《药物分析》实验指导书

《药物分析》实验指导书《药物分析》实验指导书-1-一、前言药物分析实验是整个药物分析课的重要组成部分。其主要目的是：1.通过试验，检验在课堂上所学的理论知识。使学生对理性知识的理解更加深入，掌握得更加牢固。2.通过试验，训练学生的基本操作技能，培养学生分析问题和解决问题的能力，使学生获得从事药物分析科研工作的基本训练。在实验中，重点是要加强对学生基本操作技能的训练。二、实验须知在药物分析实验中，所用的药品多数是挥发性、易燃、有毒、有腐蚀性、刺激性、甚至爆炸性药品，试验操作又常在加温加压等情况下进行，需要各种热源、电器或其他仪器，操作不慎易造成火灾、爆炸、中毒、触电等事故。但只要加强爱护国家财产和保障人民生民安全的责任心，提高警惕，消除隐患，注意实验规则，事故是可以避免的。三、实验规则1.试验前必须预习实验内容，了解原理和操作规程。随时记录试验应记的项目，以作正式报告。2.试验前应清点并检查仪器是否完整，装置是否正确，合格后方可进行试验。试验时不准做无关的事情，严禁吸烟，不得擅自离开，并应随时注意反应情况，仪器有否漏气，破裂等。3.药品仪器都是国家财产，须节约爱护使用，公用物品，用完后立即放回原处。不可调错瓶塞，以免污染，仪器要洗刷干净。4.操作易燃性有机溶剂，回流、蒸馏、减压蒸馏时，不能明火直接加热，要放沸石或一端封死的毛细管，若在加热时发现无沸石则应冷却后再加，防止爆沸冲出。减压系统应装有安全瓶。加液时应停火或远离火源，一般无漏气开口，冷凝水要通畅。起封易挥发溶剂瓶盖时，脸面要避免开瓶口慢慢启开，以防气体冲脸上。5.有毒具腐蚀药品应妥善保管，操作后要立即洗手。勿粘及五官和创口，以免中毒。6.实验中，有毒气或腐蚀性气体发生适应在通风橱中进行操作。必要时可戴好防护用具进行工作。7.若将玻管插入塞中时，可在塞孔中涂些水和甘油等润滑剂，用布包住波管使其旋转而入，防止折断割伤。8.试验台上不放无用的药品、仪器，在实验时要做到水槽、仪器、桌面、地上清洁整齐。9.试验结束时，应将门、窗、水、电、煤气关好，室内打扫干净，并清点仪器后方可离去。《药物分析》实验指导书-2-四、安全防火须知1.实验室存放易燃性有机溶剂时要远离火源，不得超过500ml。2.在进行易燃性有机溶剂实验时，一定要按着操作规程进行。不可将易挥发、易燃性有机溶剂倒入水槽或废液缸内。3.烘箱内不能烘盛有易燃性溶剂的器皿。4.消防器材，沙箱、石棉布、灭火器等应放在方便固定的地点，不能随意移动，均应处于备用状态。5.万一不慎着火，要沉着冷静积极抢救，应立即切断室内电源和火源，用石棉布将着火部位盖严，使其断绝空气而熄灭。或是火势情况选用适当灭火器材进行灭火。在实验室使用二氧化碳灭火器较好，它具有不腐蚀不导电之优点。在实验室中常发生的事故如下，应予以特别注意。1.蒸馏或回流加热时，发现未放沸石，未等溶液冷却就补加沸石，结果溶液冲出瓶外于是引起火灾。2.蒸馏易燃物时，忘记通冷凝水，大量蒸汽逸出亦易引起火灾。3.蒸馏易燃物时塞子漏气引起火灾。4.用三角烧瓶作减压装置的受器结果炸裂。5.加压操作结束后，放气太快，使压力记冲破。6.使用真空干燥器时，用完就直接开干燥器的放气阀，结果使泵内的机油被吸到干燥器中，样品被污染。7.实验室水槽易发生用抹布和碎拖布条堵塞而造成水灾。实验一葡萄糖杂质检查（实验代码7403080-1）（一般杂质检查）一、实验目的和任务1、实验目的：通过葡萄糖分析，了解药物的一般杂质检查的原理和意义。2、实验任务：熟悉杂质检查的操作方法。二、实验内容酸度、溶液澄清度与颜色、氯化物、硫酸盐、乙醇中不溶物、干燥失重、炽灼残渣、铁盐、重金属、砷盐的检查。三、实验仪器、设备及材料《药物分析》实验指导书-3-四、实验原理各检查项的检查原理，参见《药物分析》教材第三章第二节（第30-50页）。五、主要技术重点、难点1、技术重点：各检查项的操作方法和判定方法。2、技术难点：各检查项检查限量的计算。六、实验步骤1．酸度取本品2.0g，加水20ml溶解后，加酚酞指示液3滴与0.02mol/L氢氧化钠液0.20ml，应显粉红色。3．氯化物取本品0.30g，加水溶解使成10ml（如显碱性，可滴加硝酸使遇石蕊试纸显中性反应），再加稀硝酸5ml，溶液如不澄清，滤过，置试管中，加水适量使成约20ml，摇匀，即得供试品溶液。加硝酸银试液0.5ml，用水稀释使成25ml，摇匀，在暗处放置5min。如发生浑浊，与标准氯化钠溶液一定量制成的对照液[取标准氯化钠溶液（10μgCl/ml）3.0ml，置试管中，加稀硝酸5ml，加水稀释使成约20ml。加硝酸银试液0.5ml，再加水适量使成25ml，摇匀，在暗处放置5min]比较，不得更深（0.010％）。4．硫酸盐取本品1.0g，加水溶解使成20ml（如显碱性，可滴加盐酸使遇石蕊试纸显中性反应）。溶液如不澄清，滤过置试管中，加稀盐酸1ml，加25%氯化钡溶液2.5ml，加水稀释使成25ml，摇匀，放置10min，如发生浑浊，与对照标准液[取标准硫酸钾（100μgSO4/ml）溶液1ml，置试管中，加水稀释使成20ml，加稀盐酸1ml，加25%氯化钡溶液2.5ml，加水稀释使成25ml，摇匀，放置10min]比较，不得更浓（0.010%）。9．铁盐取本品1.0g，加水10ml溶解后，加硝酸2滴，缓缓煮沸5分钟，放冷，加水稀释使成20ml，加30%硫氰酸铵溶液1.5ml，摇匀，如显色，与标准铁溶液（10μgFe/ml）1.0ml，用同一方法制成的对照液比较，不得更深（0.001%）。注：①葡萄糖溶解而淀粉和糊精等不溶。②存在可溶性淀粉时呈蓝色，存在亚硫酸盐时碘液褪色。③在pH=3.5时PbS沉淀较完全。④氯化亚锡与锌作用，在锌粒表面形成锌锡齐，起去极化作用，从而使氢气均匀而连续发生。⑤如使用锌粒较大时，用量得酌情增加。七、实验报告要求1、应在规定的时间内完成实验报告。2、应按教务处规定的实验报告格式撰写实验报告。3、实验报告应根据实验过程的情况如实写作，认真分析，不得照抄实验指导。八、实验注意事项1、应注意实验室安全，按规定程序操作。2、应仔细观察实验现象，及时作好实验记录。九、思考题《药物分析》实验指导书-4-1、葡萄糖杂质检查药典规定测11项，是根据什么原则制定的？目的何在？2、什么叫杂质限量？如何计算？实验二盐酸普鲁卡因注射液的杂质检查（实验代码7403080-2）（特殊杂质检查）一、实验目的和任务1、实验目的：掌握本实验中药物特殊杂质的来源和检查原理。2、实验任务：掌握薄层层析法用于特殊杂质检查的一般操作。二、实验内容三、实验仪器、设备及材料四、实验原理五、主要技术重点、难点1、技术重点：薄层层析法的操作。2、技术难点：薄层层析结果的检识。六、实验步骤(1)薄层板的制备取硅胶H2g，加0.5%的羧甲基纤维素钠6ml，研磨至适宜稠度。均匀铺于光滑、平整、洁净的5×20cm板上（厚度0.3～0.4mm）。待自然干燥后，于105℃活化0.5小时，置干燥器内备用。(2)盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查取本品，加乙醇稀释成每1ml中含2.5mg的溶液，作为供试品溶液。精密量取氨基苯甲酸对照品，加乙醇稀释成每1ml中含30μg的溶液，作为对照液。照薄层层析法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶H薄层板上。以苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14：1：1：4）为展开剂，展开后，晾干，用二甲氨基苯甲醛溶液（2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸5ml制成）喷雾显色，供试品溶液如显与对照品相应的杂质斑点，其颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更深。七、实验报告要求1、应在规定的时间内完成实验报告。2、应按教务处规定的实验报告格式撰写实验报告。3、实验报告应根据实验过程的情况如实写作，认真分析，不得照抄实验指导。八、实验注意事项1、应注意实验室安全，按规定程序操作。2、应仔细观察实验现象，及时作好实验记录。3、薄层层析时，应注意：①点样采用微量注射器进行，在距薄层板底边2.0cm处开始，点样应少量多次点于同一原点处，原点面积应尽量小。《药物分析》实验指导书-5-②采用倾斜上行法展开，展开剂应浸入薄层板底边约1cm深度。③碱性四氮唑蓝试液应临用新配。新鲜试剂应呈黄色，颜色如变深者不宜使用。④显色后，应立即检视斑点，并用针头定位，以便记录图谱。九、思考题1、薄层层析法检查氢化可的松与黄体酮中其他甾体的原理是什么？为何用稀释液作对照呢？2、试计算三种药物的杂质限量？实验三维生素B1片剂的含量测定（实验代码7403080-5）（差示分光光度法）一、实验目的和任务1、实验目的：掌握差示分光光度法消除可能存在干扰的原理。2、实验任务：掌握ΔA法的基本测定方法。二、实验内容采用差示分光光度法测定维生素B1片中维生素B1的含量。三、实验仪器、设备及材料四、实验原理差示分光光度法（简称ΔA法），既保留了通常的分光光度法简易快速、直接读数的优点，又无需事先分离，并能消除干扰。其原理为在两种不同的pH介质中若经适当的化学反应后，供试品中待测组分发生了特征性的光谱变化，而赋形剂或其它共存物则不受影响，光谱行为不发生变化，从而消除了它们的干扰。在测定时，取两份相等的供试溶液，经不同的处理（如：调节不同的pH值或加入不同的反应试剂）后，一份置样品池中，另一份置参比池中，于适当的波长处，测其吸收度的差值（ΔA值），根据标准曲线或%11cmE值计算出组分的含量。《药物分析》实验指导书-6-图1差示吸收光谱五、主要技术重点、难点1、技术重点：差示分光光度法的具体测定方法。2、技术难点：差示分光光度法的原理。六、实验步骤1、测定波长的选择（根据实验条件选作）精密称取维生素B1100mg，用水溶解并稀释成100ml。精密量取2.0ml二份，分别用缓冲液（pH7.0）和盐酸液（pH2.0）稀释成100ml（浓度为0.002％）。以相应溶剂为空白，测定紫外吸收光谱再将前者放于参比池，后者放于样品池，绘制差示吸收光谱（见图1）。差示光谱图表明在247nm处有最大差示吸收值（A）。确定247nm为测定波长。2、标准曲线绘制（根据实验条件选作）精密称取干燥至恒重的维生素B1100mg，置100ml量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液，精密量取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml贮备液各二份，分别置50ml量瓶中。一份用缓冲液稀释至刻度；另一份用盐酸液稀释至刻度，摇匀，取上述五组浓度相同、pH不同的溶液，在247nm处分别测定差示吸收值（ΔA）。以浓度C为横坐标，以差示吸收值ΔA为纵坐标绘制标准曲线。3、样品的测定已片重为0.072g。精密称取0.2g维生素B1片粉末，（约相当于维生素B130mg），置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，弃去初滤液。精密量取续滤液2.0ml二份，分别置50ml量瓶中，分别用缓冲液和盐酸液稀释至刻度，摇匀。将前者置参比池中，后者置样品池中。在247nm波长处测定差示吸收值。由标准曲线求得维生素B1浓度，计算维生素B1片含量（标示量的百分数）。注：(1)缓冲液（pH7.0）：取磷酸二氢钾0.68g，加氢氧化钠（0.1mol/L）29.1ml，用水稀释至100ml，即得。(2)盐酸液（pH2.0）：取盐酸9ml，加水稀释成100ml。取10ml，加水稀释成1000ml，即得。(3)所给测定波长仅供参考，可照“测定波长的选择”项下自行测定。(4)本实验线性范围为10～30μg/ml，其回归方程：ΔA＝0.002＋0.0213C，r＝0.9996。七、实验报告要求1、应在规定的时间内完成实验报告。2、应按教务处规定的实验报告格式撰写实验报告。3、实验报告应根据实验过程的情况如实写作，认真分析，不得照抄实验指导。八、实验注意事项1、应注意实验室安全，按规定程序操作。2、应仔细观察实验现象，及时作好实验记录。九、思考题1、试述差示分光光度法如何消除干扰物的影响。2、差示分光光度发用于制剂分析或原料药测定，主要有哪几种方法类型？验四复方乙酰水