Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜 操作手册

Zeiss激光扫描共聚焦显微镜操作手册目录：1系统的组成系统组成及光路示意图实物照片说明2系统的使用2.1开机顺序2.2软件的快速使用说明2.3显微镜的触摸屏控制2.4关机顺序3系统的维护1系统的组成激光扫描共聚焦显微镜系统主要由：电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。系统组成及光路示意图：电脑工作站激光器电动荧光显微镜扫描检测单元实物照片说明：电动荧光显微镜扫描检测单元CO2培养系统控制器激光器电脑工作站2系统的使用2.1开机顺序（1）打开稳压电源（绿色按钮）等待2分钟（电压稳定）后，再开其它开关（2）主开关[MAINSWITCH]“ON”电脑系统[SYSTEMS/PC]“ON”扫描硬件系统[COMPONENTS]“ON”（3）打开[电动显微镜开关]打开[荧光灯开关]（注：具有5档光强调节旋钮）（4）Ar离子激光器主开关“ON”顺时针旋转钥匙至“—”预热等待约15分钟，将激光器[扳钮]由“Standby”扳至“Laserrun”状态，即可正常使用（5）打开[电脑开关]，进入操作系统注：键盘上也具有[电脑开关]2.2软件的快速使用说明（1）电脑开机进入操作系统界面后，双击桌面共聚焦软件ZEN图标（2）进入ZEN界面，弹出对话框：“StartSystem”——初始化整个系统，用于激光扫描取图、分析等。“ImageProcessing”——不启动共聚焦扫描硬件，用于已存图像数据的处理、分析。（3）软件界面：1功能界面切换：扫描取图（Acquisition）、图像处理（Processing）、维护（Maintain）（注：Maintain仅供Zeiss专业工程师使用）2动作按钮；3工具组（多维扫描控制）；4工具详细界面；5状态栏；6视窗切换按钮；7图像切换按钮；8图像浏览/预扫描窗口；9文档浏览/处理区域；10视窗中图像处理模块动作按钮：Single——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示。Start——开始扫描单张图片或一个实验流程（1组图片，如XYZ、XYT等）。Stop——暂停/结束扫描。New——建立一个新图像扫描窗口/文档。激光连接状况检查眼睛观察/相机/共聚焦LSM光路切换（ZEN软件界面右上角）：Ocular——通过观察筒用眼睛观察。（激光安全保护装置自动阻断激光、保护眼睛。）Camera——光路切换至相机。LSM——共聚焦扫描成像光路。显微镜设置：“Ocular”——“LightPath”——点击物镜图标，选择物镜——样品聚焦。透射光控制（TransmittedLightControl）反射光光闸控制（ReflectedLightShutter）荧光激发块选择（Reflector）共聚焦LSM扫描设置点击“LSM”（ZEN软件界面右上角），系统切换至共聚焦扫描光路：光路设置：SmartSetup——自动预设光路选取“荧光探针”、“颜色”、扫描方法，应用“Apply”。（注：Fastest为最快速扫描，多条激光谱线同时扫描。Bestsignal为最佳信号扫描，多条激光谱线顺序扫描。Bestcompromise为兼顾速度与信号的折中式扫描。）扫描图像参数设置：每个通道的精细调节：包括：（1）Pinhole的调节（一般设为1AU。该值越大，则信号越强，但共聚焦图像效果会降低。原则上，在保证图像质量的前提下，该值越接近于1AU越好）；（2）MasterGain的调节（增大则信号和噪音都增强，减小则信号和噪音均减小。原则上，在保证图像质量的前提下，Gain值越小越好）；（3）DigitalOffset的调节（可扣除背景噪音，但标本信号也有一定程度的扣除。原则上，在保证图像质量的前提下，DigitalOffset值越接近于0越好）；（4）DigitalGain的调节（增大则信号和噪音都增强，减小则信号和噪音均减小。原则上，在保证图像质量的前提下，Gain值越接近于1.0~1.2越好）；（5）另外，对于每个通道，需要灵活调节激光的强度（激光强度越高，则信号越强，但噪音也相应增强，同时标本更容易被漂白或淬灭。原则上，在保证图像质量的前提下，激光强度越低越好。）选择可连续扫描、一边预览图像效果、一边精细调节各个通道的扫描参数。如果预览图像的效果可以，则先“Stop”，再点击“Single”或“Start”即可完成图像的扫描。图像的保存：三种方法：（1）“File”菜单下，“Save”或者“SaveAS”。（2）点击右下角按钮。（3）点击工具栏按钮。（如图所示）另外，通过“File”菜单下的“Export”，也可将图像以其它格式输出。2.3显微镜的触摸屏控制显微镜可由TFT液晶触摸屏进行控制：由触摸屏“Home/主页”进入“Control/显微镜控制”界面，触摸屏常用控制界面：TFT触摸屏控制直观、便捷。Objectives物镜控制TL透射光光闸RL反射光光闸Reflector荧光激发块控制荧光观察时，需要选择相应的荧光激发块（或者激发波长、发射波长相近的荧光激发块）Lightpath光路设置触摸控制，可将光路切换至“Eyepiece”目镜观察筒，或者将光路切换至左侧共聚焦光路“SideportL”，或者将光路切换至前侧“Frontport”相机。2.4关机顺序：（1）关闭软件：主菜单“File”——“Exit”，退出共聚焦软件ZEN。（2）关闭主电脑操作系统、显示器电源。（3）关闭[荧光灯电源]。（4）关闭[电动显微镜电源]。（5）关闭Ar激光器：先将[扳钮]从“Laserrun”扳到“Standby”状态；再将[钥匙]逆时针从“—”旋转到“O”状态；等待约8-10分钟、激光器风扇停止转动后（切记！），将主开关按钮按到“OFF”。（6）扫描硬件系统[COMPONENTS]“OFF”电脑系统[SYSTEMS/PC]“OFF”主开关[MAINSWITCH]“OFF”（7）等[灯箱]充分冷却后，再放防尘罩。（8）如果系统长时间（超过5个小时）不使用，则关闭稳压电源。3系统的维护主要注意事项如下：（1）打开稳压电源时，应等待2分钟（电压稳定）后，再开其它开关。（2）严格遵守[激光器]的开、关流程（详见“2.1、2.4开/关机顺序”）。（3）如果使用过[油镜]，或者物镜表面较脏，则需用[擦镜纸]擦干净物镜的前表面（清洁液使用无水乙醇和无水乙醚的混合液，混合比例：无水乙醇30%、无水乙醚70%）。（4）不使用荧光时，不打开[荧光灯]。避免频繁开/关荧光灯。（5）必须等灯箱充分冷却后，再小心地盖上[防尘罩]。（6）显微镜可由[TFT触摸屏]控制，使用触摸屏时注意：①手指保持清洁、干燥状态，并且为了保证他人使用安全，触摸时严禁配戴有可能接触污染物或危险样品的手套；②触摸屏已足够灵敏，不要大力按压触摸屏；③不要旋转、插拔触摸屏。（7）刻录图像数据资料：应使用刻录光驱刻录，实验前应准备好刻录光盘。切记：为了防止计算机病毒，严禁在共聚焦电脑上使用U盘、硬动硬盘或者上网！！！（8）未经授权，严禁自行安装任何软件！！！（9）实验室温度应保持在22℃±2℃，湿度40%-60%。（10）避免空调直接对着显微镜吹风。（11）整个实验过程应注意保持显微镜周围环境清洁。