链霉亲和素商品化应用简介

链霉亲和素商品化应用简介一、链霉亲和素性质链霉亲和素（streptavidin，SA）是由链霉菌streptomycesavidinii分泌的一种蛋白质，分子量为65kD。链霉亲和素分子由4条相同的肽链组成，其氨基酸组成中，甘氨酸和丙氨酸的含量较大，而且结合生物素的活性基团也是肽链中的色氨酸残基；链霉亲和素是一种稍偏酸性（pH6.0）的蛋白质，并且不带任何糖基。链霉亲和素分子中每条肽链都能结合一个生物素，因此与亲和素一样，一个链霉亲和素分子也能结合4个生物素分子，二者亲和常数（K）亦为1015L／mol。在蛋白水解酶作用下，链霉亲和素可在N端10～12和Ｃ端19-21间断裂，形成的核心链霉亲和素仍然保持完整的结合生物素的能力。链霉亲和素的活性单位也是以结合1μg生物素所需的量来表示，１mg链霉亲和素的最高活性可达18U。二、亲和素和链霉亲和素的比较相同点1、生物素结合能力：AV：13~15U，SA：14~18U2、活性中心依赖于色氨酸-懒氨酸：亲和素在氨基酸序列的70-70和110-111两个位点有色氨酸-懒氨酸，链霉亲和素在氨基酸序列的79-80和120-121两个位点含有色氨酸-懒氨酸。不同点：1、分子量：AV=66KD,SA=54KD2、等电点：AV=10.5,SA=6.0,AV带正电较多，非特异性结合较强。3、位阻效应：SA的生物素结合位点较AV深，位阻效应较强，长臂生物素更适合。4、生物素的结合：AV随机结合，SA协同结合。5、氨基酸序列：AV含二硫键和10%糖，SA含甘氨酸丙氨酸较多，无糖和二硫键。三、链霉亲和素在ELISA中的应用酶联免疫吸附剂测定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。生物素－链霉亲和素系统在ELISA中的应用有多种形式，1、用于间接包被：可以在固相上先预包被链霉亲和素，原用吸附法包被固相的抗体或抗原与生物素结合，通过链霉亲和素－生物素反应而使生物素化的抗体或抗原间接包被。这种包被法主要有以下优点：①
增加吸附的抗体或抗原量，而且使其结合点充分暴露。②
阴性对照、空白对照本底低，检测敏感性高。③
用链霉亲和素替代抗体包被微孔，避免了抗体包被微孔时容易发生失活(或不易保存)。④
通过生物素将抗体结合于链霉亲和素包被的酶标板上，可克服传统物理吸附方法造成的抗原抗体结合能力大量丧失的不足。⑤
生物素标记捕获抗体、酶标指示抗体和样品中的抗原三者在均相中形成复合物后，再通过生物素结合于链霉亲和素包被的酶标板上，由于链霉亲和素和生物素之间亲和力极强，并且具有高度的特异性和稳定性，因而可提高检测灵敏度。实例：CTnT检测实验中，双抗体夹心ELISA法最低检测值为7.25μg/L，使用链霉亲和素包被法最低检测值达到1.0μg/L，较双抗体夹心ELISA法灵敏度提高7倍。2、用于终反应放大：在常规ELISA中的酶标抗体也可用生物素化的抗体替代，然后连接亲和素－酶结合物，以放大反应信号。由于SA的等电点低，表面带的正电荷少，因此它和聚苯乙烯板载体的静电吸附力弱，SA的阴性对照显色明显比AV低，这样在ELISA上应用SA可进一步提高方法的灵敏度。链霉亲和素对生物素化的抗体是一个主动的吸附过程，生物素化的抗体吸附在链霉亲和素表面，抗体排列整齐，分布均匀，抗体容易保持功能，而被动吸附抗体排列极不规则容易导致大量抗体失去功能，所以将生物素-链霉亲和素免疫反应系统引入竞争法中，可以大大提高酶联免疫的灵敏度和特异性。实例1:地高辛的生物素-链霉亲和素免疫法测定实验中，传统方法被动吸附只有约5％的抗体具有功能，生物素-链霉亲和素体系中60％的抗体具有功能。实例2：淋球菌抗原测定方法实验中，生物素-链霉亲和素法检测灵敏度为0.625μg/L，相当于3.5×104/ml淋球菌，而同时进行常规ELISA测定时，其灵敏度为1.25μg/L。四、链霉亲和素相关商品1、标记化链霉亲和素用酶或荧光素等修饰链霉亲和素，应用于ELISA放大检测信号，提高检测灵敏度。产品实例：①
绿色荧光素（FITC）标记Streptavidin蛋白产品说明荧光素标记抗体（FA）是目前广泛用于免疫病理、细胞化学、流氏细胞学、病理学及自身抗体的临床免疫中的特异、灵敏、定性和定位相结合的免疫化学试剂。荧光素抗体为制备的抗血清，再经过亲和层析纯化的方法制成抗体的IgG成分，并采用直接标记法，将异硫氰酸荧光素共价交联到链霉亲和素分子的氨基基团分子上，经过纯化、蛋白定量、FITC浓度及效价鉴定而制备完成。应用范围：1.免疫组织及免疫病理中抗原、抗体检查，如：各肿瘤抗原检查，细胞凋亡检测。2.用于细胞因子等检查的荧光流式细胞仪测定。3.用于临床自身免疫病的多种自身抗体荧光检查，如：抗核抗体，抗心肌酶抗体.4.白细胞分型抗原的免疫荧光染色。5.用于细菌、病毒、梅毒螺旋体、钩端螺旋体等微生物的抗原及抗体检测。主要性能：0.3ml或根据试验需求的各种包装，并提供浓缩液或冻干粉，含有0.01%NaN3防腐剂。链霉亲和素含量在1mg/1ml左右.FITC为Sigma异构体I,约在70-80ug/ml,495nm为最大吸收峰，激发波长525nm.工作浓度：用0.01mol/lpH7.4PBS作1：20–1：50稀释使用。保存：-20℃可保存一年，避免反复冻融。②辣根过氧化物酶标记链霉亲和素产品类别详细说明产品编号英文名称Streptavidin/HRP中文名称辣根过氧化物酶标记链霉亲和素生产产地产品类别二抗（标记化合物）克隆号产品价格产品标准1mg/ml产品应用免疫学及分子生物学2、链霉亲和素酶标板将链霉亲和素直接或间接预包被在酶标板上，稳定性高，易于保存，使用时只要加入生物素化的抗体或者抗原即可。产品实例：ImmobilizerTM-链霉亲和素酶标板/板条适用于生物素化生物分子瞬间耦合链霉亲和素共价粘附在表面上可以随时使用无需进行封闭步骤极佳的结合力（例如F96透明20pmol/孔*）表面流失率低容易接触到反应位置点非特异性结合信噪比高室温下稳定试剂消耗率低白色和黑色的板用于发光或荧光应用上可以选择384孔板*实际的结合力可能由于耙分子的大小和位阻特性而改变NuncImmobilizerTM链霉亲和素目录编号4360144360115436016436020436022规格F96F96F96F8C8LockWellTM颜色透明白色黑色透明透明总容量，ul/孔400400400400350建议耦合容量，ul/孔100100100100100数量每包/箱1/151/151/151/151/153、链霉亲和素磁珠链霉亲和素磁珠由1μm超顺磁微粒与高纯度链霉亲和素共价结合而成。磁珠可用于捕获生物素标记的底物，包括生物素标记的抗原、抗体和核酸。由于生物素-链霉亲和素的相互作用很强，其结合常值（Ka）为1015M-1，并且链霉亲和素的非特异性结合率很低，使得被捕获的底物可满足后续实验要求，包括mRNA的分离和一抗、二抗的获得。亲水性链霉亲和素磁珠由2μm超顺磁颗粒与高纯度链霉亲和素共价结合形成。由于这种磁珠有50－60％的磁性成分，因而使得它非常适用于自动化高通量实验操作。它们也可用来捕捉生物素标记的底物，比如像抗原、抗体和核酸。对蛋白质和核酸的非特异结合非常低。产品实例：Dynabeads®M-280Streptavidin链霉亲和素磁珠产品描述：链亲和素包被的Dynabeads®为分离生物素抗体，核酸或其他生物素配体和靶分子的最佳选择。这种链亲和素-生物素的高亲和力(Kd值10-15)在分子上有着广阔的应用。磁珠是单层而不是多层的链亲和素重组体。这对自由生物素或生物素配体和靶分子而言，在空间排列有着绝大多数的生物素结合位点。没有过量的物理吸附链亲和素确保了只有微量的链亲和素会遗漏。批次间变化小，结果重复性好。优点和特性：•直接快速捕获任何生物素靶分子•灵活的固相操作和优化的液相反应动力学•磁性操作易于适应自动化平台•批次重复性高，结果可靠一致本产品包含：共价偶联了链亲和素重组体的Dynabeads®(2.8µm)，保存在PBS中，pH7.4，0.1%BSA和0.02%NaN3作防腐剂。应用：过去15年中,，Dynabeads®M-280Streptavidin已有达到了前所未有的广泛应用。主要应用在制备单链DNA模板，分离RNA和DNA结合蛋白，固定长链DNA片段，纯化测序产品，特效捕获核酸。Dynabeads®被全世界的IVD仪器使用了不少于25,000例。浓度：10mg/ml储存条件：2-8℃结合能力：磁珠的结合能力由DNA片段长度决定。1mg磁珠结合700-1,000pmoles自由生物素，200pmoles生物素标记的核苷酸(单链)，5-10µg生物素标记抗体和5pmoles的2-4kb双链DNA片段。结合大片段DNA(2kb)，我们推荐使用Dynabeads®kilobaseBINDER试剂盒(货号601.01)。英文名称：Dynabeads®M-280Streptavidin中文名称：Dynabeads链霉亲和素磁珠M-280试剂盒