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课题1发情控制技术【目的要求】1．熟悉同期发情、诱导发情和超数排卵的概念、意义。2．了解同期发情、诱导发情和超数排卵的机理。3．明确期发情、诱导发情和超数排卵的方法。【基本内容】1、诱导发情技术2、同期发情技术3、超数排卵技术【重点难点】1、诱导发情的方法2、同期发情的方法3、超数排卵的方法【内容讲授】发情是母畜繁殖过程中的一个重要环节，如果能够通过人为的方法改变母畜的发情活动，使一群母畜在特定的时间内同时发情，使通常产单胎的家畜能产双胎或得到更多的胚胎，从而人为地控制和调整发情、排卵规律，使母畜按照人们的要求，在一定的时间发情、排卵和配种，这就是家畜的繁殖控制。(一)诱导发情技术诱导发情是指对处于乏情状态(无发情周期)的母畜，利用外源激素(如促性腺激素)和某些生理活性物质(如初乳)以及环境条件的刺激，促使乏情母畜卵巢从相对静止状态转变为机能性活跃状态，以恢复母畜正常发情和排卵的技术。1．诱导发情的意义利用诱导发情可以控制母畜的发情时间，缩短繁殖周期，增加胎次和产仔数，提高其繁殖力；可以调整产仔季节，使奶畜一年内均衡产奶，使肉畜按计划出栏，按市场需求供应畜产品，提高畜牧业经济效益。2．诱导发情的机理家畜的一切性活动始终是在内分泌和神经系统的共同作用下进行的，用外源激素和神经刺激通过内分泌和神经的作用，激发卵巢的机能，使卵巢从相对静止状态转为活跃状态，促进卵泡的生长发育，继而使母畜发情、排卵并予以配种。3．家畜诱导发情的方法(1)生殖激素处理羊在非发情季节，对乏情期母羊用孕激素处理6-9天，在停药前：48小时按每千克体重注射孕马血清促性腺激素(PMSG)151U，母羊同期发情率可达95％以上，第一情期受胎率为70％左右；用促卵泡素(FSH)和氯地酚也可促使母羊发情排卵。产后1个月以上的泌乳母山羊，在其耳背皮下埋植60mgl8—甲基炔诺酮药管维持9天。取除药管前48小时，按每千克体重肌注PMSGl51U，与此同时，再以2mg溴隐停间隔12小时作两次注射，当母羊发情时再以促黄体素(LH)每只10微克作静脉注射后给予配种。利用这种方法可使诱导发情率达90％以上。马非发情季节的母马，每日注射雌激素5-10mg，连续10-15天，总剂量为75-150mg，可在一定程度上恢复发情周期。牛可从产后2周开始，采用孕激素处理10天左右，每头牛再注射PMSGl000IU，即可诱导发情。或者采用牛初乳20mL，同时注射新斯的明10mg，在发情配种时再肌注LHl00微克，可诱发80％-90％的母牛发情并排卵、受胎。猪哺乳母猪在产后1个月断奶，将仔猪进行人工哺乳，母猪在1周左右即可发情，若在断奶时注射PMSG，则发情效果更好。如果在母猪哺乳期内实行部分断奶，即从哺乳21天开始，每天哺乳12小时，3天后再注射PMSG，则可促使母猪发情。另外，用人工合成的公猪外激素喷洒于乏情期韵母猪鼻端，可使母猪在数日内发情。(2)改变光照期羊母羊是由长日照过渡到短日照后开始表现发情的，在春、夏季利用人工缩短光照时间，模拟秋季的光照期，每日光照8小时，黑暗16小时，一般在处理后7—10周开始发情。马在马厩内离地面2．5m高处悬挂200-400W灯泡，从日落开始延长5-6小时的光照时间，母马的卵巢机能可在翌年1月下旬到2月中旬提前恢复，表现出正常发情。(3)公畜刺激在与公畜隔离的母畜群里，于发情季节到来之前，将公畜放人母畜群里，则会较好地刺激母畜，使其提前发情，即所谓的“公畜效应”(二)同期发情技术同期发情就是采用激素或类激素的药物处理母畜，使其在特定时间内集中发情，并排出正常的卵细胞，以便达到共同配种和共同受胎的目的。1．同期发情的意义(1)可以促进冷冻精液更迅速更广泛的应用:采用同期发情技术可以进一步扩大冷冻精液的应用范围，提高冷冻精液设备的利用效率，使人工授精工作可以做到成批、集中、定时，不需作发情鉴定及试情工作。(2)便于合理组织和安排畜牧业的大规模生产和进行科学的饲养管理:同期发情可以使一系列繁殖过程，如配种、妊娠、分娩、仔畜培育和断奶等相继得到同期化，这对节省劳动力和时间，合理组织管理和降低管理费用具有很大的经济意义。(3)提高家畜繁殖率:同期发情不仅应用于发情周期正常的母畜，而且也可使乏情期的母畜出现性周期活动，缩短了母畜的繁殖周期，提高了繁殖率。(4)为胚胎移植创造条件:家畜胚胎移植成功的关键是要求供体和受体母畜达到同期发情，这样就能使其生殖器官处于相同的生理状态，移植的胚胎才能正常发育。2．同期发情的原理在母畜卵巢机能和形态变化的过程中，黄体期的结束是卵泡期到来的前提条件，只要一群母畜的黄体期同时结束，‘即可引起它们同时发情。同期发情技术就是借助外源性激素直接或间接作用于卵巢，促使群体母畜卵巢的生理机能处于相同阶段，为同期发情创造一个共同的基础。周期发情技术一般有两种途径。一种是给一群母畜同时施用孕激素类药物，抑制卵泡的生长发育和发情表现。经过一定时期后同时停药，由于卵巢上的周期黄体退化，于是同时出现卵泡发育，引起母畜同时发情(图5—45)。其实质就是人为地延长了黄体期，推迟发情期到来的作用，为该群体母畜的下一个发情周期创造一个共同的起点，使发情同期化。另一种途径是利用性质完全不同的前列腺素，加速功能性黄体的消退，使卵巢提前摆脱体内孕激素的控制,于是群体母畜卵巢上的卵泡同时开始发育，以达到同期发情(图5—46)。这种情况实际上是缩短了母畜的发情周期，使其发情期提早出现，它只适用于有正常发情周期活动的母畜。3．使家窘周期发情的药物(1)抑制卵泡发育的制剂。如孕酮、甲孕酮、氟孕酮、氯地孕酮、甲地孕酮及18-甲基炔诺酮等。这类药物的用药期可分为长期(14-21天)和短期(8-12天)：两种，一般不超过一个正常发情周期。(2)，谘解黄体的制剂。前列腺素如PCf2a和氯前列烯醇具有显著的溶解黄体的作用，在用于同期发情处理时，只限于正处在黄体期的母畜。(3)配合强化制剂。在使用同期发情药物的同时，如果配合使用促性腺，则可以增强发情同期化和提高发情率，并促使卵泡更好地成熟和排卵。这类药物常用的有孕马血靖促性腺激素(PMSG)、人绒毛膜促性腺激素(HCG)、促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、促黄体素释放激素(LHRH)，另外还有促性腺索释放激素(GnRH)和氯地酚。4．同期发情的处理方法(1)牛前列腺素法对卵巢上有功能性黄体存在的母牛采用前列腺素类似物，剂量1－2mg，分两次子宫内灌注，再配合使用促性腺激素，6天内排卵的母牛达90％以上，并且大多集中在用药后3-5天内排卵。埋植法应用孕激素药物时多采用18—甲基炔诺酮作皮下埋植，一般用量为；18－25mg，经10-12天后除去药管，为提高效果，也可以配合使用促性腺激素。阴道栓塞法：用孕激素阴道栓预处理7天，并于第6天结合使用PGF2a，第乍灵撤除孕激素阴道栓即可。(2)羊阴道栓塞法将一块消毒过的泡沫塑料(直径和厚度各2—3cm)拴上细线，浸以孕激素制剂溶液，制成阴道栓，在子宫颈外口处放置14-16天后取出，并肌注PMSG400-7501U，2-3天后大多数母羊发情，于发情当天和次日各输精一次。其药物种类和用量为：甲孕酮40-60mg，用地孕酮40-5mg吨，18—甲基炔诺酮30-40mg，氯地孕酮20-30mg，氟孕酮30－60mg；孕酮150-300mg.前列腺素法在发情结束后数日，向母羊子宫注入或肌注前列腺素，用药后2－3天内大多数处理母羊发情，药物用量为牛的1／4，类似于牛的同期发情处理方法。(3)马一般使用前列腺素处理，其方法与牛相似，两次处理的时间间隔为8天，结合使用促性腺激素时效果更好。(4)猪断奶配合激素对猪切实可行的方法是结合断奶进行，如在产后4-6周，使一群母猪同时断奶，可造成自然的同期发情。但在断奶时同时注射：PMSG750-1500IU或在肌注PMSG的同时，再注射HCG5001U，效果较好。非激素制剂对各种生理状态的母猪，利用氯地酚可引起同期发情。使用时，先用少量酒精溶解，然后加入生理盐水，使氯地酚含量达到20mg／mL，每次注射氯地酚30-40mg，注射后4-7天，大多数母猪皆发情。各种家畜同期发情处理的效果如何，受多种因素的影响，如母畜的生理状态、年龄、体况和药物种类、质量、剂量和施用方式等。如果被处理的母富有80-90％集中在处理后第2天4天内表现发情，情期受胎率达50—60％或相当于当地自然发情的受胎率，同期发情技术便认为是成功的，可以在生产中广泛应用。(三)超数排卵技术应用外源性促性腺激素诱发母畜卵巢的多个卵泡同时发育，并排出具有受精能力的卵的方法称为超数排卵，简称“超排”1、超数排卵的意义哺乳动物的初生卵巢上含有20万-40万个卵母细胞，但在自然条件下仅有数十个卵母细胞得l~AiE常发育并排卵。为了提高动物的繁殖效率，应用超排技术可以使每次排卵数由1-3个增加至10-20个：，或经过超排处理后，人工由母畜卵巢回收卵母细胞并培养成熟，使之受精形成早期胚胎，以开发卵母细胞资源，充分挖掘优良母畜的繁殖潜力，加速品种改良。2．超数排卵的原理自然情况下，家畜卵巢上约有99％的有腔卵泡发生闭锁而退化，只有1％能发育成熟而排卵。在家畜有腔卵泡闭锁之前，注射FSH或PMSG可使大量卵泡不闭锁而正常发育成熟，在排卵之前注射Ht或HCG补充内源性LH的不足，可保证这些大量成熟卵泡同时排卵，形成超数排卵。3、各种家畜的超数排卵处理的方法羊成年母羊在预定发情到来之前的4天，即发情周期的第12-13天，皮下或肌注PMSG750-10001U，发情或配种当日肌注HCG500-7501U，则可达到超数排卵目的；也可以在同样时间开始注射FSH代替PMSG，用LH代替HCG，FSH连续注射3天，每天上、下午各注射4-5mg，共200-3001U，LH100-1501U。牛在胚胎移植时采用，处理方法同羊。在预计发情到来之前的4天，即发情周期第14-16天注射PMSG或FSH，经4天或发情后再注射HGG，其用量为羊的3-4倍。目前采用的方法多在发情周期的第9-11天开始用递减法注射FSH，每日两次：连续4天，总剂量为32-40mg(或360-400IU)，开始注射后第3天或48小时肌注前列腺素PGF2a2-4mg。4．超数排卵的效果(1)受胎率超数排卵处理的卵子受精率和母畜受胎率均低于自然发情的受精率和受胎率。回收胚胎的时间越晚，变性胚胎的比例就越大，因此回收胚胎的时间应适宜。(2)排卵数供体母畜一次超数排卵的数目不宜过多，两侧卵巢第一次排卵以10-15枚较好。(3)发情率应用促性腺激素和PGF2a进行超排处理时，有60-80％的母畜有发情表现，有的供体虽不表现发情，却能正常排卵。(4)发情出现时间和胚胎回收率超数排卵处理时，供体母畜在注射PGF2a。后48小时以内发情者胚胎的回收率最高，72小时以后发情者胚胎的回收率大为下降，而且大多为未受精卵。(5)发情周期超数排卵后的母畜，血液中含有高浓度的孕激素，因而发情周期延长。【复习思考】1、名词：诱导发情、同期发情、超数排卵2、诱导发情、同期发情、超数排卵的意义3、诱导发情、同期发情、超数排卵的方法【目的要求】1．熟悉体外受精、性别控制、性别鉴定、卵核移植、动物克隆、胚胎分割与嵌合、基因导入等技术的的概念、意义。2．了解体外受精、性别控制、性别鉴定、卵核移植、动物克隆、胚胎分割与嵌合、基因导入等技术的基本原理。3．明确体外受精、性别控制、性别鉴定、卵核移植、动物克隆、胚胎分割与嵌合、基因导入等技术的实施程序。【基本内容】1、体外受精技术2、胚胎性别控制及鉴定技术3、核移植与动物克隆技术4、胚胎分割与嵌合技术5、基因导入技术【重点难点】本课题只作一般性介绍。课题2胚胎生物工程技术【内容讲授】一、体外受精技术体外受精技术是动物胚胎工程的一项重要技术，是指通过人为操作使精子和卵在体外环境中完成受精过程。体外受精技术不仅对揭示卵母细胞成熟和受精机理具有重要的理论意义，而且对畜牧业的发展具有广泛的应用前景。其操作技术如下：1．精子采集与获能处理精子的采集可采用射出精子