过敏原课件

过敏原血清学检测1PPT学习交流目录一.过敏原概述二.过敏原常见方法学比较三.欧蒙过敏原产品特性及印迹法的特点四.过敏原体外检测常见问题及解答2PPT学习交流一、过敏原概述1906年vonPiguet提出了allergy一词。其概念为：机体对抗原刺激产生的一种“改变了反应性”的状态。这种状态可能是保护性的，即产生了免疫力；也可能是破坏性的，即产生了超敏反应。超敏反应是机体对某抗原初次应答后，再次接受相同抗原刺激时，发生的一种以机体生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的特异性免疫应答。3PPT学习交流过敏原吸入过敏原食物过敏原接触过敏原输注过敏原空气中的吸入过敏原(例如.植物花粉,动物毛发,室内灰尘或虫螨等)4PPT学习交流过敏原通过胃肠道吸收(例如.鱼、肉、蛋、坚果和蔬菜等)吸入过敏原食物过敏原接触过敏原输注过敏原5PPT学习交流过敏原皮肤接触（例如：金属饰品、化妆品和生活日用品等）吸入过敏原食物过敏原接触过敏原输注过敏原6PPT学习交流过敏原直接输入体内(例如：昆虫或动物的毒液,注射类药品等)吸入过敏原食物过敏原接触过敏原输注过敏原7PPT学习交流过敏的损害过敏是以损害粘膜为主要表现的过敏性结膜炎（眼粘膜）过敏性鼻炎（鼻粘膜）过敏性哮喘（气管粘膜）过敏性紫癜（皮肤粘膜）过敏性肠绞痛（肠粘膜）过敏性紫癜肾炎（肾内粘膜）心脏有粘膜组织，心脏是肯定会受到损。心肌酶升高，特别是特异性的CK-MB（肌酸激酶同工酶）。CK-MB分布在心肌和结缔组织。心电图表现主要是心肌膜的损害，表现为传导阻滞。8PPT学习交流1.皮肤科（30％）：急慢性荨麻疹、异位性皮炎等2.耳鼻咽喉科（30％）：以过敏性鼻炎为主3.内科（25％）：以哮喘、过敏性肺泡炎为主4.小儿科（15％）：儿童变态反应病的诊治5.变态反应专科（1％）：仅在少数大型3甲医院设置了变态反应科室，从事变态反应病的研究，并承担某些罕见病、疑难病的临床诊治。应用科室9PPT学习交流过敏原II相关过敏原~5%无关成分~95%10PPT学习交流过敏原II过敏原的命名:•对于纯化过敏原:拉丁文缩写+序号例如.桦木花粉(betulaverrucosa):Betv1;Betv2...•蛋白或糖蛋白•小分子量物质,15–20kDa过敏原11PPT学习交流过敏原II•过敏原提取物为包含与过敏反应无关的其它成分的混合物•纯化天然相关过敏原通常不太可能实现•目前尚无有关过敏原的国际标准Mark1215µl5µl1µl614223136556697116kDaHPLC+-SDS-PAGEWB12PPT学习交流•提取过程•缓冲液系统•温度•纯化•储存•...过敏原II影响因素13PPT学习交流过敏原II影响因素•原材料:•例如.桦树花粉:除了植物品种个体特征外，树龄、生长环境和过敏原采集时间和方法等多种因素均会影响到过敏原的质量。14PPT学习交流过敏原应用过敏原提取物进行诊断•所有的试剂生产商通常都检测特异性IgE•在检测方法上存在差异•结果通常不能避免非特异性反应15PPT学习交流•来源:•由欧蒙生化和分子生物学生产部负责生产•从著名的过敏原生产厂商购买商品化的产品•质量控制:•通过电泳分离的方法检测过敏原成分•通过免疫印迹的方法检测其过敏原反应性•在膜条上完成功能测试过敏原生产和质量控制16PPT学习交流免疫反应17PPT学习交流4种过敏反应类型(超敏反应)byCoombsundGell(1963)TypeITypeIITypeIIITypeIV早期反应IgE-介导肥大细胞脱核Platzhalter数分钟内花粉热细胞毒反应IgG/IgM介导血细胞的破坏数小时到一天药物过敏免疫复合物形成持续产生IgG/IgM免疫复合物Platzhalter数小时到一天farmerslungs细胞免疫反应T-细胞介导反应12小时到数周接触过敏反应(Ni)18PPT学习交流19PPT学习交流Ⅰ型变态反应20PPT学习交流I型过敏反应Betv1Betv2确认对桦树花粉过敏的患者……个体分别与不同的桦树花粉过敏原反应，如：Betv1...Betv8Betv3Betv7Betv1Betv4Betv2Betv6Betv821PPT学习交流过敏原诊断与治疗•诊断方面•即往病史•皮试•实验室检测•激发实验•治疗方面•特异性免疫治疗成功率低于100%22PPT学习交流过敏原血清学检测23PPT学习交流检测IgE步骤1:总IgE•ELISA步骤2:特异性IgEEUROLINE24PPT学习交流总IgEELISA标准品500IU/ml100IU/ml10IU/ml0IU/mlWHO75/502•4点定标Exampleforastandardcurve00,511,520100200300400500600IgE[IU/ml]Extinction25PPT学习交流总IgEELISA:参考范围参考范围可能存在过敏反应参考范围一般无过敏反应年龄最高参考上限新生儿1.2IU/ml1-6月7.2IU/ml7-12月12.7IU/ml1-5岁60IU/ml6-9岁155IU/ml10-15岁199IU/ml16岁100IU/ml26PPT学习交流总IgEELISA:结果解释1.总IgE超出参考范围大多数是由于过敏反应导致•例外:寄生虫病;免疫抑制;HIV;重度烧伤2.临床相关特异性IgE结果•与总IgE相关的特异性IgE浓度越高，患者临床过敏反应的可能性就越大.27PPT学习交流总IgEELISA:结果解释举例特异性IgE总IgE特异性IgE5IU/ml(kU/l)总IgE200IU/ml患者1特异性IgE5IU/ml(kU/l)总IgE25IU/ml患者228PPT学习交流总IgEELISA:总结•简单和快捷的实验操作•低检出限(1IU/ml)•高重复性(批内实验:5%)•通过4份标准品计算定量结果•标准品采用WHO标准•通过ELISA工作站实现自动分析29PPT学习交流特异性IgE•EUROLINE•ALLERCOATTM6DP3713E－吸入性及食物性过敏原30PPT学习交流特异性IgEEUROLINE•简便和快捷的实验操作•仅需少量样本(过夜温育)•结果基于广泛应用的EAST分级系统•与PharmaciaCAP具有良好的相关性•自动温育•通过EUROLineScan程序实现结果的自动判读31PPT学习交流类别浓度[kU/l]sIgE水平临床意义00.35未检出不过敏10.35-0.7低较敏感20.7-3.5中有临床症状33.5-17.5高重417.5-50很高（+）很重550-100特高（++）特重6100特高（+++）特重特异性IgE分级标准及临床意义32PPT学习交流特异性IgEEUROLINE血清温育颜色反应色原底物膜条抗原提取物温育60min二抗反应10min底物温育AP标记二抗AKP清洗3x5min清洗3x5min自动化判读或肉眼观察60min未稀释过夜1:11稀释33PPT学习交流EUROLINE检测系统34PPT学习交流•结果判读:EUROLineScan特异性IgE欧蒙印迹法自动化35PPT学习交流36PPT学习交流欧蒙印迹法过敏原谱中欧•吸入•儿童吸入•食物•特应性•交叉反应•儿童•昆虫毒液亚洲•中国吸入•中国食物•中国特应性•韩国吸入•1+2•韩国食物•1+2•东南亚吸入•东南亚食物地中海中东•地中海吸入•中东吸入•中东食物•Inhal.ScreenAE•FoodScreenAE•海湾吸入•海湾食物37PPT学习交流特异性IgE欧蒙印迹法各种组合•为不同过敏原组合提供可能:–在一条膜条上包被36种以上过敏原–大约170种以上过敏原•满足新过敏原组合的需要:–市场信息反馈–目标过敏原的定位和其它参数确认–提供特殊过敏原的原材料–提供阳性血清38PPT学习交流二、过敏原常见方法学比较既往病史皮试:刺试,抓试,皮外试,皮内试实验室检查:IgE检测CAST(细胞抗原刺激实验)激发试验:(金标准)-鼻腔激发试验-双盲稳定剂控制的食物刺激试验(DBPCFC)39PPT学习交流二、过敏原常见方法学比较40PPT学习交流二、过敏原常见方法学比较类别方法特点体内皮肤针刺试验强烈反应时容易互相混淆结果（皮内试验点、刺试验或价格便宜、快速，但对过敏原的质量控制有严格要求，患者痛苦，刺痕试验）无法避免对于高过敏体质患者具有一定生命危险性的问题同时试验多种抗原时，容易不同的抗原液交叉混合斑贴试验斑贴试验主要是检测Ⅳ型变态反应，敏感程度不太高。鼻粘膜激发试验（SNPT）患者试验过程较痛苦无法避免对于高过敏体质患者具有一定生命危险性的问题操作等较繁琐食物激发试验食物过敏检测金标准（DBPCFC）对于食物过敏反应严重的患者较危险操作麻烦，需要病床观察患者试验过程较痛苦体外血清学检验对患者来说使用安全，适合儿童，可避免强烈的皮肤反应避免其它皮肤病造成的误判使用方面，少量血清一次即可完成数十种种过敏原的检测适用于对食物过敏的患者，效应器官不在皮肤适用于用抗组胺类或激素类治疗而不能停药者生物共振无创、快速、检测范围广、无创伤性、但该技术缺乏科学依据，容易受到人为信号的干扰，难以建立严格的标准41PPT学习交流体外诊断的优势•对患者来说不存在风险•尤其适合5岁以下儿童，可避免强烈的皮肤反应•与其它皮肤病区别•不需附加其它药物•适合无法进行皮试的食物过敏原的检查42PPT学习交流二、欧蒙过敏原产品特性及印迹法特点同类产品中单一膜条内过敏原数量最多不添加任何增效剂针对中国人设计的过敏原对患者来说不存在风险不需停止服用抗组胺药物独家包被有CCD指示带，解释交叉反应的假阳性结果所有厂家中样本使用体积最小（100ul）快速测试过敏原，整个实验完成仅需要2.5-3小时欧蒙过敏原体外诊断的优势43PPT学习交流同类产品中单一膜条内过敏原数量最多可一次检测20大项，30小项过敏原44PPT学习交流不添加任何增效剂现在有些产品为了增大反应强度，在产品中添加增效剂，加大了反应强度。导致了判定结果与临床有不符现象。欧蒙产品不添加任何增效剂，本着科学、实事求是的精神真实、准确的判定实验结果。45PPT学习交流针对中国人设计的过敏原过敏原采集于中国，提高特异性检出率DP3713-1601E（中国组合）针对中国人设计的组合46PPT学习交流对患者来说不存在风险无痛检测：通过血清中IgE抗体与过敏原结合，测试过敏反应避免了人体与过敏原直接反应导致的风险用点刺针穿过液滴，轻轻刺入皮内将可疑致敏物质敷贴于患者皮肤上斑贴试验点刺试验47PPT学习交流不需停止服用抗组胺药物以往过敏原检测需要患者体检停止服用抗组胺药物。以便提高试验的准确性。欧蒙过敏原检测试剂无需患者停止服用抗组胺药物。（常用的有苯海拉明、异丙臻、扑尔敏、赛庚啶、息斯敏、特非拉丁等）48PPT学习交流独家包被有CCD指示带独家包被有CCD指示带，解释交叉反应的假阳性结果CCD是“交叉反应性碳水化合物决定因子”CCD存在于多种植物性或动物源性的过敏原中，由于结果相似性导致一些独特的交叉反应出现CCD的检测对于患者提示：虽然对于某些过敏原没有临床症状，但是在过敏进程中对有些具有交叉反应的过敏原可能会有改变，所以对于患者又针对性的预防交叉过敏反应，有着重要的临床指导意义。49PPT学习交流欧蒙印迹法的特点•一次可以检测多项过敏原•8-20项，常见食物及吸入组合，如葎草，艾蒿，豚草，常见树花粉，霉菌，尘螨，猫毛，狗毛，蟑螂，鸡蛋，牛奶，鱼，虾，蟹，花生，大豆等。•适合体检筛查。•采血量少•100-1000微升血清可以检测多项，特别适合儿童患者。•性价比高•一次可得到多种过敏原信息谱。•适合各类人群•一定范围内脂血、溶血、黄疸血清或血浆样本对检测结果无影响。50PPT学习交流•有配套仪器软件可以省时省力•全自动操作，判读软件，2.5h出结果。•无需暗室孵育。•半定量可以直接获得结果•可以直接用肉眼判读，也可以用欧蒙配套软件判读。•EAST分级并有数字及