培养基上微生物的分布有疏有密，应为平板划线法接种，该接种方法常用于微生物的分离纯化，A错误，D正确；在操作时，为防止杂菌污染，应对培养基和接种针等进行灭菌，对操作空间、衣着和手进行消毒，B正确；恒温培养箱中培养时需要将平板倒置，防止冷凝水滴在培养基上，C正确。13．科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白，这种蛋白质具有极强的抗菌能力，受到研究者重视。(1)可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白质的抗菌特性。抗菌实验中所用培养基中的牛肉膏和蛋白胨主要为细菌生长提供________和________。(2)分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量菌液。培养一定时间后，比较两种培养基中菌落的________，确定该蛋白质的抗菌效果。(3)细菌培养常用的接种方法有________和________________。实验结束后，对使用过的培养基应进行________处理。答案(1)碳源氮源(2)数量和大小(3)平板划线法稀释涂布平板法灭菌解析(1)牛肉膏和蛋白胨都是天然培养基成分，含有丰富的蛋白质、糖类等营养成分，可以为微生物的生长提供碳源和氮源以及生长因子。(2)通过对比加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中细菌菌落的数量和大小，确定该蛋白质的抗菌效果。(3)在培养细菌时，往往采用平板划线法和稀释涂布平板法进行接种；操作过程中用完的培养基都要进行灭菌处理，以防止污染环境和对人造成感染。14．下表是培养某微生物的培养基的配方，请回答下列问题：试剂牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂加水定容至用量5g10g5g20g1000mL(1)培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、碳源、________和无机盐。上述培养基配方中能充当碳源的成分是____________________。培养基配制完成以后，一般还要调节pH并对培养基进行________处理。(2)微生物在生长过程中对各种成分的需要量不同，配制培养基时各成分要有合适的________。在烧杯中加入琼脂加热时要不停地________，防止______________________。(3)将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后，若干个试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入________________中灭菌，压力为________kPa，温度为________，时间为________。灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力自然降到0时，将试管取出。如果棉塞上沾有培养基，此试管应________。(4)使用高压蒸汽灭菌锅时应注意，先向锅内倒入________。把锅内水加热煮沸并将其中原有冷空气彻底排出后，将锅密闭。(5)从一支试管向另一支试管接种时应注意，接种环要在酒精灯________(填“内”或“外”)焰灭菌，并且待接种环________后沾取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近。将接种的试管在适温下培养，长成菌落后放入________℃冰箱中保藏。答案(1)氮源蛋白胨和牛肉膏灭菌(2)比例搅拌琼脂糊底引起烧杯破裂(3)高压蒸汽灭菌锅100121℃15～30min废弃(4)适量水(5)外冷却4解析(1)培养基中一般都含有水、无机盐、碳源、氮源。培养基配制完成后要调pH和灭菌。牛肉膏、蛋白胨中含碳元素，可作为有机碳源。(2)在配制培养基时营养要协调，按所培养微生物对各种成分的需求确定其成分及比例；在加入琼脂后，要不断搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。(3)培养基的灭菌应用高压蒸汽灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃条件下，灭菌15～30min。若棉塞上沾有培养基，易被杂菌污染，应废弃。(4)高压蒸汽灭菌锅操作步骤为先向锅内倒入水，加热煮沸，将冷空气排出，将锅密闭，继续加热使锅内气压和温度上升到需要的程度。(5)酒精灯外焰温度高，灭菌效果好。灼烧后待冷却再沾取菌种，否则会烫死菌种造成实验失败。15．下图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请回答相关问题：(1)图甲是利用________法进行微生物接种，图乙是利用________________法进行微生物接种。这两种方法所用的接种工具分别是________和________；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是________和酒精消毒。(2)平板划线时，为保证微生物的数目随划线次数的增加而逐步减少，每次划线都要从__________________开始，平板划线结束后，最后一次划的线不能与第一次划的线________。(3)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？________________。(4)下图是接种后培养的效果图解，其接种方法是________(填“图甲”或“图乙”)。(5)假设用图乙所示方法接种培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是什么？____________________________________________。答案(1)平板划线稀释涂布平板接种环涂布器灼烧灭菌(2)上一次划线的末端相连(或相接、相交、交叉等)(3)火焰附近存在着无菌区域(4)图乙(5)稀释倍数不够，菌液的浓度太高解析(1)图甲和图乙分别是平板划线法和稀释涂布平板法进行微生物接种，这两种方法所用的接种工具分别是接种环和涂布器。(2)平板划线时，每次划线都要从上一次划线的末端开始，最后一次划线不能与第一次划线相连。(3)由于在酒精灯火焰附近存在着无菌区域，因此接种常在火焰附近进行。(4)培养基上的菌落分布均匀，接种方法为稀释涂布平板法。(5)采用稀释涂布平板法进行菌种分离时，稀释度要足够高，否则会使微生物不能分散成单个细胞。