PRRS诊断与预防

PRRS诊断与预防Ss猪呼吸道疾病综合征--蓝耳病毒的危害免疫抑制，猪抵抗力下降流产率升高，产活仔数减少仔猪、小猪、母猪、种公猪死淘率升高种(公、母)猪繁殖力降低仔猪、生长肥育猪生长缓慢或停滞病原因子流感病毒、副黏病毒猪瘟病毒兰耳病伪狂犬病链球菌病猪传染性胸膜肺炎猪噬血杆菌猪圆环病毒猪副红细胞体病PRRS概况感染母猪流产、死胎、弱仔断奶仔猪呼吸道症状及死亡母猪产仔数和受胎率降低，小猪发育不良、生产性能及免疫力降低等尚无有效对策分布广泛PRRS概况已发现有PRRSV的国家：美洲：美国（1987）、加拿大（1987）欧洲：荷兰（1991）、英国、捷克、波兰、斯洛文尼亚、丹麦、德国、西班牙亚洲：日本（1994）、南韩、菲律宾、中国台湾和大陆PRRS概况美国：阳性群个体阳性率1987年：临床上发现1985年：3．8％9。6％1986年：40％20．8％1987年：37．5％32．4％1988年：63．9％47．6％1989年：83．3％51．7％1990年：18个州87个农场猪群阳性率达82．7％。目前：40-50%猪群感染欧州：目前有50%以上猪群感染1999~2003年猪繁殖与呼吸综合征抗体检测结果2003年83.3％猪场阳性率2003年：55.8％（阳性场：64.8％）样品阳性率64.5%70.1%76.5%86.0%0.0%20.0%40.0%60.0%80.0%100.0%1999年2000年2001年2002年系列137.6%44.1%52.8%59.5%0.0%50.0%100.0%1999年2000年2001年2002年1996年来PRRS在我国的分布一、猪繁殖和呼吸综合征诊断•临床症状•病理变化•病毒分离•病毒抗原检测•病毒抗体检测PRRS诊断--(1)临床症状1.繁殖猪群：急性发病期死亡、厌食、发热。无乳症、昏睡、皮肤变色。发病5％～50％。持续4～5个月，配种后22～109天流产，早产和产期延迟。仔常出现一窝内有死胎、木乃尹化胎儿，组织自溶胎儿、弱仔和健康仔。母猪还可出现延迟发情、持续性不发情。2.仔猪呼吸道症状：仔猪断乳前后发病率和死亡率升高，仔猪精神不振，“八”字腿站姿，生后1周内死亡，呼吸困难，咳嗽、厌食，皮肤损伤变兰，结膜炎，眼窝水肿，新生猪脐带出血，淤血红肿.3.公猪：症状与母猪相同；性欲降低、精子数量和活力降低。4.其它：健康状况不佳可持续整个育成期，零星发生死亡。对育成猪的影响难以估计。Don等（1996）报道在PRRS暴发期间和之后出生的仔猪肺部病变发生率从30％增加到70％，仔猪年生产能力降低5％～20％。但是大多数育成猪群可能感染PRRS而无临床症状。Ss临床症状多数猪场表现PRRSV的亚临床感染或慢性感染PRRSV侵袭的保育舍仔猪继发细菌或并发病毒感染则出现咳嗽、呼吸急促者增多肺炎、局限性肺炎腹泻率升高(20%)萎缩性鼻炎、链球菌病、流感严重性增加猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)早产的1日仔猪早产的一日龄仔猪SsSsSsSsSsSsSsSsSsSs放线杆菌胸膜肺炎Ss支原体肺炎PRRS诊断--(2)病理变化1.肺:小叶区域变红。大面积肺炎，呈间质性肺炎，主要局限于肺泡内，肺泡间隔增厚，含大量巨噬细胞、少量淋巴细胞和2型肺细胞增生。肺泡腔充满炎性细胞和坏死细胞碎片。肺泡巨噬细胞减少（从90%减少到35%）。2.流产胎儿：动脉炎、心肌炎和脑炎（血管周围出现巨噬细胞和淋巴细胞浸润）。3.其它：仔猪、育肥猪眼睑水肿，仔猪皮下水肿，体表淋巴结肿大，心包积液、水肿。有的流产胎儿和死胎也出现皮下水肿和心包积液。Ss猪繁殖与呼吸综合征病理变化新生仔猪及保育舍仔猪肺脏呈现：轻度至重度、多灶性至弥漫性、棕褐色斑点病变，不塌陷，有弹性间质性肺炎，单核细胞、肥大和增生的2型肺细胞、SsSsSsSs猪繁殖与呼吸综合征临床诊断14天内，出现如下3个指标：•流产或/和早产8%•死产胎儿20%产仔数•出生后1周内仔猪死亡率25%PRRS诊断--(3)病毒分离动脉炎病毒科(LDV,EAV,SHFV)球形,45-83nm(25-35nm)囊膜不稳定一、病毒特性：PRRS病毒分类*欧洲型PRRSV*美洲型PRRSVVarygenomically(genotype)Partlycross-reactionserologically突变重组PRRS病毒血清型和基因型*欧洲型PRRSV:欧洲；加拿大；日本*美洲型PRRSV：美洲；丹麦、斯洛文尼亚；亚洲美洲型毒株基因亚型PRRSV野毒株在有限区域或时间内很容易发生基因变异或重组基因亚型有多少？•据GP5基因序列，美洲株至少分为6个基因亚型Andreyev等（1997）•日本1991~1999年分离的37个野毒株分成了14个不同基因组。Itou等(2001)同一年份具有不同型毒株;同一农场有不同型毒株Dee等（2001）在一个有PRRSV慢性感染的1750头母猪的种猪场，经过对不同时期仔猪血清内PRRSV基因检测和病毒分离，发现该场PRRSV有A、B、C3个基因亚型，不同基因亚型PRRSVORF5基因差异为5.8%~11%，同一基因亚型内毒株基因同源性为98.%~99%主导基因亚型？如1-3-2-1RFLP类型，为日本主要流行毒株欧洲型毒株和美州型毒株间的重组概率比同型毒株间的重组概率小1万倍（VanVugt等，2001）。PRRS病毒结构蛋白GP5RNANGP2GP3GP4MORF2ORF3ORF4ORF5ORF6ORF7ORF2ORF3ORF4ORF5ORF6ORF7AnAnORF1abORF1abAn15.1kbGP2GP3GP4GP5MN771bp765bp537bp603bp525bp372bp750bp798bp552bp606bp522bp387bpGP2GP3GP4GP5MNAnAnAnAnAnAnAnmRNA1234567PRRSVVR2332LVORFsandSub-genomemRNAofPRRSVPRRS诊断--(3)病毒分离二、病料肺脏、脑、心、血清三、细胞Marc145、CL2621、PMA四、鉴定方法血清学：IFA,SN分子生物学：RT-PCR，DIG-Prob问题：疫苗病毒株的干扰病料问题(死胎的自溶等)PRRS诊断--(3)病毒抗原检查免疫组化法（McAb-SDOW17,SR30---FA免疫金、银、过氧化物酶组织冰冻切片，PMA原位杂交法(DIG-Prob,福尔马林固定切片)RT-PCRRT-PCR-RFLPPRRS诊断--(4)病毒抗体检测免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）间接荧光抗体（IFA）试验ELISASN问题：疫苗病毒抗体的干扰二、PRRSV免疫•细胞免疫•二次感染•持续感染方法产生时间(天)高峰期(天)维持时间(天)IFA9-1128-35158IPMA5-935-42324ELISA9-1328-42137SN9-2870-77356•体液免疫PRRSV在猪体内的分布PRRSVinfectionofimmunecellsforPRRSVreplication______________________________________PermissiveVirustitleTCID50--------------------------------------------------------------------------------------------巨噬细胞肺macrophagessubpopulation++++107Spleenmacrophsge+++106-107Brainnicroglis++++107Monocytesalone+/-104MM-CSF++104adherencetoendothelial++104淋巴细胞B-cells-104T-cells-104_____________________________________________________________________________________________StemcellMonblastPromoncytesCirculating单核细胞Migrating单核细胞骨髓血液巨噬细胞Interlukine-3Granulocyte/macrophageColonystimulatingfactorMacrophagecolonyStimulatingfactor单核巨噬细胞系统抗体反应方法产生时间(天)高峰期(天)维持时间(天)间接免疫荧光9-1128-35158IPMA5-935-42324ELISA9-1328-42137中和试验9-2870-77356PRRSV与其它病原体的相互作用临床资料数据表明，很多病原体与PRRSV同时存在于一个猪群或猪体。通常，由PRRSV单独感染造成的临床病理，仅表现为间质性肺炎，但临床上PRRSV引起的病理变化比较严重，说明PRRSV与其它病原体可能存在相互协同作用。SsPRRSV与其它病原的关系PRRSV增强猪对下列病原的易感性•传染性胸膜肺炎放线杆菌（APP）•巴氏杆菌（MP）•链球菌（SS）•猪霍乱沙门氏菌（S.Cholerasuis）•伪狂犬病毒（PRV）•呼吸道冠状病毒（PRCV）•流感病毒（SIV）Ss支原体与蓝耳病毒的关系支原体促进蓝耳病毒感染及加重感染的严重程度，延长蓝耳病毒持续感染的时间。Ss猪呼吸道疾病综合征(PRDC)--支原体与蓝耳病毒两种病原持续感染的猪场，肥育舍内具有发生“13-15周龄墙”、“18-20周龄墙”(PRDC)的潜在危险性两种病原对PRDC的发生具有协同和加强作用。1.病毒与病毒：•Groschup等（1996）通过检查猪群中欧洲型PRRSV、猪流感病毒（SIV）、猪呼吸道冠状病毒（PRCV）及猪副粘病毒（PPMV）抗体水平，发现：PRRSV与猪呼吸道冠状病毒、PRRSV与SIV亚型H1N1之间有重要联系。•日本、美国也发现：PRRSV与SIV间有协同关系。2.病毒与细菌•Zeman等（1996）分析了127个猪场的221个PRRSV病例中其它病原菌的感染情况，发现：58%病例存在严重肺部感染，感染菌包括多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌、链球菌、猪副嗜血杆菌等。1.Rovira等（2002）通过实验室感染试验，即将24头5周龄猪分为4组，分别接种PRRSV、PCV-2、PRRSV+PCV-2及空白对照组。结果发现，两个病毒混合接种组猪病理变化明显加重，PCV-2核酸量明显高于PCV-2单接种感染猪，证明PRRSV感染可促进PCV2增殖。2.Hans等（2001）用PCV-2和PRRSV人工感染猪试验，发现PCV2可加重PRRSV引起的支主管肺炎病理变化。加拿大和日本等国发现PRRSV感染猪群中有猪2型圆环病毒存在二次感染•放线菌•2型链球菌•嗜血杆菌•多杀性巴氏杆菌•伪狂犬病病毒•猪流感病毒持续感染•公猪：PRRSV-RNAdemonstratedinthesemenofboarsat92dpiwhentheserumamplewasnegative•母猪：SeaofpigscontainsPRRSV-RNAat210dayspostfarrowingPRRSVisolated：at157dpiafterinfection•其它猪：SPFpigs,commingledwithPRRSV-seronegativepigsthatexposedtoPRRSV22weekspreviously,hadclinicalsignsofPRRSVinfection灭活疫苗免疫效果______________________________________免疫组非免疫组---------------------------------------------------------母猪数1411仔猪总数137112每胎平均仔猪数9.710.18每胎平均健康仔猪数7.60.9每