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[基础对点]知识点一筛选微生物的研究思路1.土壤中的细菌能分解尿素，是因为它们能合成()A．尿素酶B．脲酶C．蛋白酶D．肽酶答案B解析能够分解利用尿素的细菌，其细胞内含有脲酶，可以把尿素分解成氨，然后进一步利用，B正确。2．分离土壤中分解尿素的细菌时，对培养基的要求是()①加尿素②不加尿素③加琼脂④不加琼脂⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦加硝酸盐⑧不加硝酸盐A．①③⑤⑦B．②④⑥⑧C．①③⑤⑧D．①④⑥⑦答案C解析土壤中分解尿素的细菌能够合成脲酶，将尿素分解生成氨，利用尿素中的氮合成自身有机物，①符合要求；培养基中尿素作为唯一氮源，分解尿素的细菌能生长，其他微生物不能生长，⑧符合要求；分离微生物要用固体培养基，需要加琼脂，③符合要求；土壤中分解尿素的细菌属于异养微生物，需要加葡萄糖作为碳源，⑤符合要求。3．选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物，通过不含有机物的培养基、缺氮培养基、含尿素(不含其他氮源)的培养基，可从土壤中分离出的微生物依次是()A．硝化细菌、放线菌、根瘤菌B．根瘤菌、青霉菌、固氮菌C．异养型细菌、放线菌、硝化细菌D．自养型细菌、固氮菌、分解尿素的细菌答案D解析选择培养基可以根据不同微生物的代谢特点，通过改变培养基的成分，以达到选择某种微生物的目的。不含有机物的培养基可以分离出自养型微生物；缺少氮元素的培养基可以培养固氮微生物；含尿素(不含其他氮源)的培养基可以分离出能分解尿素的微生物，D正确。4．用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目，其结果与实际值相比最可能是()A．比实际值高B．比实际值低C．和实际值一致D．比实际值可能高也可能低答案B解析在涂布时，有可能两个或两个以上的细胞连在一起，使平板上观察到的只是一个菌落。知识点二实验设计及操作5.关于土壤中细菌的分离，下列正确的操作步骤是()①土壤取样②称取10g土壤，加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中③吸取0.1mL进行平板涂布④依次稀释至103、104、105、106、107倍A．①→②→③→④B．①→③→②→④C．①→②→④→③D．①→④→②→③答案C解析在分离土壤中某种细菌时，应先选取土样(10g)，然后加入到盛有无菌水的锥形瓶中获得土壤浸出液，并进行不同倍数稀释，最后将稀释液涂布到培养基表面进行培养，并分离和计数，C正确。6．下列操作需要在火焰旁进行的是()①土壤取样②称取土壤③稀释土壤溶液④涂布平板⑤微生物的培养A．①②③④⑤B．②③④⑤C．③④⑤D．②③④答案D解析实验操作过程要进行严格的无菌操作，除实验空间必须消毒外，每个操作步骤都必须在无菌区进行。土壤的称取、土壤溶液的稀释、涂布平板都需要在酒精灯火焰旁的无菌区完成，以防止杂菌污染，D正确。7．可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是()A．以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂B．以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂C．以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂D．以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂答案A解析细菌将尿素分解后，培养基中pH升高，使酚红指示剂变红，A正确。8．用稀释涂布平板法来统计样品中尿素分解菌的数目，为了提高实验结果的可信度，往往要设置对照实验，对于对照组的要求不包括()A．对照组培养基也严格灭菌，且不接种任何微生物B．倒平板时，培养基的用量与实验组必须完全相同C．所用培养基成分及pH大小与实验组保持一致D．对照组和实验组均放在相同且适宜的条件下培养答案B解析对照组培养基也要严格灭菌，且不接种任何微生物，为空白对照，A正确；对照组培养基用量的大小与实验组基本相同即可，不一定绝对相同，B错误；对照组所用培养基的成分及pH应与实验组完全一致，C正确；对照组和实验组的培养基都要置于相同条件下培养，以保证单一变量，D正确。9．下列关于微生物培养的叙述，错误的是()A．因为土壤中各类微生物的数量不同，所以，为获得不同类型的微生物一般要按不同的稀释倍数进行分离B．测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同C．利用稀释涂布平板法只能分离微生物不能对微生物进行计数D．接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单菌落答案C解析土壤中各种微生物数量不同，大约70%～90%为细菌，放线菌和真菌较少，故不同类型微生物，一般要按不同稀释倍数进行分离，A正确；由A可知，测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，需要选用的稀释范围不同，B正确；稀释涂布平板法能用于微生物的计数，C错误；接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单菌落，D正确。[能力提升]10．关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验的叙述正确的是()A．培养基应以尿素为唯一氮源，该细菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的B．选择菌落数在30～300间的所有平板进行计数，以平均数为实验结果C．对10mL土样稀释106倍后，取0.1mL该溶液进行重复的涂布实验，测得的菌落数分别为18、234、276，则该10mL土样中分解尿素的细菌数为2.55×108个D．应该设置对照以排除非测试因素对实验结果的干扰，提高可信度答案D解析土壤中分解尿素的细菌为异养菌，硝化细菌是自养菌，二者利用的碳源不同，A错误；选择菌落数在30～300间的平板进行计数，舍去数据相差较大的数据，以平均数为实验结果，B错误；对10mL土样稀释106倍后，取0.1mL该溶液进行重复的涂布实验，测得的菌落数分别为18、234、276，应选择菌落数在30～300间的平板进行计数，则应舍弃菌落数为18的平板，那么该10mL土样中分解尿素的细菌数为(234＋276)/2÷0.1×10×106＝2.55×1010(个)，C错误；分离微生物时，需要设置不接种的培养基与实验组一起培养做空白对照，设置对照的目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的干扰，D正确。11．甲、乙、丙是三种微生物，表中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生长繁殖；甲能在Ⅰ中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是()ⅠⅡⅢ粉状硫10g＋＋＋K2HPO44g＋＋＋FeSO40.5g＋＋＋蔗糖10g＋－＋(NH4)2SO40.4g－＋＋H2O100mL＋＋＋MgSO49.25g＋＋＋CaCl20.5g＋＋＋注：“＋”表示培养基中加入了这种物质，“－”表示培养基中没有加入这种物质。A．甲、乙、丙都是异养型微生物B．甲、乙都是自养型微生物，丙是异养型微生物C．甲是异养型微生物，乙是固氮微生物，丙是自养型微生物D．甲是固氮微生物，乙是自养型微生物，丙是异养型微生物答案D解析Ⅰ培养基缺少氮源，Ⅱ培养基缺少碳源，Ⅲ培养基营养全面。甲能在Ⅰ上生长繁殖，而乙、丙都不能，说明甲是能够固氮的微生物；乙能在Ⅱ中生长繁殖，甲、丙不能，说明乙不需要培养基为它的正常生命活动提供碳源物质，乙一定为自养型微生物；丙只能在Ⅲ上生长繁殖，为异养型微生物。12．土壤是“微生物的天然培养基”，下面是有关土壤中分解尿素的细菌分离和计数的实验过程，请据图回答相关问题：(1)能分解尿素的细菌代谢类型为________，为获得该种细菌，应从富含有机质的土壤表层取土样。(2)为分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用________________的培养基进行分离，并加入________指示剂进行鉴别。(3)因土壤中细菌密度很大，需要不断加以稀释，配制成如图所示的不同浓度的土壤溶液。取样稀释前，一定要________以减少误差。将103～107倍的稀释液分别吸取0.1mL加入到固体培养基上，用________将菌液铺平，这种接种方法称为________________。(4)将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24～48h，观察并统计具有________(现象)的菌落数，结果如下表，其中________倍的稀释比较合适。稀释倍数103104105106107菌落数(个)5003672483618答案(1)异养型(2)以尿素为唯一氮源'酚红(3)摇匀'涂布器'稀释涂布平板法(4)红色环带'105和106解析(1)能分解尿素的细菌可将尿素分解成氨，代谢类型为异养型。(2)分离土壤中分解尿素的细菌，应该用以尿素为唯一氮源的培养基进行分离，分解尿素的细菌在分解尿素时产生氨，使酚红指示剂显红色，所以要加入酚红指示剂进行鉴别。(3)取样稀释前，一定要将菌液摇匀以减少误差；将103～107倍的稀释液分别吸取0.1mL加入到固体培养基上，用稀释涂布平板法进行接种，需要将菌液用涂布器涂布到固体培养基上。(4)将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24～48h，具有红色环带的菌落即是分解尿素的细菌的菌落。估算样品中的活菌数时，往往选取菌落数在30到300之间的平板，分析表格数据可知，105和106的稀释度下菌落数在这一范围。13．在调查某湖水中H细菌指数(1升水中含有的H细菌个数)的实验中，先将5升湖水水样浓缩至5毫升，然后各取浓缩水样1毫升，涂布到4个培养皿中培养，培养后统计的菌落数分别是42、38、55、18。请回答：(1)培养基中的蛋白胨和淀粉分别为细菌生长提供了____________________、________。(2)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水水样的平板置于____________中培养，培养的温度设定在37℃。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种____________作为对照。(3)细菌培养产生的单个菌落在生态学中称为__________。根据上述结果计算，被检样的H细菌指数为________。用这种方法测定密度，实际活菌数目要比测得的数目________，原因是__________________________。(4)为了纯化获得的H细菌，在微生物的实验室培养过程中，关键是________，而实验结束后，使用过的培养基应该进行________处理后才能倒掉。答案(1)氮源、碳源和维生素碳源(2)恒温培养箱等量无菌水(3)种群45多当两个或多个细胞连在一起时在平板上观察到的是一个菌落(4)防止杂菌污染灭菌解析(1)蛋白胨通常为微生物提供氮源、碳源和维生素，淀粉通常作为碳源。(2)恒温培养箱能够保证细菌生长最适温度，故细菌数量增长较快。在另一平板上接种等量无菌水作为对照，判断平板上是否灭菌彻底。(3)细菌培养产生的单个肉眼可见的子细胞群体称为菌落，生态系统中称为种群。计算时应去掉18这个偏差较大组，其他3组(42、38、55)取平均值为45。用稀释涂布平板法进行微生物计数时，由于两个或多个细胞连在一起时在平板上观察到的是一个菌落，所以实际活菌数目要比测得的数目多。(4)为了纯化获得的H细菌，在微生物的实验室培养过程中，关键是防止杂菌污染；实验结束，为避免微生物污染环境和感染操作者，使用过的培养基应该进行灭菌后才能倒掉。14．临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：(1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用________法或______________法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。(2)取该单菌落适当稀释，用______________法接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A________；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B______；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明__________________________；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的________。(4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素